小檗胺和鲨肝醇在升白时对乳酸脱氢酶活性影响的比较
【摘要】 目的 研究小檗胺和鲨肝醇升高白细胞作用及对细胞内LDH的代谢的影响。方法 采用酶细胞化学方法，对两种药物在治疗由免疫抑制剂环磷酰胺所致的白细胞减少症时，对乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响进行了比较观察。结果 小檗胺和鲨肝醇均可升高粒细胞，同时对细胞内LDH的代谢有一定的影响。结论 小檗胺和鲨肝醇能使外周血粒细胞增加，可用于治疗多种因素引起的白细胞减少症。
关键词 小檗胺 鲨肝醇 白细胞 LDH
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)13-1954-03
Comparison on the effect of berbamine and batiolun on LDH
metabolizabilityin the process of increasing leukocyte
, 百拇医药
Zhao Yuxia，Yu Xiaoming
Xing’an People’s Hospital，Inner Mongolia137400.
【Abstract】 Objective To study the effects of berbamine and batiolun on LDH metabolizability in the process of increasing leukocyte.Methods Enzyme biochemical techniques is used to study the effect of berbamine and batiolˉun in the process of inceasing leukocyte and also to study the effect of LDH metabolizability.Results When leukocyte is inhibited by the immune inhibitor cycolophosphamcide，berbamine and batiolun are compared of the effect of LDH activity.ConclusionThe study draws the conclusion that both berbamine and batiolun can increase thegranule cell，and they also have some effect of the LDH metabolizability.
, 百拇医药
Key words berbamine batiolun leukocyte LDH
近年来，随着中医药研究的不断深入，机体的重要组成成分—酶与药物作用的关系越来越受到重视，其中对中药有效成分的研究更为引人注目，了解其对机体酶活性的影响是研究和探讨中药有效成分作用机制所不可缺少的 [1]。 本文选用的小檗胺(Berbamine，Ber)是小檗属植物的干燥根中提取的一种双苄基异喹啉生物碱。具有清热燥湿、泻火解毒等功效;鲨肝醇(Batiolum)为动物体内的正常成分，多存在于造血系统中。两种药物均具有升高白细胞的作用，常用于治疗多种因素引起的白细胞减少症。笔者用酶细胞化学方法对两种药物在治疗由免疫抑制剂环磷酰胺所致的白细胞减少症时，对乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响进行了比较观察。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 小檗胺:为白色结晶粉末(纯度97%以上)，由中国科学院林业土壤研究所提供，使用前以无菌生理盐水配制成所需浓度。鲨肝醇(化学名称3-(十八烷氧)-1，2-丙二醇):上海延安制药厂生产，使用前以生理盐水配制。环磷酰胺(Cycolophosphamide):上海第二制药厂生产，使用前以无菌生理盐水配制成所需浓度。NAD、PMS(吩嗪甲硫酸酯)、NBT(硝基蓝四氮盐)为sigma公司产品。 其余均为国产试剂。
, 百拇医药
