胆囊癌及胆囊腺瘤中p53基因蛋白的检测
【摘要】 目的 探讨胆囊癌及胆囊腺瘤中抑癌基因p53蛋白的表达以及与癌发生的关系。方法 采用免疫组化技术检测了36例胆囊癌和23例胆囊腺瘤标本中p53蛋白的表达。结果胆囊癌中有19例p53蛋白阳性，阳性率为52.78%。胆囊腺瘤中有5例阳性，阳性率为21.74%。结论 p53基因蛋白的过度表达与胆囊癌的发生密切相关，p53基因突变及表达发生在胆囊癌的早期阶段并在胆囊腺瘤癌变过程中起重要作用。
关键词 胆囊癌 腺瘤 p53蛋白 免疫组织化学
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)10-1469-02
On the detection of gallbladder
cancer and p53gene protein adenoma
, http://www.100md.com Liang Xilin，Yin Jiyun，Zhao Hong，et al.
Department of Pathology，Henan Provincial Corps Hosiptal，Chinese People’s Armed Police Force，henzhou450052.
【Abstract】 Objective To investigate the expression of gallbladder cancer and its relationship with canceraˉtion.Methods Immunohistochemistry technique was used to detect the expression of p53protein in3
6cases of gallˉbladder cancer and23adenoma.Results p53protein were founded positive in19cases(52.78%)of gallbladder cancer in5cases(21.74%)of adenoma.Conclusion There is close relationship between the over expression and the canceration of gallbladder.p53gene mutation and over expression are in the early stage of g
, 百拇医药
allbladder cancer，and play an important role in the canceration of adenoma.
Key words gallbladder cancer adenoma protein p53 immunohistochemistry
近年来肿瘤分子生物学研究表明，肿瘤的发生发展是个多阶段、多步骤的过程，涉及到多种癌基因的激活和抑癌基因的失活，而且后者似乎起重要作用 [1] 。p53基因是重要的肿瘤抑制基因，许多人类肿瘤都伴有不同程度的p53基因突变 [2] 。突变的p53基因可引起细胞恶性增殖，导致肿瘤发生。本研究用免疫组化的方法检测p53蛋白在胆囊癌及胆囊腺癌中的表达，探讨p53在胆囊癌发生及胆囊腺瘤癌变过程中的作用。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 一般资料 标本为我院1995年6月～2002年5月间手术及腹腔镜摘除的胆囊癌36例，其中男16例，女20例，年龄44～83岁，平均年龄57岁。胆囊腺癌23例，男10例，女13例，年龄36～67岁，平均年龄49岁。
1.2 免疫组化染色 标本经福尔马林固定，石蜡包埋切片，切取5μm厚切片二张，分别作HE染色和采用ABC法作p53免疫组化染色。鼠抗人p53单克隆抗体DO-7，丹麦DAKO公司产品。按照ABC试剂盒(美国Vector公司)操作程序进行，DAB显色，苏木素复染。阴性对照以PBS代替一抗，阳性对照用已知p53蛋白阳性的胃癌组织。
1.3 结果判断 阳性为在细胞核内或胞浆内示棕色颗粒，按阳性细胞占肿瘤的百分比将其分为弱阳性(+)、中阳性(++)、强阳性(+++)。阳性细胞<20%的为弱阳性，20%～50%为中阳性。统计学采用χ 2 检验。
2 结果
, 百拇医药
2.1 p53蛋白的表达 36例胆囊癌组织中p53蛋白阳性表达的19例，阳性率为52.78%。其中弱阳性(+)5例，中阳性(++)8例，强阳性(+++)6例。23例胆囊腺瘤中有5例阳性，阳性率为21.74%，明显低于胆囊癌，两者差异有显著性(P<0.05)。
2.2 p53阳性与病理组织学关系 按常规组织学分级，将胆囊癌分为高、中、低分化癌，其中高分化癌7例，p53阳性3例(43.86%)，中分化癌18例，p53阳性9例(50%)，低分化癌11例，p53阳性7例(63.64%)。腺瘤轻度不典型增生的6例无p53阳性表达，腺瘤中、重度不典型增生13例，有3例阳性(23.08%)，腺瘤伴癌变的4例，有2例阳性表达(50%)。
3 讨论
