电针“人中”、“内关”对急性脑缺血大鼠血清一氧化氮的影响
【摘要】 目的 研究Wistar大鼠急性脑缺血后电针对其血清一氧化氮(NO)的影响。方法 线栓法闭塞大鼠大脑中动脉，制备急性脑缺血模型。观察电针“人中”、“内关”穴后脑缺血3、12、24、72h时血清NO的变化。结果 脑缺血模型组与假手术组相比，血清NO含量显著增加(P<0.01)。与脑缺血模型组相比，电针治疗组明显降低(P<0.01)。结论 电针可通过抑制NO过量表达发挥对急性脑缺血的保护作用。
关键词 电针 脑缺血 一氧化氮
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2004)01-0004-02
The influence of electroacupuncture on NO contents of
serum in rats with acute cerebral ischemia
, 百拇医药
Gao Feng，He Wei，Chen Dunshou，et al.
The Department of Acupuncture and Moxibustion of Hubei TCM Hospital，Wuhan430061.
【Abstract】 Objective To investigate the influence of electroacupuncture on NO contents of serum in Wistar rats with acute cerebral ischemia.Methods A ratmodel of cerebral ischemia was made by filament occlusion of the middle cerebral artery.The change of NO contents of serum was observed after cerebral ischemiahas been treated by electroacupuncture of points Renzhong and Neiguan for3h，12h，24h and72h respectively.Results The NO contents of serum in ischemia group were significantly higher than those in sham operation group(P<0.01)and elecˉtroacupuncture-treated group(P<0.01).Conclusion Electroacupuncture can produce aprotecting effect on the brain in Wistar rats with cerebral acute ischemia by holding back excessive releasing of NO.
, 百拇医药
Key words electroacupuncture cerebral ischemia NO
缺血性脑血管疾病因其发病率高、致残率高、死亡率高而受到重视。因此，针刺治疗缺血性脑血管疾病倍受青睐。近年来，相关的临床及实验研究取得较大进展 [1，2] 。为进一步探讨电针对脑缺血的作用机理，我们采用Wistar大鼠线栓法制作急性脑缺血大鼠模型，观察了重度局灶性脑缺血早期血浆中一氧化氮(NO)含量的变化，以及穴位电针对它的影响。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 实验采用健康的Wistar大鼠，雌雄各半，体重(250±30)g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。禁食12h，饮水不限，随机分为四组:(1)电针治疗组:脑缺血模型+电针“人中”、“内关”穴;(2)脑缺血模型组:制作大脑中动脉暂时性缺血模型;(3)假手术组:手术步骤同脑缺血模型组，但不插入栓线。(4)正常组:不做特殊处理。按《实验针灸学》 [3] 介绍的方法定大鼠穴位。电针采用连续波，频率2.5Hz，强度3.0mA，于缺血10min时进行刺激，时间持续30min。后据分组不同，每隔24h针刺1次。
, 百拇医药
1.2 动物模型制作 10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉，暴露颈内动脉和颈外动脉的分叉处，将尖端预先处理成圆锥形的进口4-0号尼龙线插入颈内动脉，长度约2～3cm，到达大脑中动脉起始部，有阻力感时即停止，结扎、缝 合切口，根据各组不同实验要求经相应时程处理后处死动物，颈动脉处采血浆备用。
