HBV标志物检测结果差错的分析与对策
【摘要】 目的 探讨解决乙型肝炎病毒(HBV)标志物检测五项指标结果判定出现假阴性、假阳性的方法。方法 本分析出现差错的原因。结果 我院对此采取的措施，包括:HBV标志物五项指标灰度范围在计算机程序上的设定;五项指标检测阴、阳性结果及OD值在计算机处理系统集中显示;制定“三查七对把七关、全部机洗+质控”的检测质量控制等杜绝差错的具体措施。此措施经临床近2年7万余标本的应用实践，效果良好，杜绝了假阴性、假阳性的错误结果报告，明显提高了标本检测质量。结论 严格把关，计算机化管理可以提高HBV标志物检测结果精确率。
关键词 HBV标志物检测 计算机处理系统 差错分析
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)12-1789-02
Analysis and countermeasure of errors occurred
, http://www.100md.com
in the HBV marker detection
Wu Shumei，Lei Changhai，Zhu Zhinian，et al.
Department of Laboratory Diagnosis，Changhai Hospital，Second Military Medical University，Shanghai 200433.
【Abstract】 Objective To avoid the occurrence of false-negative and false-positive cases in the HBV marker detection.Methods In this paper，the probable reasons were analyzed and the countermeasures carried out in our hospital were introduced specially.Results These countermeasures include:(1)The setting of grayness range of five markers in the computer program;(2)The centralized display of negative，positive results and OD value of the HBV markers;(3)The specific measures，such as the repeated check，total washing with machine and quality control and so on.In the past two years，the20，000samples have been operated using above-mentioned measures.The reˉsults suggested that the false-negative and false-positive cases were eliminated.The detection quality
, 百拇医药
was enhanced significantly.Conclusion Computerized management of HBV marker detection would be valuable to improve the quality of clinical test.
Key words HBV marker detection computer processing system mistake analysis
为探索避免乙型肝炎病毒(HBV)标志物检测五项指标结果判定出现假阴性、假阳性的方法，本文分析了出现差错的原因，现报告如下。
1 差错分析
传统的HBV标志物(俗称三抗、二对半)检测方法，容易出现的假阴性、假阳性错误结果，直接影响医生对疾病的诊断和病程判断，对此，患者反应也极为强烈，成了全国多家医院应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HBV标志物五项指标:表面抗原(HBsAg)、表面抗体(抗-HBs)、e抗原(HBeAg)、e抗体(抗-HBe)、核心抗体(抗-HBc)的一大难题。究其原因，除由试剂盒的质量问题所造成的系统误差，检验人员的操作或实验条件某个环节造成的系统误差和偶然误差以外，最主要的原因还有如下两种。
