叶酸、维生素B 6 、B 12 对冠心病者血浆同型半胱氨酸水平的影响及实验干预研究
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中华实用医药杂志 2003年9月 第3卷 第18期
【摘要】 目的 通过动物实验和临床研究了解叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 对冠心病患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平的影响。方法 (1)动物实验:70只Wistar大鼠分为7组，每组10只:叶酸缺乏组及对照组;高蛋氨酸饲料组及对照组;高蛋氨酸饲料组、高蛋氨酸饲料+补充叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 组及对照组，均喂养3个月。30只雄性新西兰兔，分为3组各10只:高蛋氨酸饲料组、高蛋氨酸饲料+补充叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 组及对照组，均喂养6个月。采用高效液相色谱和荧光检测法测定血浆Hcy浓度，放射免疫法测定血清叶酸和维生素B 12 。光镜或电镜对动脉作组织学检测。(2)临床研究:对150例正常对照者及134例冠心病患者测定血浆Hcy浓度和血清叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 水平。对42例冠心病患者及16例对照者给予口服复方叶酸制剂10～12周后测定血浆Hcy浓度和血清叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 水平。结果 大鼠喂养3个月后发现叶酸缺乏可使血浆Hcy浓度升高，并产生严重动脉损伤，对照组则无此变化;高蛋氨酸饲料可使血浆Hcy浓度升高，并产生严重动脉损伤，对照组则无此变化;高蛋氨酸饲料+补充叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 后血浆Hcy浓度升高不明显，且动脉损伤不明显，对照组则无此变化;兔喂养6个月后发现补充叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 后，可降低高蛋氨酸摄入所致的血浆Hcy浓度升高及明显减轻动脉损伤。临床研究结果显示冠心病患者血浆Hcy浓度明显升高，与叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 水平降低有关;给予口服复方叶酸制剂能降低血浆Hcy浓度。结论 缺乏叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 可导致血浆Hcy浓度明显升高，并致动脉损伤，而复方叶酸制剂能降低血浆Hcy浓度。
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关键词 冠心病 动脉损伤 同型半胱氨酸 叶酸 维生素B 6 维生素B 12
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)18-1645-07
The relation between the levels of plasma homocysteine and the levels of
serum folic acid，vitamin-B 12 ，vitamin-B 6 in coronary artery
disease and thestudy of invention with B-vitamins
Liu Wangmin，Zheng Jiaju，Tang Peiling，etal.
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Department of Cardiology，Suzhou Third People’s Hospital and Suzhou Instiute of Digestive and Nutrition215008.
【Abstract】 PartⅠ:The animal experimental study1 Materials Fifty male Wistar rats and thirty male New Zealand White rabbits;The animal ward with criterion of GMP.
2 Methods and results
2.1 Twenty male Wistar rats were divided into two groups:the folic acid deficent group(FD n=10)and the control group(Ctl n=10)，which were fed with a folic acid deficient diet and a normal folic acid diet for three months，reˉspectively.After experiment，the levels of total plasma homocysteine(Hcy)(28.66±6.07μmol/L)in FD group were higher than those in Ctl(9.49±1.77)μmol/L(P<0.001)，and there were arterosclerosis-like lesions of aorat in FD group.
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2.2 Tirty male Wistar rats were randomly divided into three groups:control group(Ctl n=10)，high methionine(Met)group(HM n=10)and drug group(DG n=10)，which were fed with a normal diets，a normal diets enriched by1%Met and a normal diets enriched by1%Met supplemented with0.5mg folic acid，2.5mg vitamin-B 6 and50μg vitamin-B 12 daily for3months，respectively.After experiment，the levels of total plasma Hcy(13.65±1.54)μmol/L in HM group were higher than those in Ctl group(9.86±1.75)μmol(P<0.01)，and there were arteroscleˉrosis-like lesions of aorta in DG group.After supplementation of folic acid，vitamin-B 6 andvitamin-B 12 ，the levels of total plasma Hcy were decreased，and the severityof the injured aorta in DG group was significantly milder than that in HM group.
