抗原修复方法的合理选择
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中华中西医杂志 2003年7月 第4卷 第14期
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2003)14-2194-01
免疫组化技术是临床病理诊断工作中不可缺少的辅助技术。随着各种相关的免疫试剂的不断丰富与发展，免疫组化技术逐渐走进每一个病理科。而抗原修复也是免疫组化操作过程中的一个极其重要的环节，由于修复方法的多样性和相关技术资料过于抽象，使得抗原修复更加神秘化。因而，如何合理选择修复方法也就见仁见智了。笔者根据本科室多年操作经验，建立了一整套选择方案，简述如下。
1 抗原修复的种类
目前各大试剂公司均对本公司的各类试剂提出了相应预处理方案，因而，抗原修复方法的分类显得纷繁复杂，但总而言之，不外乎如下两类。
1.1 物理/化学方法 指以物理学方法为主的修复方法，但均必须依赖于抗原修复液作为修复介质，因而，也就不存在纯物理学的修复法，这包括采用微波、超声波、高温高压等方法。
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1.2 化学方法 该法采用最早，但修复效果有限，现已基本上被其他方法替代。不过以各类消化酶为主的修复介质也正以复合消化液的形式逐渐发展，相信也将占领一席之地。
2 抗原修复方法的正确选择
应用于临床病理的各类抗体已有三百多种，但总的来说可以根据其相应抗原在细胞中定位不同分为两大类，即胞核抗体和胞浆抗体。一般而言，对于胞核抗原，因为核膜的屏蔽作用，可使其抗原决定簇空间位阻加大，从而相对于胞浆抗原来说容易形成抗原封闭，故其修复难度要大得多。根据本人多年实际操作经验，临床应用的各类抗原修复法，其修复能力由高到低依次是:高温高压法>高温煮沸法>微波法>超声法>酶消化法。可以说，高温高压法是一个广谱抗原修复法。但从本人长期实验操作的经验来看，该方法对于神经系统相关抗原和丙肝抗原等修复不理想，如修复时间掌握不好还可造成假阳性(当然也有假阴性)。那么，是否每一种抗原都必须进行修复呢?答案是否定的。对于操作者而言，每购进一批新抗体都要进行对照实验，试剂说明书中标注的抗原修复法不是完全适应于每一个实验室的。只有经过自己反复对照后才能彻底掌握各种抗原的 最佳修复方法。事实上，绝大多数抗原是不需要作任何修复的(胞浆抗原为主)!如肾穿刺标本作免疫检测时常需作C1q、C3c、C4c、IgA、IgG、IgM共6项指标，笔者通过三千多例标本的实验操作发现不作抗原修复比采用抗原修复的显色效果要好且定位更准确，但是，对免疫组化的其它操作流程必须标准化，否则便难以达到满意的效果。总而言之，正确选择抗原修复法，可按如下流程进行。
, 百拇医药
首先，在对抗体不熟悉的情况下，我们可先不作任何修复，直接进行免疫组化的常规操作，然后与阳性片作对照，如能达到相似或相近的效果则说明无需进行修复，如出现阴性则可进入下一步;第二，对标本进行化学性修复操作，如仍为假阴性则可进入下一步;第三，物理/化学性修复，在此，笔者强烈推荐高温高压修复法。虽然该法较之微波法和超声波法麻烦，但效果明显，定位更准确，假阴性出现的几率最小。
一般而言，每个免疫组化实验室必须经过这一筛选过程方可掌握每一种试剂的最佳使用方法，并形成固定的操作方案，因各病理科对标本的先期处理方法差异较大，不可能千篇一律。而标本的抗原封闭主要是发生在固定阶段。但在标本固定这一问题上，经笔者多方调查发现，真正规范化的固定方法只在少数大医院得到了正确的应用，这也就是免疫组化抗原修复方法难以一概而论的根本原因所在。
此外，修复介质的正确选择也是十分关键的因素。笔者认为柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)是最佳选择，不但成本低，且染色背景清晰，易于保存，还不易引起组织块脱落。但是，柠檬酸盐缓冲液也不是万能的，如CD3、nm23、P53等就很难达到理想的效果，必须使用EDTA液或Tris液。所以说，没有一种万能的修复法，也没有万能修复介质，这是我们每一位病理技术人员都应该正确认识到的一条准则。还有，我们也应该客观地分析抗原修复后的显色效果，因为抗原修复可以使部分抗原定位发生转移。如P185、BCL-2、nm23等原本应表达在胞浆的抗原经抗原修复后，大都出现在核内;与之相反，P53、PCNA、Ki-67等原本表达在核内的抗原可以转位于胞浆或胞膜。这些都有待我们进行更深一步的研究和探讨，使之更加完善，真正成为病理诊断的坚实后盾。