野生型p53基因表达蛋白的半衰期甚短，一般检测方法难以检出，而当基因发生突变时其表达的蛋白结构发生改变，半衰期延长，因此免疫组化测得的p53蛋白为突变型蛋白 [3] 。野生型p53基因表达蛋白具有监视细胞基因组完整性的功能，当DNA出现损伤或缺陷时，它可通过特定机制对其进行修复，如修复失败，则通过诱导细胞凋亡的途径将该细胞清除，从而阻止具有癌变倾向的细胞在体内存留 [4] 。突变型p53蛋白在细胞内积聚促进细胞转化和增殖，导致肿瘤的发生。
, http://www.100md.com
在许多人类肿瘤中有p53蛋白过度表达，用免疫组化方法研究p53在胆囊癌中表达的报道中，p53蛋白过度表达的阳性率各不相同 [5] ，从30%～90%不等。但文献中极少提及胆囊腺瘤中p53蛋白的表达。本研究胆囊癌标本p53蛋白过表达的阳性率为52.78%，胆囊腺瘤p53蛋白阳性率21.74%，两者有明显差异(P<0.05)。腺瘤阳性细胞局限于明显不典型增生区及癌变细胞内。鉴于免疫组化方法检测的p53蛋白均属突变型，从而表明:在胆囊上皮的恶性转化过程中，p53基因突变具有重要意义，与胆囊癌的发生密切相关。一般认为，p53基因突变是肿瘤晚期阶段的事件，但本研究结果显示，在腺瘤下典型增生细胞和腺瘤癌变这一胆囊癌早期阶段就出现p53阳性表达。我们认为，p53基因突变及表达发生在胆囊癌的早期阶段，在腺瘤癌变过程中起着重要作用。
本实验结果还提示，p53蛋白的过度表达与肿瘤细胞的组织学分级有一定关系，高分化癌42.86%，中分化癌50%，低分化癌63.64%，阳性率有随肿瘤细胞分化程度的降低而增高的倾向，但统计学差异无显著(P>0.05)。腺瘤中p53蛋白的过表达有随细胞不典型增生程度增加而增高的趋势，这点仍有待于进一步研究探讨。
, http://www.100md.com
参考文献
1 王东旭，房殿春，罗元辉，等.胃癌组织17P13.3杂合性丢失及p53蛋白异常表达的研究.中华病理学杂志，1997，263):134-136.
2 李素风，刘鸿瑞，王德田.肺鳞状细胞癌中p53蛋白表达及p53基因突变的检测.中华病理学杂志，1998，27(2):123-126.
3 Donehower LA，Bradley A.The tumor suppressor p53.Biochem Biophys Acta，1993，1155:181-186.
4 Bennet WP，Hollstein MC，Metcalf RA，et al.p53mutation and protein accumulation during multistage human esophageal carcinogenesis.Cancer Res，1992，52:6092.
5 Washington K，Gottfried MR.Expression of p53in adenocarcinoma of the gallbladder and bile ducts.Liver，1996，16:99.
作者单位:450052郑州武警河南总队医院病理科
(编辑 小川), http://www.100md.com(梁喜林)
关键词 胆囊癌 腺瘤 p53蛋白 免疫组织化学
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)10-1469-02
On the detection of gallbladder
cancer and p53gene protein adenoma
, http://www.100md.com Liang Xilin，Yin Jiyun，Zhao Hong，et al.
Department of Pathology，Henan Provincial Corps Hosiptal，Chinese People’s Armed Police Force，henzhou450052.
【Abstract】 Objective To investigate the expression of gallbladder cancer and its relationship with canceraˉtion.Methods Immunohistochemistry technique was used to detect the expression of p53protein in3
6cases of gallˉbladder cancer and23adenoma.Results p53protein were founded positive in19cases(52.78%)of gallbladder cancer in5cases(21.74%)of adenoma.Conclusion There is close relationship between the over expression and the canceration of gallbladder.p53gene mutation and over expression are in the early stage of g
, 百拇医药
allbladder cancer，and play an important role in the canceration of adenoma.