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2.3 Thirty male New Zealand White rabbits were divided into three groups:control group(CG)，Met group(MG)，and Met+B-vitamins group(VG)，which were fed a normal diet，a normal diet enriched with0.5%Met and a 0.5%Met diet supplemented with B-vitamins(2.5mg folic acid，10mg vitamin-B6 ，200μg vitamin-B 12 daily)respectively for six months.After experiment，the total plasma Hcy levels at2h and7h after the cessation of diet in MG group were higher than those in CG group，and there were atherosclerosis changes of aroxas in MG group.In VG group，the levels of plasma Hcy at2h and7h after the cessation of diet were lower than those in MG group and higher than those in CG group.The severity of arterial lesions in VG group was significantly milder than that in MG group. PartⅡ:The clinical study1 Materials and methods The levels of total plasma Hcy and surem folic acid，vitamin-B 6 and vitamin-B 12 in134patients with coronary artery disease and150controls were measured.Results:The levels of total plasma Hcy in the patients with coronary artery disease were significantly increased，and the levels of surem folic acid，vitamin-B 6 and vitamin-B 12 in the patients with coronary artery disease were decreased.There was a inverse relation between the levels of total plasma of Hcy and the levels of serum folic acid，vitamin-B 12 ，vitamin-B 6 in the patients with coronary artery disease.
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2 Materials and methods 42patients with coronary artery disease and16controls were fed with the tri-vitamins-B tablets for10～12weeks.The levels of total plasma Hcy and surem folic acid，vitamin-B 6 and vitamin-B 12 were measured afterthe study.Results:The levels of total plasma Hcy in all persons fed with the tri-vitamins-B tablets were decreased.
Key words coronary artery disease Hcy folic acid VitB 6 Vit B 12
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冠状动脉硬化性心脏病(冠心病)是危害人类身体健康的慢性病之一，发病率在我国呈逐年增高趋势 [1] 。有研究表明血浆同型半胱氨酸(Homocystine，Hcy)水平升高是冠心病的危险因素之一 [2，3] 。近3年来，我们对冠心病患者血浆同型半胱氨酸水平与血清叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 的关系进行临床小样本研究，并选取大鼠及兔进行动物干预实验研究，现将结果报告如下。