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1.1 固定临界值导致差错 以试剂盒标定的临界值为标准，酶标仪比色所判定阴、阳性结果，是出现假阳性、假阴性结果差错最主要和最根本的原因。目前，临床应用的酶标仪自带程序的设定，均以试剂盒临界值为标准判定HBV标志物五项指标的阴、阳性结果，这种硬性判定方法很容易出现假阳性、假阴性等差错。例如，HBsAg的结果判定，试剂盒的临界值标准为0.105，标本检测结果OD值在0.104以下即判断为阴性，OD值在0.105以上即判断为阳性，结果完全依据此阴阳标准报结果显然不妥。从我们长期临床实践来看，标本OD值在临界值附近范围的均可能会出现假阴性、假阳性的结果。原因是:酶联免疫吸附试验是一个与放射免疫、化学发光免疫等方法相比稳定性较差的试验，容易受温度、人工加样的准确性、洗涤的彻底性等一系列因素的影响，而使检验结果出现一定程度的偏差，以致于出现假阴性、假阳性。介于以上原因，那么，标本检测结果OD值在0.104或OD值更低一些的，比如OD值在0.07～0.104之间的可能部分标本就是假阴性，OD值在0.105或更高一些，比如OD值在0.105～0.3之间的可能部分标本就是假阳性。要将这种OD值的阴、阳性结果处理正确，试验的操作人员和结果的审核人员除需要高度的责任心和娴熟的技术以外，还要具备一定的临床知识及对HBV血清标志物各阳性模式的理解，才能较好地对一个OD值及近临界值上下标本的阴、阳性结果做出判断。因此，以临界值为标准，酶标仪比色硬性判定阴、阳性所报结果，是出现假阳性、假阴性最主要和最根本的原因。
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1.2 人工操作易出现差错 人工报结果不但费时费力，也是出现差错的重要原因。HBV标志物五项指标的检测，目前，多为所有标本经酶标仪比色后OD值单项指标全部打印在一张纸上，操作人员逐项分别读报、盖章的人工报结果方式，例如HBsAg，甲人根据酶标仪打印的阴、阳性结果读报，乙人用图章将结果盖到每个报告单上，一项指标读报、盖章完成，再进行下一个指标，每张报告单需分别读报、盖章5次，如果每天200个标本，就要读报、盖章1000次。因为酶标仪打印的结果不能设置各项指标的灰度范围，可疑标本没有可见灰度范围文字提示，因此，这种打印方式实际就是结合标本的OD值和临界值，报告者人眼判读、人工报结果，甲乙两人都可能因一时的疏忽而人为造成报告结果的错误，不但工作量大、费时费力，也是出现差错的重要原因。
2 对策
2.1 设定HBV标志物检测五项指标灰度范围 为了提高检测质量，我们参照卫生部和上海市卫生局质量控制中心的质控要求，根据试剂盒临界值标准的计算和质控品的质控范围，我们将近2年检测的近7万个血清标本中，因结果在临界值附近而复检的前后结果进行统计学处理，分别在计算机程序上设定了HBV标志物五项指标的灰度范围的统一标准 [1] 。
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2.1.1 HBsAg灰度范围 以临界值0.105为标准，灰度范围设定在0.07～0.3之间，即标本OD值在0.07～0.104之间的判断为可疑，有警示号提示标本复查;OD值在0.105～0.3之间的判为弱阳性，有警示号提示标本复查;OD值在0.3以上判断为阳性。
2.1.2 抗-HBs灰度范围 以临界值0.105为标准，灰度范围设定在0.105～0.3之间，即标本OD值在0.105～0.2之间的判断为阴性(因此范围检测结果在批间实验和不同试剂盒检测变异很大，且此低滴度的抗体水平对临床无太大意义);OD值在0.2～0.3之间判断为弱阳性;OD值在0.3以上判断为阳性。
2.1.3 HBeAg灰度范围 同HBsAg。
2.1.4 抗-HBe、抗-HBc灰度范围 以临界值(COV)为标准，COV-标本OD值≤0.2的判断为阴性(原因同抗-HBs)，有警示号提示;0.20.3的判断为阳性。
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2.2 HBV标志物五项指标检测结果的计算机处理 综上所述，ELISA法检测，原始的打印和报告方式已不能满足现代化医院对HBV标志物检测的效率和质量的要求。建立一套高效先进，检测准确的ELISA法计算机处理系统，是杜绝差错的根本办法。为此，我们研制了“HBV”血清标志物检测结果报告计算机处理系统” [2，3] ，该系统实现了判定标准统一，减少人为判定差异;每一检测标本的五项检测指标 集中显示，一目了然，便于查验;对标本检测OD值在灰度范围内的提供红色醒目的文字“注意”警示提示，便于可疑标本的把关复检，避免错检;对于不符合临床模式的少见模式标本结果，提供警示信息，避免漏检;每天随标本同板检测的质控指标同步显示，一旦失控，以醒目文字提示系统误差或偶然误差的差值，确保检测质量，并保存每日质控值，可自动生成质控曲线;原始检测OD值以数据库方式存储，便于收集历史资料;与医院网络中心数据库连结，医生在线即可查看检验结果，有利病人的疾病快速诊断;自动读取、处理、打印结果，大幅度降低了检验人员工作强度，明显提高了工作效率和质量。
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2.3 操作原则 为了防止人为的偶然误差及差错，我们还制定了“三查七对把七关、全部机洗+质控”的HBV标志物检测质量控制工作步骤和具体方法 [4] 。