作者单位:1410013长沙中南大学湘雅三医院病理科
2410006湖南师范大学医学院微生物教研室
(编辑曲 全), 百拇医药(杨军)
免疫组化技术是临床病理诊断工作中不可缺少的辅助技术。随着各种相关的免疫试剂的不断丰富与发展，免疫组化技术逐渐走进每一个病理科。而抗原修复也是免疫组化操作过程中的一个极其重要的环节，由于修复方法的多样性和相关技术资料过于抽象，使得抗原修复更加神秘化。因而，如何合理选择修复方法也就见仁见智了。笔者根据本科室多年操作经验，建立了一整套选择方案，简述如下。
1 抗原修复的种类
目前各大试剂公司均对本公司的各类试剂提出了相应预处理方案，因而，抗原修复方法的分类显得纷繁复杂，但总而言之，不外乎如下两类。
1.1 物理/化学方法 指以物理学方法为主的修复方法，但均必须依赖于抗原修复液作为修复介质，因而，也就不存在纯物理学的修复法，这包括采用微波、超声波、高温高压等方法。
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1.2 化学方法 该法采用最早，但修复效果有限，现已基本上被其他方法替代。不过以各类消化酶为主的修复介质也正以复合消化液的形式逐渐发展，相信也将占领一席之地。
2 抗原修复方法的正确选择
应用于临床病理的各类抗体已有三百多种，但总的来说可以根据其相应抗原在细胞中定位不同分为两大类，即胞核抗体和胞浆抗体。一般而言，对于胞核抗原，因为核膜的屏蔽作用，可使其抗原决定簇空间位阻加大，从而相对于胞浆抗原来说容易形成抗原封闭，故其修复难度要大得多。根据本人多年实际操作经验，临床应用的各类抗原修复法，其修复能力由高到低依次是:高温高压法>高温煮沸法>微波法>超声法>酶消化法。可以说，高温高压法是一个广谱抗原修复法。但从本人长期实验操作的经验来看，该方法对于神经系统相关抗原和丙肝抗原等修复不理想，如修复时间掌握不好还可造成假阳性(当然也有假阴性)。那么，是否每一种抗原都必须进行修复呢?答案是否定的。对于操作者而言，每购进一批新抗体都要进行对照实验，试剂说明书中标注的抗原修复法不是完全适应于每一个实验室的。只有经过自己反复对照后才能彻底掌握各种抗原的 最佳修复方法。事实上，绝大多数抗原是不需要作任何修复的(胞浆抗原为主)!如肾穿刺标本作免疫检测时常需作C1q、C3c、C4c、IgA、IgG、IgM共6项指标，笔者通过三千多例标本的实验操作发现不作抗原修复比采用抗原修复的显色效果要好且定位更准确，但是，对免疫组化的其它操作流程必须标准化，否则便难以达到满意的效果。总而言之，正确选择抗原修复法，可按如下流程进行。
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首先，在对抗体不熟悉的情况下，我们可先不作任何修复，直接进行免疫组化的常规操作，然后与阳性片作对照，如能达到相似或相近的效果则说明无需进行修复，如出现阴性则可进入下一步;第二，对标本进行化学性修复操作，如仍为假阴性则可进入下一步;第三，物理/化学性修复，在此，笔者强烈推荐高温高压修复法。虽然该法较之微波法和超声波法麻烦，但效果明显，定位更准确，假阴性出现的几率最小。
一般而言，每个免疫组化实验室必须经过这一筛选过程方可掌握每一种试剂的最佳使用方法，并形成固定的操作方案，因各病理科对标本的先期处理方法差异较大，不可能千篇一律。而标本的抗原封闭主要是发生在固定阶段。但在标本固定这一问题上，经笔者多方调查发现，真正规范化的固定方法只在少数大医院得到了正确的应用，这也就是免疫组化抗原修复方法难以一概而论的根本原因所在。
此外，修复介质的正确选择也是十分关键的因素。笔者认为柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)是最佳选择，不但成本低，且染色背景清晰，易于保存，还不易引起组织块脱落。但是，柠檬酸盐缓冲液也不是万能的，如CD3、nm23、P53等就很难达到理想的效果，必须使用EDTA液或Tris液。所以说，没有一种万能的修复法，也没有万能修复介质，这是我们每一位病理技术人员都应该正确认识到的一条准则。还有，我们也应该客观地分析抗原修复后的显色效果，因为抗原修复可以使部分抗原定位发生转移。如P185、BCL-2、nm23等原本应表达在胞浆的抗原经抗原修复后，大都出现在核内;与之相反，P53、PCNA、Ki-67等原本表达在核内的抗原可以转位于胞浆或胞膜。这些都有待我们进行更深一步的研究和探讨，使之更加完善，真正成为病理诊断的坚实后盾。
作者单位:1410013长沙中南大学湘雅三医院病理科
2410006湖南师范大学医学院微生物教研室
(编辑曲 全), 百拇医药(杨军)