1.3 评价神经缺损体征标准 大脑中动脉血流阻断10min后，即根据Bederson神经缺损体征评分法 [4] 进行综合等级评分。0级:无任何行为异常，无缺损体征;1级:左前肢屈曲;2级:无旋转运动，但对来自右侧推力的抵抗力减弱;3级:对来自右侧推力的抵抗力减弱的同时，出现向瘫痪侧的旋转运动。神经缺损体征达2级以上者方可入选本实验。
1.4 NO含量测定血浆NO用解放军总医院科技开发中心提供的试剂盒，严格按照说明书步骤进行操作。以镉还原亚硝酸盐法，应用721分光光度计在546nm波长下测定样品吸光度，以亚硝酸钾及其吸光度制作标准曲线，计算样品硝酸盐含量。
, http://www.100md.com
1.5 统计学方法 所有数据均以ˉx±s表示，组间比较采用t检验分析。
2 结果
由表中数据可见，正常时血液中NO水平较低，缺血3h迅速增至最高，与假手术组比较差异有非常显著性(P<0.01)。后逐渐降低，24h降至最低，但仍显著高于假手术组(P<0.05)。72h NO含量再度升至新的高点。电针治疗组与脑缺血模型组各时点相比较，NO含量均明显降低。其中3h、12h、72h差异有非常显著性(P<0.01)，表明电针能显著抑制脑缺血时NO的过量表达。
表1 电针对急性脑缺血大鼠血清NO的影响 (μmol/L，ˉx±s，n=5)
注:假手术组各时点与正常组比较P>0.05;与模型组比较 △ P<0.05， △△ P<0.01;与假手术组比较 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.05
, 百拇医药
3 讨论
脑梗塞是由于脑部血液供应障碍，缺血、缺氧引起的神经元、纤维、胶质以及血管等组织结构的崩解破坏，并出现一系列生化代谢失常的病理过程。基本原因在于血液供应障碍。近年来的研究表明，NO作为一种信使物质和效应分子，在调节脑血管舒缩功能、改善脑血流方面起着十分重要的作用 [5] 。脑缺血时，过量的NO又具有神经毒性。合成NO的一氧化氮合酶(NOS)存在于脑组织中，在脑缺血损伤的不同阶段，不同类型的NOS生成的NO发挥着不同的功能。脑缺血初期NO含量急剧升高，主要来源于神经元型NOS(nNOS)，介导缺血早期的神经损伤 [6] 。此外，脑缺血后期NO再度升高，主要为诱导型NOS(iNOS)分泌[5] 。有研究表明，iNOS的表达一般发生在缺血24h及其以后。此时缺血损伤区内发生明显的炎症反应和白细胞浸润，iNOS高度表达，产生大量NO而引起迟发性脑损伤，和缺血初期相比具有更大的毒性 [7] 。
, 百拇医药
脑缺血时血清NO变化有不同报道，刘氏 [8] 的实验表明大鼠血清NO升高，许氏 [9] 实验则表明血清NO降低。本实验观察到，脑缺血发生3h模型组血清NO含量最高，24h降至最低，72h升至新高。而电针治疗组NO含量在3h、12h与模型组相比显著降低(P<0.01)。72h差异有非常显著性(P<0.01)。
急性脑梗塞属于中医“中风”范畴，与“风”、“瘀”、“痰”关系密切。“人中”属督脉经穴，亦为急救要穴，功能行气通经、醒神开窍。“内关”功能宁心安神、化瘀通络，与“人中”相配，使气血运行，痰瘀得化，脉络以通。故临床实际中此 二穴为治疗中风之要穴。
我们通过对NO的研究表明，电针“人中”、“内关”能有效降低急性脑梗塞NO浓度，改善脑血流量，并减轻其对脑组织和血管的损伤，从而起到脑保护作用，并且表现出对NO浓度重新升高趋势的遏制作用，显示了针刺良好的远期疗效。
, 百拇医药
参考文献
1 雷新强.针灸治疗中风临床研究进展.中医研究，2000，13(1):52.
2 徐佳.针灸对实验性脑缺血作用机理研究概况.上海针灸杂志，1999，18(5):47.
3 林文注，王佩.实验针灸学.上海:上海科学技术出版社，1994，290.
4 Bederson JB.Rat middle cerebral artery occlusion using an intraluminal thread technique.Acta Neurchir，1991，109:126.
5 余华峰，刘艳，魏岗之.一氧化氮与脑缺血及实验性脑保护治疗.中华神经科杂志，1999，32(5):306.
, 百拇医药
6 张洪，慕容慎行，刘友饶，等.大鼠脑缺血再灌注脑区一氧化氮变化的研究.临床神经病学杂志，1999，12(1):18.
7 施静，张静，刘晓春，等.电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层一氧化氮的影响.针刺研究，1999，24(4):268.
8 刘志发，吴醒身，周正谋，等.大鼠缺血时血与脑中一氧化氮、超氧化物歧化酶和丙二醛含量的变化.中华航海医学杂志，1999，6(2):97.