1.2 实验动物及分组 昆明种小鼠，由大连医科大学实验动物中心提供。(20±2)g，雌雄不分，随机分组，每组10只。(1)对照组:腹腔注射生理盐水0.2ml/只，每日1次。(2)环磷酰胺组:1%环磷酰胺-生理盐水溶液，腹腔注射，最终浓度为每日50mg/kg。(3)小檗胺组:连续给予环磷酰胺(终浓度同上)7天后，腹腔注射给予小檗胺溶液，最终浓度为每日2.5mg/kg。(4)鲨肝醇组:连续给予环磷酰胺(终浓度同上)7天后，灌胃法给予1%鲨肝醇溶液，每日550mg/kg体重/日。
1.3 白细胞总数及分类检测 各组动物均连续给药10天。于给药第7天取尾静脉血，用PC-603自动测定仪测定白细胞总数，同时涂片，Giemsa染色进行白细胞分类计数。
1.4 细胞内LDH活性测定 取小鼠尾静脉血涂片，以四唑盐法 [2] 进行LDH染色，观察各组小鼠用药后第3、第7、第10天的末梢血中粒细胞、淋巴细胞内LDH的活性变化。并通过HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告分析系统测定阳性反应的灰度值。
, 百拇医药
2 结果
2.1 升高白细胞的作用 结果见表1。表1 白细胞总数及分类 (略) 注:与对照组比较 ˇ P<0.05表中结果分析可见，小檗胺和鲨肝醇对由环磷酰胺所致的白细胞减少症均有升高白细胞的作用，第7天可达正常水平，并以粒细胞增加明显，与对照组差异有显著性。
2.2 对末梢血细胞LDH活性的影响
2.2.1 对粒细胞乳酸脱氢酶活性的影响 见表2。
表2 对粒细胞乳酸脱氢酶活性影响分析(ˉx±s) 注:与对照组比较ˇ P<0.05
表中结果分析可见，给予小檗胺后，粒细胞LDH活性增强，且与用药时间呈正相关，组内比较差异有显著性(P<0.05);给予鲨肝醇第3天，粒细胞LDH酶活性明显高于对照组(P<0.05)，随用药时间的延长，LDH活性水平有所 下降，第10天时，与小檗胺相似;小檗胺组和鲨肝醇组总体LDH活性均高于对照组和环磷酰胺组，差异有显著性(P<0.05)。
, 百拇医药
2.2.2 对淋巴细胞乳酸脱氢酶活性的影响 见表3。表3 对淋巴细胞乳酸脱氢酶活性影响分析 (略)
表3结果分析可见，小檗胺和鲨肝醇对淋巴细胞LDH活性的影响不明显，组内与组间比较差异均无显著性(P>0.05)。
3 讨论
小檗胺和鲨肝醇分别是从植物和动物提取的药用有效成分，两种药物均具有升高白细胞的作用，常用于治疗多种因素引起的白细胞减少症。有文献报道，小檗胺具有一定的刺激骨髓细胞增殖的作用，特别是对粒细胞的影响较明显 [3] ，同时具有很强的抗肿瘤作用 [4] 。鲨肝醇多存在于正常动物组织的造血系统中，它能使粒细胞的数量增加。
本实验结果分析表明，小檗胺和鲨肝醇两种来源不同的药物升高白细胞作用是相同的，均以升高粒细胞为主。其作用 机制可能是二者均能使体内刺激造血干细胞生成的集落刺激因子G-CSE的含量增高，从而促进骨髓造血干细胞和粒系祖细胞的增殖，分化为成熟的粒细胞进入血液;并对环磷酰胺杀伤骨髓细胞的作用有显著的抵抗性，从而达到升高白细胞的效果。
, 百拇医药
本实验结果还表明，小檗胺和鲨肝醇两种来源不同的药物在升高白细胞的同时，对细胞内LDH的代谢有一定的影响，且对粒细胞的作用较为突出。乳酸脱氢酶是一种参与糖酵解的关键酶，在生物体内可起到调节NAD和NADH间比率的作用 [1] ;粒细胞的主要产能途径为糖酵解，使葡萄糖经酵解变为乳酸盐。在小檗胺和鲨肝醇作用下，由于骨髓造血干细胞，特别是粒系祖细胞的增殖过程中，细胞内糖酵解的增强，因此细胞的LDH、特别是粒细胞LDH活性显著增强。
本文仅就小檗胺和鲨肝醇两种来源不同的药物升高白细胞作用及对细胞内LDH的代谢的影响进行了比较，而其它作用机制还有待进一步研究。
参考文献
1 孙长滨，张成鸿，孔力.苏木水提液对小鼠乳酸脱氢酶活性的影响.中华实用中西医杂志，2002，2(15):137.
2 谢锦玉.现代细胞化学技术及其在中西医药中的应用.北京:中医古籍出版社，1998，30.
3 Wong GG，Temple PA，Leary A，et al.Human CSF-1:molecular cloning and expression of4-kb cDNA encoding the human urinary proˉtein.Science，1987，235:1504.