1 动物实验
我们在国内首次开展了以下动物实验，其目的在于:(1)观察叶酸缺乏饮食能否引发高Hcy血症，能否产生动脉硬化损伤;(2)过量的高蛋氨酸(Methionine，Met)摄入能否引发高Hcy血症，能否产生动脉损伤;(3)在过量Met摄入的同时，补充叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 能否减轻或预防高Hcy血症及动脉损伤的产生。
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1.1 实验对象及分组 雄性Wistar大鼠50只，雄性新西兰兔30只，均购自上海实验动物中心。大鼠体重160～180g/只，兔2.0～2.5kg/只。
1.1.1 实验大鼠分为2个部分共5组 第一部分:叶酸缺乏对大鼠同型半胱氨酸水平及动脉损伤的影响:20只Wisˉtar大鼠分2组，每组10只。叶酸缺乏组:叶酸缺乏饲料，购于美国ICN公司，其配比为:无维生素酪蛋白15%，无叶酸混和维生素1%，盐混和物1.8%，葡萄糖20%，黄油8%，锯木屑10%，果糖9%，植物素1.2%，向日葵油5%，菜籽油7%，医用淀粉22%。以上成分充分混合前加入0.5%的磺胺甲基嘧啶以防细菌产生叶酸，加工成块，4℃保存。正常对照组:饲料为叶酸缺乏饲料中加入叶酸粉末750/kg(叶酸粉末购于美国ICN公司，批号:9901018)。
第二部分:高Met摄入对Hcy水平和动脉损伤的影响以及补充叶酸、维生素B 7 、维生素B 12 对上述过程的干预作用:30只Wistar大鼠分3组，每组10只。正常对照组:给予普通鼠饲料(购自中科院上海实验动物中心)。高Met组:在普通鼠饲料中加入1%的Met。给药组:普通鼠饲料中加入1%的Met+0.5mg叶酸，2.5mg维生素B 6 和50μg维生素B 12 /(天·只)。
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1.1.2 实验兔30只随机分组 正常对照组(10只):喂普通 饲料;高Met组(10只):普通兔饲料添加0.5%Met;给药组(10只):普通兔饲料添加0.5%Met+2.5mg叶酸，10mg维生素B 6 和200μg维生素B 12 /(天·只)。叶酸、维生素B 6 、维生素B 12 为中美合资苏州中化工业药品有限公司提供(粉末制剂，批号9904007)。
1.2 方法
1.2.1 饲养时间及样本采集 所有实验动物均在符合GMP条件的动物房内饲养，家兔饲养6个月，大鼠饲养3个月。实验前及饲养期满结束时:(1)断食后2h兔耳缘静脉采血，7h后断头采血;(2)大鼠剪尾采血(0.7ml)及7h后断头采血(5ml)，部分血样以2%肝素抗凝，再分别以3000rpm离心10min，取上层血清及血浆置-30℃冰箱供测。
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1.2.2 测定指标及内容 (1)血浆Hcy浓度:采用高效液相色谱法，参照Cornwell报道的方法稍作改良。采用岛津LC-9A型高效液相色谱仪，反相分析柱为碳185μm(250.0mm×4.6mm内径)，荧光检测仪为岛津RF535型，激发波长为385nm，发射波长为515nm、流动相为0.1mol/L磷酸二氢钾(以正磷酸调至酸碱度pH为2.1，含10%乙腈)，具体方法见文献。(2)血清叶酸浓度:采用放射免疫法(RIA)测定，放免药盒购自美国DPC公司，批内变异系数CV=2.3%，n=20，批间变异系数为CV=3.7%，n=20，回收率为97.75%。(3)组织学检测:①电镜标本制备:处死动物后迅速取下主动脉，切下主动脉弓上段3～4mm，兔取下主动脉至髂总动脉分支处纵向剖开，放入4%戊二醛溶液中固定10h以上，然后用磷酸缓冲液(PBS)冲洗3次，每次15min，接着用1%鹅酸固定1h，PBS冲洗2次，每次15min，丙酮酸递度脱水后用1:1包埋剂(丙酮)包埋，再用纯包埋剂浸透，40℃2h聚合，再60℃时24h聚合，最后修块切片，日立H-600型电镜观察。②光镜标本制备:电镜的标本切下后，余下段放入10%福尔马林液中固定，经石蜡包埋、切片，常规苏木素-伊红(HE)染色后进行光镜检测。(4)肝、肾功能和血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、脂蛋白(a)[Lp(a)]测定用日立7060全自动生化分析仪，低密度脂蛋白(LDL)以Firedwald公式LDL(mmol/L)=TC-HDL-TG/2.2，Lp(a)采用免疫比浊法(南京聚力生物医学工程研究所提供试剂)。
