1997～1998年河北省流感病原学监测研究
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-077X(2003)07-0654-03
人流行性感冒(简称流感)是至今不能有效控制的一种急性呼吸道传染病，属国际监测疾病之一，在我国北方地区冬春季节常引起暴发和流行。流感病毒的抗原性变异和人群对流行株的免疫水平是决定流行的两个重要因素 [1] 。通过流感监测可及时了解流感疫情、流行趋势和规律，采取防范措施来减少流感流行所带来的危害。我们在1997～1998年流感流行期通过监测，共分离到6株H 1 N1 亚型，是近几年来此亚型分离数目最多的一个年度。本文对病原分离、流行后人群抗体水平测定结果进行了分析，并结合抗原性分析资料，以探索地方毒株的型别变迁规律，及时抓住有意义变异株，指导今后流感的监测、诊断及试剂和疫苗研制。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本采集和病毒分离 自1997年10月～1998年3月在保定某定点医院儿科或其他地区流感疫情处理时选择发病1～3天，体温38℃以上流感样病人，采咽拭子标本处理后常规接种鸡胚羊膜腔、尿囊腔和狗肾细胞。阴性者均盲传两代，仍阴性判为病毒分离阴性。
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1.2 血清采取和健康人群流感抗体水平测定 按国家规定的标准分五个年龄组于1998年4月在保定某定点医院采集健康人群血清共159份，每个年龄组不少于30人份。用微量半加敏血抑试验测定抗体水平，效价≥1∶10者判为阳性，只计算阳性者的GMT。HI试验同时用1%人“0”型和鸡红细胞。
1.3 病毒鉴定 采用常规血凝抑制(HI)和神经氨酸酶抑制(NI)试验法 [2] 鉴定血凝素和神经氨酸酶的型别。新分离株免疫血清由本实验室按常规制备的抗原免疫无自然抗体的莱亨公鸡获得。其余标准血清购自国家流感中心或由日本国立感染症研究所惠赠。抗原选用当前国际或国家代表株和已鉴定的新分离毒株接种鸡胚尿囊腔，收获的病毒尿液滴度在1∶80以上。
1.4 血凝素抗原分析 用我省新分离株A1/河北/43/97与国际代表株A1/北京/262/95、国内代表株A1/京防/1/86、地方株A1/石铁/4/87、A1/冀防/153/90和A1/河北/33/91进行交叉血凝抑制试验 [2] ，并按r=r 1 r 2 公式计算抗原比，r=1时表示两个毒株间的抗原性完全相同，r值在1/1.5～1.5/1时表示抗原性无明显差别，1.5
2 结果
2.1 病毒分离鉴定结果 1997～1998年流行期共采集咽拭子标本55份，用鸡胚或MDCK细胞分离到6株流感病毒，经血凝抑制试验鉴定A/山形/32/89(H 1 N 1 )的免疫血清对新分离株的血抑效价在1∶10～40之间，确认此6株为H 1 亚型;神经氨酸酶抑制试验鉴定结果显示，代表株A/京防/1/86(H 1 N 1 )和A/北京/262/95(H 1 N 1 )的免疫血清对新分离株的抑制效价在1∶80～160之间，证实新分离毒株的神经氨酸酶为N 1 亚型。
2.2 抗原性分析 选新分离到的6株H 1 N 1 亚型流感病毒中的1株A/河北/43/97(H 1 N 1 )制备鸡免疫血清，与H 1亚型国际、国家及河北地方毒株A/北京/262/95、A/京防/1/86、A/冀防/153/90、A/河北/33/91和A/石铁/4/87的免疫血清及抗原通过交互血凝抑制试验进行了抗原分析，结果(见表1)显示:A/河北/43/97(H 1 N 1 )毒株抗原性与代表株A/北京 /262/95(H 1 N 1 )的抗原比为64，有大变异;与A/冀防/153/90(H 1 N 1 )、A/河北/33/91(H 1 N 1 )有明显不同;与A/京防/1/86(H 1 N 1 )的抗原比为5.66，与A/石铁/4/87(H 1 N 1 )的抗原比为5.98，有小变异。这表明1997～1998年流行期流感毒株出现了新变种，抗原性接近于1986～1987年毒株。
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表1 1997～1998年流感病毒抗原性分析结果(略)