9 许能贵，许冠荪，钟平，等.电针督脉经穴对急性脑缺血大鼠一氧化氮及内皮素的影响.针刺研究，1996，21(3):18.
(收稿日期:2003-11-03)
作者单位:1430061武汉湖北中医学院
2430061湖北省中医院针灸科
(编辑曲 全), 百拇医药(高锋 何伟 陈墩寿 李家康)
关键词 电针 脑缺血 一氧化氮
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2004)01-0004-02
The influence of electroacupuncture on NO contents of
serum in rats with acute cerebral ischemia
, 百拇医药
Gao Feng，He Wei，Chen Dunshou，et al.
The Department of Acupuncture and Moxibustion of Hubei TCM Hospital，Wuhan430061.
【Abstract】 Objective To investigate the influence of electroacupuncture on NO contents of serum in Wistar rats with acute cerebral ischemia.Methods A ratmodel of cerebral ischemia was made by filament occlusion of the middle cerebral artery.The change of NO contents of serum was observed after cerebral ischemiahas been treated by electroacupuncture of points Renzhong and Neiguan for3h，12h，24h and72h respectively.Results The NO contents of serum in ischemia group were significantly higher than those in sham operation group(P<0.01)and elecˉtroacupuncture-treated group(P<0.01).Conclusion Electroacupuncture can produce aprotecting effect on the brain in Wistar rats with cerebral acute ischemia by holding back excessive releasing of NO.
, 百拇医药
Key words electroacupuncture cerebral ischemia NO
缺血性脑血管疾病因其发病率高、致残率高、死亡率高而受到重视。因此，针刺治疗缺血性脑血管疾病倍受青睐。近年来，相关的临床及实验研究取得较大进展 [1，2] 。为进一步探讨电针对脑缺血的作用机理，我们采用Wistar大鼠线栓法制作急性脑缺血大鼠模型，观察了重度局灶性脑缺血早期血浆中一氧化氮(NO)含量的变化，以及穴位电针对它的影响。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 实验采用健康的Wistar大鼠，雌雄各半，体重(250±30)g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。禁食12h，饮水不限，随机分为四组:(1)电针治疗组:脑缺血模型+电针“人中”、“内关”穴;(2)脑缺血模型组:制作大脑中动脉暂时性缺血模型;(3)假手术组:手术步骤同脑缺血模型组，但不插入栓线。(4)正常组:不做特殊处理。按《实验针灸学》 [3] 介绍的方法定大鼠穴位。电针采用连续波，频率2.5Hz，强度3.0mA，于缺血10min时进行刺激，时间持续30min。后据分组不同，每隔24h针刺1次。
, 百拇医药
1.2 动物模型制作 10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉，暴露颈内动脉和颈外动脉的分叉处，将尖端预先处理成圆锥形的进口4-0号尼龙线插入颈内动脉，长度约2～3cm，到达大脑中动脉起始部，有阻力感时即停止，结扎、缝 合切口，根据各组不同实验要求经相应时程处理后处死动物，颈动脉处采血浆备用。
1.3 评价神经缺损体征标准 大脑中动脉血流阻断10min后，即根据Bederson神经缺损体征评分法 [4] 进行综合等级评分。0级:无任何行为异常，无缺损体征;1级:左前肢屈曲;2级:无旋转运动，但对来自右侧推力的抵抗力减弱;3级:对来自右侧推力的抵抗力减弱的同时，出现向瘫痪侧的旋转运动。神经缺损体征达2级以上者方可入选本实验。
