紫外分光光度法测定复方银杏胶囊中总黄酮含量
【摘要】 目的 测定复方银杏胶囊中总黄酮的含量，从而对本品质量进行控制。方法采用紫外分光光度法测定。结果 芦丁的线性范围为0.012～0.060mg/ml，回归方程为Y=12.4x-0.013相关系数r=0.9998，加样回收率为99.37%，RSD为0.8161%。结论 该法简便易行、快速、准确、可以成为本品的质量控制方法之一。
关键词 总黄酮 紫外分光光度法 含量测定
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)12-1093-02
Determination of flavonoids in compound ginkgo capsule by UV Wang Kuixing，Qi Yuan
The First People’s Hospital of Lianyungang of Jiangsu Province，Lianyungang222002.
, 百拇医药
【Abstract】 Objective To determine the flavonoids in compound Ginkgo Capsule，so as to control the quality of the drug.Methods UV menthod was used.ResultsThe calibration curve is linear in the range of0.012～0.06mg·ml-1 ，and regression equation was Y=12.4x-0.013(r=0.9998)for quercetin.The average recovery was99.37%with RSD=0.8161%.Conclusion The method is simple，quick and accurate forthe determination of the Compound Ginkgo Capsule，it can also be used as one of the quality control methods for the Compound Ginkgo Capˉsule.
, 百拇医药
Key words flavonoids UV method determination of content
复方银杏胶囊由银杏、绞股蓝等组成，复方银杏胶囊中主要含有黄酮、二萜内酯类、人参皂苷类等，现代药理研究表明银杏具有改善心脑血管循环，抑制血小板凝聚酶，抗菌、抗病毒、抗癌等作用 [1，2] ;绞股蓝具有显著降低血清脂质(包括总胆固醇，甘油三酯，低密度脂蛋白)和升高血清高密度脂蛋白作用，有防止脂质在血管壁的沉积，提高免疫功能，抑制糖皮质激素所引起的副作用等。近年来，法、德、日、意大利、比利时、韩国、美国等国相继研制银杏叶提取的各种制剂，成为欧洲老年病用药畅销药品;绞股蓝系葫芦植物绞股蓝Gynostemma pentphyuum(Thumb)Mak的干燥根状茎或全草，分布在我国南部，民间用滋补药，该药有多种绞股蓝皂苷，其中部分系人参皂苷，且享有“南方人参”的美称。
1 实验材料及超声筛选条件
, http://www.100md.com
1.1 752型紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂);复方银杏胶囊(解放军第102医院制剂中心生产);电子天平(上海仪器厂)，芦丁标准品(中国生物制品检验所);10%硝酸铝溶液，5%亚硝酸钠溶液，4%氢氧化钠溶液。
1.2 超声提取条件优选 为了能从胶囊内容物中最大限度地提取总黄酮，在超声提取时设计正交因素水平表，见表1;以最初提取液蒸干后的得率为指标衡量选择最佳条件，见表2，比较分析得最佳提取条件为每1.0g胶囊内容物用70%乙醇做溶剂超声提取。
表1 因素水平(略)
表2 超声提取条件正交分析结果 试验号溶剂用量(略)
经过分析等A3B1C2为最佳提取条件，即用20ml70%的乙醇超声提取10min2次。
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2 方法与结果
2.1 供试品试液和对照品试液的配置
2.1.1 供试品试液的配置 精密称取复方银杏胶囊内容物约0.3g置于50ml的容量瓶中，用70%乙醇溶解每次20ml，每次超声10min共2次超声溶解，过滤，收接滤液定量转移到50ml量瓶中，并用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，作供试液。
2.1.2 对照品试液的配置 精密称取芦丁对照品15mg置50ml量瓶中，加70%乙醇置刻度，摇匀，制成芦丁0.3mg/ml的对照品溶液备用。
2.2 测定波长的确定 以芦丁为对照品测定复方银杏胶囊中总黄酮的含量。精密取对照品液、供试品液各适量，分别加入到25ml容量瓶中，按2.3项下方法操作，并在400～600nm范围内扫描，结果均在500nm处有最大吸收波长，其它成分对测定无干扰，故选择500nm为测定波长[1] 。