2.3.1 三查 (1)日期，姓名;(2)前S1;(3)丙、丁、戊、HBV-DNA(因以上检测内容和三抗均在一张化验单上，防止三抗报告发出而造成这些项目漏检)。
2.3.2 七对 (1)排标本时对连号;(2)加样时对标本号;(3)加样后对连号;(4)报完结果时对大、小三阳抗原位置号;(5)发报告前对大、小三阳标本连号;(6)前一天留下来复查的标本对连号;(7)当天留下来复查的标本对连号。
2.3.3 七关 严把试剂的选用与保管、血标本分离一人一棒、加样及预温温度、酶标反应板全部机洗、酶标仪判读结果、计算机进行模式监控、质控品随板检测的质量控制七关。
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以上措施经临床应用实践，把关效果良好，7万个标本没发出1例假阳性、假阴性的错误报告，杜绝了系统误差和偶然误差，特别是在计算机程序上设定了五项指标集中显示模式和各指标的灰度范围提示及少见模式文字提示，对提高临床检验质量起到了极为关键性的作用。
参考文献
1 吴淑梅，雷长海，张乐平，等.计算机辅助HBV标志物检测系统研制成功并应用于临床.第二军医大学学报，2003，24(6):594.
2 吴淑梅，雷长海，朱志年，等.HBV血清标志物检测结果报告计算机处理系统的开发和临床应用.医疗卫生装备，2003，(6):61-62.
3 雷长海，吴淑梅，张乐平，等.酶标仪检测处理系统的开发研究.医疗卫生装备，2003，(7):22-23.
4 吴淑梅，惠小阳，张乐之，等.乙型肝炎病毒标志物检验的质量控制.解放军医院管理杂志，2003，10(1):42-43.
作者单位:1 200433第二军医大学长海医院实验诊断科
2 第二军医大学计算机教研室
(编辑 小川), 百拇医药
关键词 HBV标志物检测 计算机处理系统 差错分析
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)12-1789-02
Analysis and countermeasure of errors occurred
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in the HBV marker detection
Wu Shumei，Lei Changhai，Zhu Zhinian，et al.
Department of Laboratory Diagnosis，Changhai Hospital，Second Military Medical University，Shanghai 200433.
【Abstract】 Objective To avoid the occurrence of false-negative and false-positive cases in the HBV marker detection.Methods In this paper，the probable reasons were analyzed and the countermeasures carried out in our hospital were introduced specially.Results These countermeasures include:(1)The setting of grayness range of five markers in the computer program;(2)The centralized display of negative，positive results and OD value of the HBV markers;(3)The specific measures，such as the repeated check，total washing with machine and quality control and so on.In the past two years，the20，000samples have been operated using above-mentioned measures.The reˉsults suggested that the false-negative and false-positive cases were eliminated.The detection quality
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was enhanced significantly.Conclusion Computerized management of HBV marker detection would be valuable to improve the quality of clinical test.