4 孔力，阎晓红，丁波.小檗胺抗实验性白血病作用的实验研究.中华实用中西医杂志，2000，13:1146.
作者单位:1137400内蒙古兴安盟人民医院2大连医科大学
(编辑小 川), http://www.100md.com(赵玉霞 于晓明)
关键词 小檗胺 鲨肝醇 白细胞 LDH
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)13-1954-03
Comparison on the effect of berbamine and batiolun on LDH
metabolizabilityin the process of increasing leukocyte
, 百拇医药
Zhao Yuxia，Yu Xiaoming
Xing’an People’s Hospital，Inner Mongolia137400.
【Abstract】 Objective To study the effects of berbamine and batiolun on LDH metabolizability in the process of increasing leukocyte.Methods Enzyme biochemical techniques is used to study the effect of berbamine and batiolˉun in the process of inceasing leukocyte and also to study the effect of LDH metabolizability.Results When leukocyte is inhibited by the immune inhibitor cycolophosphamcide，berbamine and batiolun are compared of the effect of LDH activity.ConclusionThe study draws the conclusion that both berbamine and batiolun can increase thegranule cell，and they also have some effect of the LDH metabolizability.
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Key words berbamine batiolun leukocyte LDH
近年来，随着中医药研究的不断深入，机体的重要组成成分—酶与药物作用的关系越来越受到重视，其中对中药有效成分的研究更为引人注目，了解其对机体酶活性的影响是研究和探讨中药有效成分作用机制所不可缺少的 [1]。 本文选用的小檗胺(Berbamine，Ber)是小檗属植物的干燥根中提取的一种双苄基异喹啉生物碱。具有清热燥湿、泻火解毒等功效;鲨肝醇(Batiolum)为动物体内的正常成分，多存在于造血系统中。两种药物均具有升高白细胞的作用，常用于治疗多种因素引起的白细胞减少症。笔者用酶细胞化学方法对两种药物在治疗由免疫抑制剂环磷酰胺所致的白细胞减少症时，对乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响进行了比较观察。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 小檗胺:为白色结晶粉末(纯度97%以上)，由中国科学院林业土壤研究所提供，使用前以无菌生理盐水配制成所需浓度。鲨肝醇(化学名称3-(十八烷氧)-1，2-丙二醇):上海延安制药厂生产，使用前以生理盐水配制。环磷酰胺(Cycolophosphamide):上海第二制药厂生产，使用前以无菌生理盐水配制成所需浓度。NAD、PMS(吩嗪甲硫酸酯)、NBT(硝基蓝四氮盐)为sigma公司产品。 其余均为国产试剂。
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1.2 实验动物及分组 昆明种小鼠，由大连医科大学实验动物中心提供。(20±2)g，雌雄不分，随机分组，每组10只。(1)对照组:腹腔注射生理盐水0.2ml/只，每日1次。(2)环磷酰胺组:1%环磷酰胺-生理盐水溶液，腹腔注射，最终浓度为每日50mg/kg。(3)小檗胺组:连续给予环磷酰胺(终浓度同上)7天后，腹腔注射给予小檗胺溶液，最终浓度为每日2.5mg/kg。(4)鲨肝醇组:连续给予环磷酰胺(终浓度同上)7天后，灌胃法给予1%鲨肝醇溶液，每日550mg/kg体重/日。