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2.3 标准曲线的确定 精密吸取芦丁对照品(0.3mg/ml)0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置于25ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠1.0ml，摇匀、静置6min，再加入10%硝酸铝溶液1.0ml摇匀、静置6min，再加入4%氢氧化钠溶液5ml，加70%乙醇定容至刻度、摇匀、放置15min，用1cm比色池于500nm波长处测定吸收度，以0号作空白进行测定[1] 。记录500nm处测定各吸收波长并绘制曲线，芦丁对照品浓度在(0.012～0.060mg/ml)间成线性关系。计算回归方程为Y=12.4x-0.013 r=0.9998。
2.4 稳定性实验 取对照品试液一份每隔5min测1次其吸收度，结果3min内稳定，其RSD为0.2847%。
2.5 精密度试验 取同一批样品5份供试液分别在500nm处测其吸收度，其RSD为0.8226%。
, 百拇医药 2.6 重复性试验 精密吸取同一样品供试液5份，按照“标准曲线的测定”中的方法测定吸收度，计算测定结果含量为(%):9.711，9.677，9.728，9.778，9.879RSD=0.8048%。
2.7 样品的含量测定和计算 精密称取同一批样品5份各约0.3g分别加20ml70%乙醇、超声10min共2次后过滤收集滤液，精密吸取2ml再按“标准曲线的测定”中的方法测定吸收度，并计算复方银杏胶囊中总黄酮的含量以芦丁计算，见表3。
2.8 样品加样回收实验 精密吸取已知含量的芦丁标准品液(0.3mg/ml)各5ml分别加入到已知含量的样品0.3g 中、置于容量瓶中、分别加70%乙醇20ml超声10min共2次制成供试液分成5份，按“标准曲线的测定”中的方法测定吸收度，结果平均回收率99.37%，RSD=0.8161%。
表3 样品含量测定(略)
, 百拇医药
讨论
3.1 本文用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，主要是黄酮母核中含有碱性氧原子，一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物，又加入亚硝酸钠和氢氧化钠，使在碱性溶液中呈现红色，显色反应要及时测定，超过20min将对测定结果有影响[2]。
3.2 在实验过程中的绞股蓝总皂苷和银杏的其他成分对测定的结果无干扰，用70%的乙醇提取可以很好的除去胶囊中对测定干扰的成分[3]。
3.3 本研究采用紫外分光光度法对复方银杏胶囊中总黄酮进行了含量测定，该方法较国内外报道的用高效液相色谱法测定简便易行[1] ，快速，结果准确可靠，适用于基层单位。
参考文献
1 丁青龙，赵勇，刘树东.中国新药杂志，1997，6(1):455-457.
2 李仲琪.中药化学，上海:上海科学技术出版社，1997，331.
3 沙怀，陈桂先，马莉.中国药房，1995，6(5):13.
作者单位:1 222002江苏省连云港市第一人民医院
2 212004江苏省镇江市第三人民医院
(编辑 黄杰), http://www.100md.com(王奎兴)
关键词 总黄酮 紫外分光光度法 含量测定
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)12-1093-02
Determination of flavonoids in compound ginkgo capsule by UV Wang Kuixing，Qi Yuan
The First People’s Hospital of Lianyungang of Jiangsu Province，Lianyungang222002.
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【Abstract】 Objective To determine the flavonoids in compound Ginkgo Capsule，so as to control the quality of the drug.Methods UV menthod was used.ResultsThe calibration curve is linear in the range of0.012～0.06mg·ml-1 ，and regression equation was Y=12.4x-0.013(r=0.9998)for quercetin.The average recovery was99.37%with RSD=0.8161%.Conclusion The method is simple，quick and accurate forthe determination of the Compound Ginkgo Capsule，it can also be used as one of the quality control methods for the Compound Ginkgo Capˉsule.