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1.2.3 统计学分析 采用Excel软件处理，测值用均值±标准差(X±s)表示。组间差异的显著性用t检验、参数的关系用直线相关分析。
1.3 结果
1.3.1 实验大鼠 第一部分:叶酸缺乏对Hcy水平及动脉损伤的影响，血清叶酸及血浆Hcy浓度实验前、后的变化比较，见表1。
表1 血清叶酸及血浆Hcy浓度实验前后变化比较
注:与对照组相比， ˇ P<0.01，与实验前比较 △ P<0.01
1.3.1.1 主动脉组织学变化 光镜下见叶酸缺乏组大鼠主动脉弓和胸主动脉均出现散在的内皮细胞肿胀，脱落，内弹力膜断裂。有部分内膜同中层平滑肌细胞脱落，形成管壁溃疡及附壁血栓。电镜下见叶酸缺乏组:内皮细胞脱落， 内皮下组织疏松，胶原纤维增生沉着，内弹力膜分裂，分叉，中断。尤其可见平滑肌细胞增生并在内膜下出现。
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1.3.1.2 实验前后肝肾功能的变化 见表2。
表2 两组肝肾功能比较
由表2见，实验后叶酸缺乏组和对照组肝肾功能，包括AST、ALT、BUN、CR、UA测值两组之间无明显差异。
1.3.2 实验兔
1.3.2.1 实验前后血清叶酸和血浆Hcy浓度变化 实验 前血清叶酸、血浆Hcy浓度3组间无明显差异。实验后，给药组血清叶酸浓度明显高于实验前和高Met组及对照组，血浆Hcy浓度断食后2h和7h均低于高Met组，但均高于对照组，见表3。
表3 实验前后血清叶酸和血浆Hcy浓度比较
注:与高蛋氨酸组相比 ˇ P<0.001，与实验前相比 △ P<0.001，与对照组相比 ☆ P<0.01，与断食2h相比 ▲ P<0.01。括弧内为取血离断后时间
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实验前各组断食7h血浆Hcy浓度与血清叶酸浓度呈负相关(r=-0.326，P<0.05)。实验后，对照组及给药组断食7h血浆Hcy浓度与同时采样的血清叶酸浓度呈负相关(分别r=-0.293，r=-0.358，P<0.05)。
1.3.2.2 实验后3组肝、肾功能变化 高Met组ALT、AST均高于对照组，给药组AST明显低于高Met组，ALT同高Met组无差异。肾功能3组间差异无显著性，见表4。
表4 实验后3组肝肾功能比较 (X±s)
注:与高Met组相比， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01
1.3.2.3 实验后血脂、空腹血糖3组比较 高Met组TC、TG、HDL、LDL、Lp(a)均高于对照组，给药组TC、TG低于高 Met组，HDL、LDL、Lp(a)同高Met组无明显差异，空腹血糖3组间差异无显著性。见表5。
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表5 实验后血脂、空腹血糖3组比较 (X±s)
注:与高Met组相比， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01
1.3.2.4 主动脉组织学改变 对照组见一只兔主动脉内膜增生，二只出现内皮细胞肿胀，其余正常。高Met组大部分主动脉肉眼见增厚、粥样斑块、内膜表面混浊、管壁溃疡、钙化点;光镜下示中膜平滑肌细胞肌瘤样增殖，钙化灶及粥样斑块，内皮层增厚，纤维蛋白沉积、内皮细胞脱落、附壁血栓形成及内皮下出现泡沫细胞。给药组大部分出现轻度内皮增生、内皮下水肿、内弹力膜断裂，未见平滑肌增生。
2 小样本人群试验研究
2.1 研究对象 (1)冠心病组:选择不伴有严重肝、肾、肺、脑及其他心脏病的门诊和住院冠心病患者134例(WHO标准)，其中男79例，女55例，平均年龄58.66±9.19岁(41～ 75岁)。134例冠心病中，初发劳累性心绞痛47例(男25例，女22例，年龄54.92±5.89岁)，恶化型劳累性心绞痛45例，(男25例，女20例，年龄59.86±9.49岁)，陈旧性心肌梗死42例(男29例，女13例，年龄62.59±8.52岁)。(2)正常对照组:详细询问病史并经体检与实验室检查(心电图、超声心动图、X线胸片检查和临床生化指标)均正常，并排除心血管系统和消化系统与营养不良性疾病的正常人150例(男、女各为75例)其中21～60岁4组120例为医院工作人员和其他企、事业单位的工作人员;61～70岁组30例均为企事业单位的退休人员，年龄构成见表6。