2.3 抗体测定结果 1998年4月份分5个年龄组采集流行期后健康人群血清159份，经RDE处理后，测定了对国家代表株和新分离株的H 1 抗体。结果显示:1998年4月人群对新分离株A/河北/43/97的抗体阳性率为47.80%、GMT为46.94;对A/北京/262/95阳性率48.42%，与新分离株的阳性率基本接近(X 2 =0.05，P>0.05)，GMT为66.95;对B/ 广东/5/94的阳性率为23.27%，低于对新分离株的阳性率(X 2 =19.90，P<0.005);对A3/武汉/359/95毒株的阳性率为91.82%，明显高于对新分离株的阳性率(X 2 =74.78，P<0.005)，GMT为568.37。表明H 1 N1 亚型新分离毒株在人群中有一定传播，见表2。
表2 1998年4月河北省健康人群流感抗体血抑试验测定结果 (略)
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3 讨论
有历史记载的1918～1919年H 1 N 1 亚型流感大流行是流感流行史上最严重的一次，到1957年H 2 N 2 出现才消失。但1977年甲 1 亚型的重现，造成我国人群中甲 1 、甲 3 和乙型的共同流行，并且甲 1 与甲 3 几乎处于轮流为主的局面。H 1 N 1 病毒株的新变种多首发于北方 [3] ，每年冬季我国北方有一个流感活动高峰。我省此流行期主要集中在1997年12月～1998年2月间，以甲 1 亚型为主，是1988年来我省分离到甲 1 亚型最多的一个年度，分离阳性率11%，同以往0.6%～1.4%相比明显增高，这与全国的流感活动情况相一致。
H 1 N 1 亚型病毒株从1977年重现到1995年，在我国出 现过5个变异株(1981，1983，1985，1986 [3] 和1995)。郭元吉等对1990～1993年以来分离到的H 1 N 1 病毒株进行抗原性分析结果表明仍类似于A/京防/1/86，也就是说A/京防/1/86这类病毒株出现7年还未发生过明显的抗原性变异，这在甲型流感流行史上是罕见的 [4] 。1992年以来，H 1 N1 一直处于劣势，但从1995年冬季活动程度明显加强，出现了A/北京/262/95变异株，它们发生了明显的抗原性漂移，而且漂移程度可称为自1977年5月份H 1 N 1 重现以来较明显的一次。但是否存在地区性差异，有待进一步研究。我们对分离到的6株H 1 N 1 进行了抗原性分析，结果显示与当前国际代表株A/北京/262/95的抗原比为64，有较大变异;而与国家代表株A/京防/1/86的抗原比为5.6，变异幅度较小，说明1997～1998年流行期河北甲型流感仍由A/京防/1/86近似的毒株引起，并没有被变异较大的A/北京/262/95一类毒株取代。所以，A/河北/43/97即是河北省代表株，也是一个新的地方变异株，今后在制备诊断试剂和疫苗时应包括此类毒株。
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通过查明一个地区某病的群体免疫水平及动态变化，可以预测该病株的抗体阳性率平均为47.80%，尚存在大量的易感人群，加上目前流感HA的变异率仍相当高，所以甲 1 亚型流感的局部暴发和流行是很难免的。1998年4月抗体测定结果显示人群对甲3亚型毒株的抗体阳性率和GMT值均非常高，可能与此类毒株在1996～1997年连续2个流行期广泛流行，以及出现“0”相毒株有关。
流感流行特点为突然暴发、迅速蔓延、波及面广并具有一定季节性，发病率高、死亡率低。我国被认为是流感大流 行和新变株的多发地，国内外一些专家预测，在数年内将会出现新流感亚型，任何时候在我省都有出现新亚型毒株的可能性，需百倍警惕，加强监测。
参考文献
1 黄桢祥.医学病毒学及其实验技术.北京:科学出版社，1990，666-673.
2 郭元吉，程小雯.流行性感冒病毒及其实验技术，重庆:中国三峡出版社，1997，
3 郭元吉，张莎林，王平，等.甲型流感重组株H 1 N 2 起源的调查.中华实验和临床病毒学杂志，1991，5:380-383.
4 郭元吉，郭忠明，张莎林，等.我国流感监测(1990～1993).中华实验和临床病毒学杂志，1994，8:11-15.