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Key words flavonoids UV method determination of content
复方银杏胶囊由银杏、绞股蓝等组成，复方银杏胶囊中主要含有黄酮、二萜内酯类、人参皂苷类等，现代药理研究表明银杏具有改善心脑血管循环，抑制血小板凝聚酶，抗菌、抗病毒、抗癌等作用 [1，2] ;绞股蓝具有显著降低血清脂质(包括总胆固醇，甘油三酯，低密度脂蛋白)和升高血清高密度脂蛋白作用，有防止脂质在血管壁的沉积，提高免疫功能，抑制糖皮质激素所引起的副作用等。近年来，法、德、日、意大利、比利时、韩国、美国等国相继研制银杏叶提取的各种制剂，成为欧洲老年病用药畅销药品;绞股蓝系葫芦植物绞股蓝Gynostemma pentphyuum(Thumb)Mak的干燥根状茎或全草，分布在我国南部，民间用滋补药，该药有多种绞股蓝皂苷，其中部分系人参皂苷，且享有“南方人参”的美称。
1 实验材料及超声筛选条件
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1.1 752型紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂);复方银杏胶囊(解放军第102医院制剂中心生产);电子天平(上海仪器厂)，芦丁标准品(中国生物制品检验所);10%硝酸铝溶液，5%亚硝酸钠溶液，4%氢氧化钠溶液。
1.2 超声提取条件优选 为了能从胶囊内容物中最大限度地提取总黄酮，在超声提取时设计正交因素水平表，见表1;以最初提取液蒸干后的得率为指标衡量选择最佳条件，见表2，比较分析得最佳提取条件为每1.0g胶囊内容物用70%乙醇做溶剂超声提取。
表1 因素水平(略)
表2 超声提取条件正交分析结果 试验号溶剂用量(略)
经过分析等A3B1C2为最佳提取条件，即用20ml70%的乙醇超声提取10min2次。
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2 方法与结果
2.1 供试品试液和对照品试液的配置
2.1.1 供试品试液的配置 精密称取复方银杏胶囊内容物约0.3g置于50ml的容量瓶中，用70%乙醇溶解每次20ml，每次超声10min共2次超声溶解，过滤，收接滤液定量转移到50ml量瓶中，并用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，作供试液。
2.1.2 对照品试液的配置 精密称取芦丁对照品15mg置50ml量瓶中，加70%乙醇置刻度，摇匀，制成芦丁0.3mg/ml的对照品溶液备用。
2.2 测定波长的确定 以芦丁为对照品测定复方银杏胶囊中总黄酮的含量。精密取对照品液、供试品液各适量，分别加入到25ml容量瓶中，按2.3项下方法操作，并在400～600nm范围内扫描，结果均在500nm处有最大吸收波长，其它成分对测定无干扰，故选择500nm为测定波长[1] 。
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2.3 标准曲线的确定 精密吸取芦丁对照品(0.3mg/ml)0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置于25ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠1.0ml，摇匀、静置6min，再加入10%硝酸铝溶液1.0ml摇匀、静置6min，再加入4%氢氧化钠溶液5ml，加70%乙醇定容至刻度、摇匀、放置15min，用1cm比色池于500nm波长处测定吸收度，以0号作空白进行测定[1] 。记录500nm处测定各吸收波长并绘制曲线，芦丁对照品浓度在(0.012～0.060mg/ml)间成线性关系。计算回归方程为Y=12.4x-0.013 r=0.9998。
2.4 稳定性实验 取对照品试液一份每隔5min测1次其吸收度，结果3min内稳定，其RSD为0.2847%。
2.5 精密度试验 取同一批样品5份供试液分别在500nm处测其吸收度，其RSD为0.8226%。
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2.7 样品的含量测定和计算 精密称取同一批样品5份各约0.3g分别加20ml70%乙醇、超声10min共2次后过滤收集滤液，精密吸取2ml再按“标准曲线的测定”中的方法测定吸收度，并计算复方银杏胶囊中总黄酮的含量以芦丁计算，见表3。
2.8 样品加样回收实验 精密吸取已知含量的芦丁标准品液(0.3mg/ml)各5ml分别加入到已知含量的样品0.3g 中、置于容量瓶中、分别加70%乙醇20ml超声10min共2次制成供试液分成5份，按“标准曲线的测定”中的方法测定吸收度，结果平均回收率99.37%，RSD=0.8161%。
表3 样品含量测定(略)
, 百拇医药
讨论
3.1 本文用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，主要是黄酮母核中含有碱性氧原子，一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物，又加入亚硝酸钠和氢氧化钠，使在碱性溶液中呈现红色，显色反应要及时测定，超过20min将对测定结果有影响[2]。
3.2 在实验过程中的绞股蓝总皂苷和银杏的其他成分对测定的结果无干扰，用70%的乙醇提取可以很好的除去胶囊中对测定干扰的成分[3]。
3.3 本研究采用紫外分光光度法对复方银杏胶囊中总黄酮进行了含量测定，该方法较国内外报道的用高效液相色谱法测定简便易行[1] ，快速，结果准确可靠，适用于基层单位。
参考文献
1 丁青龙，赵勇，刘树东.中国新药杂志，1997，6(1):455-457.
2 李仲琪.中药化学，上海:上海科学技术出版社，1997，331.
3 沙怀，陈桂先，马莉.中国药房，1995，6(5):13.
作者单位:1 222002江苏省连云港市第一人民医院
2 212004江苏省镇江市第三人民医院
(编辑 黄杰), http://www.100md.com(王奎兴)