Key words HBV marker detection computer processing system mistake analysis
为探索避免乙型肝炎病毒(HBV)标志物检测五项指标结果判定出现假阴性、假阳性的方法，本文分析了出现差错的原因，现报告如下。
1 差错分析
传统的HBV标志物(俗称三抗、二对半)检测方法，容易出现的假阴性、假阳性错误结果，直接影响医生对疾病的诊断和病程判断，对此，患者反应也极为强烈，成了全国多家医院应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HBV标志物五项指标:表面抗原(HBsAg)、表面抗体(抗-HBs)、e抗原(HBeAg)、e抗体(抗-HBe)、核心抗体(抗-HBc)的一大难题。究其原因，除由试剂盒的质量问题所造成的系统误差，检验人员的操作或实验条件某个环节造成的系统误差和偶然误差以外，最主要的原因还有如下两种。
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1.1 固定临界值导致差错 以试剂盒标定的临界值为标准，酶标仪比色所判定阴、阳性结果，是出现假阳性、假阴性结果差错最主要和最根本的原因。目前，临床应用的酶标仪自带程序的设定，均以试剂盒临界值为标准判定HBV标志物五项指标的阴、阳性结果，这种硬性判定方法很容易出现假阳性、假阴性等差错。例如，HBsAg的结果判定，试剂盒的临界值标准为0.105，标本检测结果OD值在0.104以下即判断为阴性，OD值在0.105以上即判断为阳性，结果完全依据此阴阳标准报结果显然不妥。从我们长期临床实践来看，标本OD值在临界值附近范围的均可能会出现假阴性、假阳性的结果。原因是:酶联免疫吸附试验是一个与放射免疫、化学发光免疫等方法相比稳定性较差的试验，容易受温度、人工加样的准确性、洗涤的彻底性等一系列因素的影响，而使检验结果出现一定程度的偏差，以致于出现假阴性、假阳性。介于以上原因，那么，标本检测结果OD值在0.104或OD值更低一些的，比如OD值在0.07～0.104之间的可能部分标本就是假阴性，OD值在0.105或更高一些，比如OD值在0.105～0.3之间的可能部分标本就是假阳性。要将这种OD值的阴、阳性结果处理正确，试验的操作人员和结果的审核人员除需要高度的责任心和娴熟的技术以外，还要具备一定的临床知识及对HBV血清标志物各阳性模式的理解，才能较好地对一个OD值及近临界值上下标本的阴、阳性结果做出判断。因此，以临界值为标准，酶标仪比色硬性判定阴、阳性所报结果，是出现假阳性、假阴性最主要和最根本的原因。
, 百拇医药
1.2 人工操作易出现差错 人工报结果不但费时费力，也是出现差错的重要原因。HBV标志物五项指标的检测，目前，多为所有标本经酶标仪比色后OD值单项指标全部打印在一张纸上，操作人员逐项分别读报、盖章的人工报结果方式，例如HBsAg，甲人根据酶标仪打印的阴、阳性结果读报，乙人用图章将结果盖到每个报告单上，一项指标读报、盖章完成，再进行下一个指标，每张报告单需分别读报、盖章5次，如果每天200个标本，就要读报、盖章1000次。因为酶标仪打印的结果不能设置各项指标的灰度范围，可疑标本没有可见灰度范围文字提示，因此，这种打印方式实际就是结合标本的OD值和临界值，报告者人眼判读、人工报结果，甲乙两人都可能因一时的疏忽而人为造成报告结果的错误，不但工作量大、费时费力，也是出现差错的重要原因。
2 对策
2.1 设定HBV标志物检测五项指标灰度范围 为了提高检测质量，我们参照卫生部和上海市卫生局质量控制中心的质控要求，根据试剂盒临界值标准的计算和质控品的质控范围，我们将近2年检测的近7万个血清标本中，因结果在临界值附近而复检的前后结果进行统计学处理，分别在计算机程序上设定了HBV标志物五项指标的灰度范围的统一标准 [1] 。