(收稿日期:2003-01-24) (编辑 一坤), http://www.100md.com(高惠敏)
人流行性感冒(简称流感)是至今不能有效控制的一种急性呼吸道传染病，属国际监测疾病之一，在我国北方地区冬春季节常引起暴发和流行。流感病毒的抗原性变异和人群对流行株的免疫水平是决定流行的两个重要因素 [1] 。通过流感监测可及时了解流感疫情、流行趋势和规律，采取防范措施来减少流感流行所带来的危害。我们在1997～1998年流感流行期通过监测，共分离到6株H 1 N1 亚型，是近几年来此亚型分离数目最多的一个年度。本文对病原分离、流行后人群抗体水平测定结果进行了分析，并结合抗原性分析资料，以探索地方毒株的型别变迁规律，及时抓住有意义变异株，指导今后流感的监测、诊断及试剂和疫苗研制。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本采集和病毒分离 自1997年10月～1998年3月在保定某定点医院儿科或其他地区流感疫情处理时选择发病1～3天，体温38℃以上流感样病人，采咽拭子标本处理后常规接种鸡胚羊膜腔、尿囊腔和狗肾细胞。阴性者均盲传两代，仍阴性判为病毒分离阴性。
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1.2 血清采取和健康人群流感抗体水平测定 按国家规定的标准分五个年龄组于1998年4月在保定某定点医院采集健康人群血清共159份，每个年龄组不少于30人份。用微量半加敏血抑试验测定抗体水平，效价≥1∶10者判为阳性，只计算阳性者的GMT。HI试验同时用1%人“0”型和鸡红细胞。
1.3 病毒鉴定 采用常规血凝抑制(HI)和神经氨酸酶抑制(NI)试验法 [2] 鉴定血凝素和神经氨酸酶的型别。新分离株免疫血清由本实验室按常规制备的抗原免疫无自然抗体的莱亨公鸡获得。其余标准血清购自国家流感中心或由日本国立感染症研究所惠赠。抗原选用当前国际或国家代表株和已鉴定的新分离毒株接种鸡胚尿囊腔，收获的病毒尿液滴度在1∶80以上。
1.4 血凝素抗原分析 用我省新分离株A1/河北/43/97与国际代表株A1/北京/262/95、国内代表株A1/京防/1/86、地方株A1/石铁/4/87、A1/冀防/153/90和A1/河北/33/91进行交叉血凝抑制试验 [2] ，并按r=r 1 r 2 公式计算抗原比，r=1时表示两个毒株间的抗原性完全相同，r值在1/1.5～1.5/1时表示抗原性无明显差别，1.5
2 结果
2.1 病毒分离鉴定结果 1997～1998年流行期共采集咽拭子标本55份，用鸡胚或MDCK细胞分离到6株流感病毒，经血凝抑制试验鉴定A/山形/32/89(H 1 N 1 )的免疫血清对新分离株的血抑效价在1∶10～40之间，确认此6株为H 1 亚型;神经氨酸酶抑制试验鉴定结果显示，代表株A/京防/1/86(H 1 N 1 )和A/北京/262/95(H 1 N 1 )的免疫血清对新分离株的抑制效价在1∶80～160之间，证实新分离毒株的神经氨酸酶为N 1 亚型。
2.2 抗原性分析 选新分离到的6株H 1 N 1 亚型流感病毒中的1株A/河北/43/97(H 1 N 1 )制备鸡免疫血清，与H 1亚型国际、国家及河北地方毒株A/北京/262/95、A/京防/1/86、A/冀防/153/90、A/河北/33/91和A/石铁/4/87的免疫血清及抗原通过交互血凝抑制试验进行了抗原分析，结果(见表1)显示:A/河北/43/97(H 1 N 1 )毒株抗原性与代表株A/北京 /262/95(H 1 N 1 )的抗原比为64，有大变异;与A/冀防/153/90(H 1 N 1 )、A/河北/33/91(H 1 N 1 )有明显不同;与A/京防/1/86(H 1 N 1 )的抗原比为5.66，与A/石铁/4/87(H 1 N 1 )的抗原比为5.98，有小变异。这表明1997～1998年流行期流感毒株出现了新变种，抗原性接近于1986～1987年毒株。
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表1 1997～1998年流感病毒抗原性分析结果(略)