1.4 NO含量测定血浆NO用解放军总医院科技开发中心提供的试剂盒，严格按照说明书步骤进行操作。以镉还原亚硝酸盐法，应用721分光光度计在546nm波长下测定样品吸光度，以亚硝酸钾及其吸光度制作标准曲线，计算样品硝酸盐含量。
, http://www.100md.com
1.5 统计学方法 所有数据均以ˉx±s表示，组间比较采用t检验分析。
2 结果
由表中数据可见，正常时血液中NO水平较低，缺血3h迅速增至最高，与假手术组比较差异有非常显著性(P<0.01)。后逐渐降低，24h降至最低，但仍显著高于假手术组(P<0.05)。72h NO含量再度升至新的高点。电针治疗组与脑缺血模型组各时点相比较，NO含量均明显降低。其中3h、12h、72h差异有非常显著性(P<0.01)，表明电针能显著抑制脑缺血时NO的过量表达。
表1 电针对急性脑缺血大鼠血清NO的影响 (μmol/L，ˉx±s，n=5)
注:假手术组各时点与正常组比较P>0.05;与模型组比较 △ P<0.05， △△ P<0.01;与假手术组比较 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.05
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3 讨论
脑梗塞是由于脑部血液供应障碍，缺血、缺氧引起的神经元、纤维、胶质以及血管等组织结构的崩解破坏，并出现一系列生化代谢失常的病理过程。基本原因在于血液供应障碍。近年来的研究表明，NO作为一种信使物质和效应分子，在调节脑血管舒缩功能、改善脑血流方面起着十分重要的作用 [5] 。脑缺血时，过量的NO又具有神经毒性。合成NO的一氧化氮合酶(NOS)存在于脑组织中，在脑缺血损伤的不同阶段，不同类型的NOS生成的NO发挥着不同的功能。脑缺血初期NO含量急剧升高，主要来源于神经元型NOS(nNOS)，介导缺血早期的神经损伤 [6] 。此外，脑缺血后期NO再度升高，主要为诱导型NOS(iNOS)分泌[5] 。有研究表明，iNOS的表达一般发生在缺血24h及其以后。此时缺血损伤区内发生明显的炎症反应和白细胞浸润，iNOS高度表达，产生大量NO而引起迟发性脑损伤，和缺血初期相比具有更大的毒性 [7] 。
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脑缺血时血清NO变化有不同报道，刘氏 [8] 的实验表明大鼠血清NO升高，许氏 [9] 实验则表明血清NO降低。本实验观察到，脑缺血发生3h模型组血清NO含量最高，24h降至最低，72h升至新高。而电针治疗组NO含量在3h、12h与模型组相比显著降低(P<0.01)。72h差异有非常显著性(P<0.01)。
急性脑梗塞属于中医“中风”范畴，与“风”、“瘀”、“痰”关系密切。“人中”属督脉经穴，亦为急救要穴，功能行气通经、醒神开窍。“内关”功能宁心安神、化瘀通络，与“人中”相配，使气血运行，痰瘀得化，脉络以通。故临床实际中此 二穴为治疗中风之要穴。
我们通过对NO的研究表明，电针“人中”、“内关”能有效降低急性脑梗塞NO浓度，改善脑血流量，并减轻其对脑组织和血管的损伤，从而起到脑保护作用，并且表现出对NO浓度重新升高趋势的遏制作用，显示了针刺良好的远期疗效。
, 百拇医药
参考文献
1 雷新强.针灸治疗中风临床研究进展.中医研究，2000，13(1):52.
2 徐佳.针灸对实验性脑缺血作用机理研究概况.上海针灸杂志，1999，18(5):47.
3 林文注，王佩.实验针灸学.上海:上海科学技术出版社，1994，290.
4 Bederson JB.Rat middle cerebral artery occlusion using an intraluminal thread technique.Acta Neurchir，1991，109:126.
5 余华峰，刘艳，魏岗之.一氧化氮与脑缺血及实验性脑保护治疗.中华神经科杂志，1999，32(5):306.
, 百拇医药
6 张洪，慕容慎行，刘友饶，等.大鼠脑缺血再灌注脑区一氧化氮变化的研究.临床神经病学杂志，1999，12(1):18.
7 施静，张静，刘晓春，等.电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层一氧化氮的影响.针刺研究，1999，24(4):268.
8 刘志发，吴醒身，周正谋，等.大鼠缺血时血与脑中一氧化氮、超氧化物歧化酶和丙二醛含量的变化.中华航海医学杂志，1999，6(2):97.
9 许能贵，许冠荪，钟平，等.电针督脉经穴对急性脑缺血大鼠一氧化氮及内皮素的影响.针刺研究，1996，21(3):18.
(收稿日期:2003-11-03)
作者单位:1430061武汉湖北中医学院
2430061湖北省中医院针灸科
(编辑曲 全), 百拇医药(高锋 何伟 陈墩寿 李家康)