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2.1.1 HBsAg灰度范围 以临界值0.105为标准，灰度范围设定在0.07～0.3之间，即标本OD值在0.07～0.104之间的判断为可疑，有警示号提示标本复查;OD值在0.105～0.3之间的判为弱阳性，有警示号提示标本复查;OD值在0.3以上判断为阳性。
2.1.2 抗-HBs灰度范围 以临界值0.105为标准，灰度范围设定在0.105～0.3之间，即标本OD值在0.105～0.2之间的判断为阴性(因此范围检测结果在批间实验和不同试剂盒检测变异很大，且此低滴度的抗体水平对临床无太大意义);OD值在0.2～0.3之间判断为弱阳性;OD值在0.3以上判断为阳性。
2.1.3 HBeAg灰度范围 同HBsAg。
2.1.4 抗-HBe、抗-HBc灰度范围 以临界值(COV)为标准，COV-标本OD值≤0.2的判断为阴性(原因同抗-HBs)，有警示号提示;0.2
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2.2 HBV标志物五项指标检测结果的计算机处理 综上所述，ELISA法检测，原始的打印和报告方式已不能满足现代化医院对HBV标志物检测的效率和质量的要求。建立一套高效先进，检测准确的ELISA法计算机处理系统，是杜绝差错的根本办法。为此，我们研制了“HBV”血清标志物检测结果报告计算机处理系统” [2，3] ，该系统实现了判定标准统一，减少人为判定差异;每一检测标本的五项检测指标 集中显示，一目了然，便于查验;对标本检测OD值在灰度范围内的提供红色醒目的文字“注意”警示提示，便于可疑标本的把关复检，避免错检;对于不符合临床模式的少见模式标本结果，提供警示信息，避免漏检;每天随标本同板检测的质控指标同步显示，一旦失控，以醒目文字提示系统误差或偶然误差的差值，确保检测质量，并保存每日质控值，可自动生成质控曲线;原始检测OD值以数据库方式存储，便于收集历史资料;与医院网络中心数据库连结，医生在线即可查看检验结果，有利病人的疾病快速诊断;自动读取、处理、打印结果，大幅度降低了检验人员工作强度，明显提高了工作效率和质量。
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2.3 操作原则 为了防止人为的偶然误差及差错，我们还制定了“三查七对把七关、全部机洗+质控”的HBV标志物检测质量控制工作步骤和具体方法 [4] 。
2.3.1 三查 (1)日期，姓名;(2)前S1;(3)丙、丁、戊、HBV-DNA(因以上检测内容和三抗均在一张化验单上，防止三抗报告发出而造成这些项目漏检)。
2.3.2 七对 (1)排标本时对连号;(2)加样时对标本号;(3)加样后对连号;(4)报完结果时对大、小三阳抗原位置号;(5)发报告前对大、小三阳标本连号;(6)前一天留下来复查的标本对连号;(7)当天留下来复查的标本对连号。
2.3.3 七关 严把试剂的选用与保管、血标本分离一人一棒、加样及预温温度、酶标反应板全部机洗、酶标仪判读结果、计算机进行模式监控、质控品随板检测的质量控制七关。
, http://www.100md.com
以上措施经临床应用实践，把关效果良好，7万个标本没发出1例假阳性、假阴性的错误报告，杜绝了系统误差和偶然误差，特别是在计算机程序上设定了五项指标集中显示模式和各指标的灰度范围提示及少见模式文字提示，对提高临床检验质量起到了极为关键性的作用。
参考文献
1 吴淑梅，雷长海，张乐平，等.计算机辅助HBV标志物检测系统研制成功并应用于临床.第二军医大学学报，2003，24(6):594.
2 吴淑梅，雷长海，朱志年，等.HBV血清标志物检测结果报告计算机处理系统的开发和临床应用.医疗卫生装备，2003，(6):61-62.
3 雷长海，吴淑梅，张乐平，等.酶标仪检测处理系统的开发研究.医疗卫生装备，2003，(7):22-23.
4 吴淑梅，惠小阳，张乐之，等.乙型肝炎病毒标志物检验的质量控制.解放军医院管理杂志，2003，10(1):42-43.
作者单位:1 200433第二军医大学长海医院实验诊断科
2 第二军医大学计算机教研室
(编辑 小川), 百拇医药