2.3 抗体测定结果 1998年4月份分5个年龄组采集流行期后健康人群血清159份，经RDE处理后，测定了对国家代表株和新分离株的H 1 抗体。结果显示:1998年4月人群对新分离株A/河北/43/97的抗体阳性率为47.80%、GMT为46.94;对A/北京/262/95阳性率48.42%，与新分离株的阳性率基本接近(X 2 =0.05，P>0.05)，GMT为66.95;对B/ 广东/5/94的阳性率为23.27%，低于对新分离株的阳性率(X 2 =19.90，P<0.005);对A3/武汉/359/95毒株的阳性率为91.82%，明显高于对新分离株的阳性率(X 2 =74.78，P<0.005)，GMT为568.37。表明H 1 N1 亚型新分离毒株在人群中有一定传播，见表2。
表2 1998年4月河北省健康人群流感抗体血抑试验测定结果 (略)
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3 讨论
有历史记载的1918～1919年H 1 N 1 亚型流感大流行是流感流行史上最严重的一次，到1957年H 2 N 2 出现才消失。但1977年甲 1 亚型的重现，造成我国人群中甲 1 、甲 3 和乙型的共同流行，并且甲 1 与甲 3 几乎处于轮流为主的局面。H 1 N 1 病毒株的新变种多首发于北方 [3] ，每年冬季我国北方有一个流感活动高峰。我省此流行期主要集中在1997年12月～1998年2月间，以甲 1 亚型为主，是1988年来我省分离到甲 1 亚型最多的一个年度，分离阳性率11%，同以往0.6%～1.4%相比明显增高，这与全国的流感活动情况相一致。
H 1 N 1 亚型病毒株从1977年重现到1995年，在我国出 现过5个变异株(1981，1983，1985，1986 [3] 和1995)。郭元吉等对1990～1993年以来分离到的H 1 N 1 病毒株进行抗原性分析结果表明仍类似于A/京防/1/86，也就是说A/京防/1/86这类病毒株出现7年还未发生过明显的抗原性变异，这在甲型流感流行史上是罕见的 [4] 。1992年以来，H 1 N1 一直处于劣势，但从1995年冬季活动程度明显加强，出现了A/北京/262/95变异株，它们发生了明显的抗原性漂移，而且漂移程度可称为自1977年5月份H 1 N 1 重现以来较明显的一次。但是否存在地区性差异，有待进一步研究。我们对分离到的6株H 1 N 1 进行了抗原性分析，结果显示与当前国际代表株A/北京/262/95的抗原比为64，有较大变异;而与国家代表株A/京防/1/86的抗原比为5.6，变异幅度较小，说明1997～1998年流行期河北甲型流感仍由A/京防/1/86近似的毒株引起，并没有被变异较大的A/北京/262/95一类毒株取代。所以，A/河北/43/97即是河北省代表株，也是一个新的地方变异株，今后在制备诊断试剂和疫苗时应包括此类毒株。
, 百拇医药
通过查明一个地区某病的群体免疫水平及动态变化，可以预测该病株的抗体阳性率平均为47.80%，尚存在大量的易感人群，加上目前流感HA的变异率仍相当高，所以甲 1 亚型流感的局部暴发和流行是很难免的。1998年4月抗体测定结果显示人群对甲3亚型毒株的抗体阳性率和GMT值均非常高，可能与此类毒株在1996～1997年连续2个流行期广泛流行，以及出现“0”相毒株有关。
流感流行特点为突然暴发、迅速蔓延、波及面广并具有一定季节性，发病率高、死亡率低。我国被认为是流感大流 行和新变株的多发地，国内外一些专家预测，在数年内将会出现新流感亚型，任何时候在我省都有出现新亚型毒株的可能性，需百倍警惕，加强监测。
参考文献
1 黄桢祥.医学病毒学及其实验技术.北京:科学出版社，1990，666-673.
2 郭元吉，程小雯.流行性感冒病毒及其实验技术，重庆:中国三峡出版社，1997，
3 郭元吉，张莎林，王平，等.甲型流感重组株H 1 N 2 起源的调查.中华实验和临床病毒学杂志，1991，5:380-383.
4 郭元吉，郭忠明，张莎林，等.我国流感监测(1990～1993).中华实验和临床病毒学杂志，1994，8:11-15.
(收稿日期:2003-01-24) (编辑 一坤), http://www.100md.com(高惠敏)