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表6 150例正常对照组血浆总Hcy和血清叶酸、VitB 12 、VitB 6 水平及相关系数 (X±s)
注:与同一年龄组的男性组比较 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01; # P<0.052.2 研究方法
2.2.1 血浆总Hcy测定 受检对象于上午6时空腹抽取2ml血液置入含有2%乙二胺四乙酸二钠100μl的试管内，离心的血浆标本置-30℃冷藏。具体操作方法见动物实验。
2.2.2 血清叶酸、维生素B 12 和总维生素B 6 测定 在抽取测定血浆总Hcy的血液标本时抽取5ml血液，离心的血清标本置-30℃冷藏。待血清标本收集全后采用放射免疫法 125 I测定叶酸水平、 57 Co测定维生素B 12 水平，试剂采用英国DPC公司的产品。采用DG-3022A型免疫酶联测定仪和96孔培养板(Corning，U.S.A)细菌学微量法测定血清总维生素B 6 水平。
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2.2.3 给予42例冠心病患者和16例对照者上午空腹口服复方叶酸制剂(本院协定处方)一片/天;在服药前和服药后10～12周抽取血液标本，测定血浆总Hcy血清叶酸、维生素B 12 和B 6 水平。未服药的10例冠心病患者在测定血浆总Hcy、血清叶酸、维生素B 12 和B 6 水平后10～12周复查，作为对照。
2.2.4 质控指标 测定血浆总Hcy时由美国SIGMA公司提供的Hcy标准品作对照，并对其作稳定性检验，批内变异为3.52%，批间变异为4.83%。测定叶酸的批内变异为6.1%，批间变异为7.9%。测定维生素B 12 的批内变异为6.6%，批间变异为9.2%。
2.2.5 统计学分析 检测结果用均值±标准差(X±s)表示，资料由计算机运用SPSS6.0版本软件包处理，作t或t′检验、方差分析及因素相关分析。
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2.3 结果
2.3.1 150例正常对照者血浆总Hcy和血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平及相关系数见表6。正常对照者和冠 心病患者血浆总Hcy和血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平及相关系数见表7。口服复方叶酸片对血浆总Hcy和血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平的影响见表8。在冠心病患者中口服复方叶酸片对伴有高Hcy血症者和非高Hcy血症者的血浆总Hcy和血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平的影响见表9:①冠心病患者组血浆Hcy水平显著高于对照组:血浆Hcy水平与冠心病的严重程度一致;②冠心病患者血清叶酸水平显著低于正常对照者(P<0.001);血清叶酸与血浆Hcy水平呈负相关关系，相关性的统计学意义似与病变的严重程度有关;③分年龄段的正常对照者的血清叶酸水平测定表明青年对照者的血清叶酸水平显著低于老年正常对照者，但老年冠心病患者的血清叶酸水平显著低于老年正常对照者(P<0.001);④血清维生素B 12 水平冠心病患者组显著低于正常对照组(P<0.01);与血浆总Hcy水平呈负相关关系(P<0.05);⑤血清维生素B 6 水平，初发劳累性心绞痛患者与正常对照组差异无显著性(P>0.05)，但恶化型劳累性心绞痛患者组和陈旧性心肌梗死患者组显著低于正常对照组(P<0.01和0.001);与血浆Hcy水平无显著相关性(P>0.05)。
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表7 正常对照者和冠心病患者血浆总Hcy和血清叶酸、VitB 12 、VitB 6 水平及相关系数 (X±s)
注:A组:正常对照组;B组:初发劳累性心绞痛组;C组:恶化型劳累性心绞痛组;D组:陈旧性心肌梗死组 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01
表8 口服复方叶酸片对血浆总Hcy和血清叶酸、VitB 12 、VitB 6 水平的影响 (X±s)
注:与服药前比较 ˇ P<0.001;与服药对照组比较 △ P<0.01， △△ P<0.001
表9 冠心病患者口服复方叶酸片对伴有高Hcy血症者和非高Hcy血症者的血浆总Hcy和血清叶酸、VitB 12 、VitB 6 水平的影响 (X±s)