1.3 白细胞总数及分类检测 各组动物均连续给药10天。于给药第7天取尾静脉血，用PC-603自动测定仪测定白细胞总数，同时涂片，Giemsa染色进行白细胞分类计数。
1.4 细胞内LDH活性测定 取小鼠尾静脉血涂片，以四唑盐法 [2] 进行LDH染色，观察各组小鼠用药后第3、第7、第10天的末梢血中粒细胞、淋巴细胞内LDH的活性变化。并通过HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告分析系统测定阳性反应的灰度值。
, 百拇医药
2 结果
2.1 升高白细胞的作用 结果见表1。表1 白细胞总数及分类 (略) 注:与对照组比较 ˇ P<0.05表中结果分析可见，小檗胺和鲨肝醇对由环磷酰胺所致的白细胞减少症均有升高白细胞的作用，第7天可达正常水平，并以粒细胞增加明显，与对照组差异有显著性。
2.2 对末梢血细胞LDH活性的影响
2.2.1 对粒细胞乳酸脱氢酶活性的影响 见表2。
表2 对粒细胞乳酸脱氢酶活性影响分析(ˉx±s) 注:与对照组比较ˇ P<0.05
表中结果分析可见，给予小檗胺后，粒细胞LDH活性增强，且与用药时间呈正相关，组内比较差异有显著性(P<0.05);给予鲨肝醇第3天，粒细胞LDH酶活性明显高于对照组(P<0.05)，随用药时间的延长，LDH活性水平有所 下降，第10天时，与小檗胺相似;小檗胺组和鲨肝醇组总体LDH活性均高于对照组和环磷酰胺组，差异有显著性(P<0.05)。
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2.2.2 对淋巴细胞乳酸脱氢酶活性的影响 见表3。表3 对淋巴细胞乳酸脱氢酶活性影响分析 (略)
表3结果分析可见，小檗胺和鲨肝醇对淋巴细胞LDH活性的影响不明显，组内与组间比较差异均无显著性(P>0.05)。
3 讨论
小檗胺和鲨肝醇分别是从植物和动物提取的药用有效成分，两种药物均具有升高白细胞的作用，常用于治疗多种因素引起的白细胞减少症。有文献报道，小檗胺具有一定的刺激骨髓细胞增殖的作用，特别是对粒细胞的影响较明显 [3] ，同时具有很强的抗肿瘤作用 [4] 。鲨肝醇多存在于正常动物组织的造血系统中，它能使粒细胞的数量增加。
本实验结果分析表明，小檗胺和鲨肝醇两种来源不同的药物升高白细胞作用是相同的，均以升高粒细胞为主。其作用 机制可能是二者均能使体内刺激造血干细胞生成的集落刺激因子G-CSE的含量增高，从而促进骨髓造血干细胞和粒系祖细胞的增殖，分化为成熟的粒细胞进入血液;并对环磷酰胺杀伤骨髓细胞的作用有显著的抵抗性，从而达到升高白细胞的效果。
, 百拇医药
本实验结果还表明，小檗胺和鲨肝醇两种来源不同的药物在升高白细胞的同时，对细胞内LDH的代谢有一定的影响，且对粒细胞的作用较为突出。乳酸脱氢酶是一种参与糖酵解的关键酶，在生物体内可起到调节NAD和NADH间比率的作用 [1] ;粒细胞的主要产能途径为糖酵解，使葡萄糖经酵解变为乳酸盐。在小檗胺和鲨肝醇作用下，由于骨髓造血干细胞，特别是粒系祖细胞的增殖过程中，细胞内糖酵解的增强，因此细胞的LDH、特别是粒细胞LDH活性显著增强。
本文仅就小檗胺和鲨肝醇两种来源不同的药物升高白细胞作用及对细胞内LDH的代谢的影响进行了比较，而其它作用机制还有待进一步研究。
参考文献
1 孙长滨，张成鸿，孔力.苏木水提液对小鼠乳酸脱氢酶活性的影响.中华实用中西医杂志，2002，2(15):137.
2 谢锦玉.现代细胞化学技术及其在中西医药中的应用.北京:中医古籍出版社，1998，30.
3 Wong GG，Temple PA，Leary A，et al.Human CSF-1:molecular cloning and expression of4-kb cDNA encoding the human urinary proˉtein.Science，1987，235:1504.
4 孔力，阎晓红，丁波.小檗胺抗实验性白血病作用的实验研究.中华实用中西医杂志，2000，13:1146.
作者单位:1137400内蒙古兴安盟人民医院2大连医科大学
(编辑小 川), http://www.100md.com(赵玉霞 于晓明)