Key words gallbladder cancer adenoma protein p53 immunohistochemistry
近年来肿瘤分子生物学研究表明，肿瘤的发生发展是个多阶段、多步骤的过程，涉及到多种癌基因的激活和抑癌基因的失活，而且后者似乎起重要作用 [1] 。p53基因是重要的肿瘤抑制基因，许多人类肿瘤都伴有不同程度的p53基因突变 [2] 。突变的p53基因可引起细胞恶性增殖，导致肿瘤发生。本研究用免疫组化的方法检测p53蛋白在胆囊癌及胆囊腺癌中的表达，探讨p53在胆囊癌发生及胆囊腺瘤癌变过程中的作用。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 一般资料 标本为我院1995年6月～2002年5月间手术及腹腔镜摘除的胆囊癌36例，其中男16例，女20例，年龄44～83岁，平均年龄57岁。胆囊腺癌23例，男10例，女13例，年龄36～67岁，平均年龄49岁。
1.2 免疫组化染色 标本经福尔马林固定，石蜡包埋切片，切取5μm厚切片二张，分别作HE染色和采用ABC法作p53免疫组化染色。鼠抗人p53单克隆抗体DO-7，丹麦DAKO公司产品。按照ABC试剂盒(美国Vector公司)操作程序进行，DAB显色，苏木素复染。阴性对照以PBS代替一抗，阳性对照用已知p53蛋白阳性的胃癌组织。
1.3 结果判断 阳性为在细胞核内或胞浆内示棕色颗粒，按阳性细胞占肿瘤的百分比将其分为弱阳性(+)、中阳性(++)、强阳性(+++)。阳性细胞<20%的为弱阳性，20%～50%为中阳性。统计学采用χ 2 检验。
2 结果
, 百拇医药
2.1 p53蛋白的表达 36例胆囊癌组织中p53蛋白阳性表达的19例，阳性率为52.78%。其中弱阳性(+)5例，中阳性(++)8例，强阳性(+++)6例。23例胆囊腺瘤中有5例阳性，阳性率为21.74%，明显低于胆囊癌，两者差异有显著性(P<0.05)。
2.2 p53阳性与病理组织学关系 按常规组织学分级，将胆囊癌分为高、中、低分化癌，其中高分化癌7例，p53阳性3例(43.86%)，中分化癌18例，p53阳性9例(50%)，低分化癌11例，p53阳性7例(63.64%)。腺瘤轻度不典型增生的6例无p53阳性表达，腺瘤中、重度不典型增生13例，有3例阳性(23.08%)，腺瘤伴癌变的4例，有2例阳性表达(50%)。
3 讨论
野生型p53基因表达蛋白的半衰期甚短，一般检测方法难以检出，而当基因发生突变时其表达的蛋白结构发生改变，半衰期延长，因此免疫组化测得的p53蛋白为突变型蛋白 [3] 。野生型p53基因表达蛋白具有监视细胞基因组完整性的功能，当DNA出现损伤或缺陷时，它可通过特定机制对其进行修复，如修复失败，则通过诱导细胞凋亡的途径将该细胞清除，从而阻止具有癌变倾向的细胞在体内存留 [4] 。突变型p53蛋白在细胞内积聚促进细胞转化和增殖，导致肿瘤的发生。
, http://www.100md.com
在许多人类肿瘤中有p53蛋白过度表达，用免疫组化方法研究p53在胆囊癌中表达的报道中，p53蛋白过度表达的阳性率各不相同 [5] ，从30%～90%不等。但文献中极少提及胆囊腺瘤中p53蛋白的表达。本研究胆囊癌标本p53蛋白过表达的阳性率为52.78%，胆囊腺瘤p53蛋白阳性率21.74%，两者有明显差异(P<0.05)。腺瘤阳性细胞局限于明显不典型增生区及癌变细胞内。鉴于免疫组化方法检测的p53蛋白均属突变型，从而表明:在胆囊上皮的恶性转化过程中，p53基因突变具有重要意义，与胆囊癌的发生密切相关。一般认为，p53基因突变是肿瘤晚期阶段的事件，但本研究结果显示，在腺瘤下典型增生细胞和腺瘤癌变这一胆囊癌早期阶段就出现p53阳性表达。我们认为，p53基因突变及表达发生在胆囊癌的早期阶段，在腺瘤癌变过程中起着重要作用。
本实验结果还提示，p53蛋白的过度表达与肿瘤细胞的组织学分级有一定关系，高分化癌42.86%，中分化癌50%，低分化癌63.64%，阳性率有随肿瘤细胞分化程度的降低而增高的倾向，但统计学差异无显著(P>0.05)。腺瘤中p53蛋白的过表达有随细胞不典型增生程度增加而增高的趋势，这点仍有待于进一步研究探讨。
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参考文献
1 王东旭，房殿春，罗元辉，等.胃癌组织17P13.3杂合性丢失及p53蛋白异常表达的研究.中华病理学杂志，1997，263):134-136.
2 李素风，刘鸿瑞，王德田.肺鳞状细胞癌中p53蛋白表达及p53基因突变的检测.中华病理学杂志，1998，27(2):123-126.
3 Donehower LA，Bradley A.The tumor suppressor p53.Biochem Biophys Acta，1993，1155:181-186.
4 Bennet WP，Hollstein MC，Metcalf RA，et al.p53mutation and protein accumulation during multistage human esophageal carcinogenesis.Cancer Res，1992，52:6092.
5 Washington K，Gottfried MR.Expression of p53in adenocarcinoma of the gallbladder and bile ducts.Liver，1996，16:99.
作者单位:450052郑州武警河南总队医院病理科
(编辑 小川), http://www.100md.com(梁喜林)