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注:与服药前比较 ˇ P<0.001;与非高Hcy血症组比较 △ P<0.01， △△ P<0.001
2.3.2 冠心病组和对照组服药前、后比较血浆总Hcy水平均有显著降低(P<0.001)、血清叶酸、维生素B 12 、维生素B 6 水平均有显著增加。血浆总Hcy水平下降和血清叶酸、维生素B 12 、维生素B 6 水平升高幅度在伴有高Hcy血症的冠心病组比不伴有高Hcy血症的冠心病组大。
2.3.3 未服药的10例冠心病患者在测定血浆总Hcy、血清叶酸、维生素B 12 和维生素B6 水平后10～12周复查，结果表明血浆总Hcy、血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平差异无显著性(P?0.05)。
, 百拇医药 3 讨论
同型半胱氨酸(Hcy)是蛋氨酸的代谢产物，系腺苷蛋氨酸水解反应产生的一种含硫氨基酸，在病理情况下由于胱硫醚β合酶缺乏，Hcy代谢发生障碍，在肝细胞内由蛋氨酸生成的Hcy硫内酯，具有高度反应性可与低密度脂蛋白的脂蛋白B的游离氨基酸形成肽键Hcy(酯化)，从而导致细胞摄取并凝聚低密度脂蛋白与胆固醇沉着。此外，尚有其它因素参与内皮损伤及动脉粥样硬化形成过程 [5～7] 。
根据近来研究结果，动脉粥样硬化与Hcy的联系可能有多种机制:(1)游离的硫基基团介导H 2 O 2 生成，产生细胞毒性;(2)同型半胱氨酸(Hcy的二硫化物二聚体)活化Ⅶ因子，促进凝血因子;(3)Hcy抑制C蛋白的活化;(4)生理量的Hcy增加内皮细胞组织因子的促凝活性;(5)内皮舒张因子(EDRF)受损促进单核细胞粘附于内皮细胞;(6)Hcy可增加脂蛋白a[LP(a)]与纤维蛋白结合。最近高分辨率超声证明高Hcy水平的人内皮依赖性血管舒张受损 [8] 。
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本文研究结果提示，实验动物叶酸缺乏组及高Met饲养组，均可导致血浆Hcy浓度明显升高，并产生主动脉内皮细胞肿胀、坏死、内皮下层水肿、胶原纤维沉积和平滑肌细胞增生，血管壁溃疡等改变，严重者甚至出现中膜平滑肌增殖呈肌瘤样改变。但所有实验动物(大鼠及兔)在补充叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 后可以降低Hcy水平，并减轻动脉损伤程度。
在小样本人群研究中发现:冠心病患者初发劳累性心绞痛组血浆总Hcy水平为14.83±2.78μmol/L，恶化型劳累性心绞痛组血浆总Hcy水平为19.25±5.89μmol/L，陈旧性心肌梗死组血浆总Hcy水平为26.32±9.61μmol/L，而对照 组正常人血浆总Hcy水平仅为11.32±2.83μmol/L。提示冠心病患者血浆总Hcy水平显著高于正常对照组。结果也显示，冠心病患者血清叶酸水平(4.89±2.15μg/L)显著低于正常对照者(6.12±2.35μg/L，P<0.001，见表7);血清叶酸与血浆Hcy水平呈负相关 [9～11] 。
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研究结果还显示:血清维生素B 12 水平冠心病患组显著低于正常对照组(P<0.01)，与血浆Hcy水平呈负相关关系(P<0.05);血清维生素B 6 水平，初发劳累性心绞痛患者与正常对照组差异无显著性(P>0.05)，但恶化型劳累性心绞痛患组和陈旧性心肌梗死患者组显著低于正常对照组(P<0.01和0.001);与血浆Hcy水平无显著相关关系(P>0.05)。口服补充叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 对研究对象的血浆Hcy水平的影响，结果表明:冠心病组和对照组服药前、后比较血浆总Hcy水平均有显著性降低(P<0.001)、血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平均有显著增加。血浆总Hcy水平下降和血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6水平升高幅度伴有高Hcy血症的冠心病组比不伴有高Hcy血症的冠心病组大。
国外不少学者研究结果表明血浆Hcy水平升高与饮食中叶酸、维生素B 12 含量较少有关，增加富含维生素的饮食摄入有助于减低冠心病危险。并使早发动脉血栓性疾病患者的血浆Hcy水平降低，减少发生冠心病事件的危险(Lancet，2000，355:517)。有作者报道在西方人群中，每天补充0.5～5mg叶酸及约0.5mg维生素B 12 将降低1/4至1/3的血Hcy浓度(BMJ，1998，316:894)。本研究结果提示在实验动物及冠心病患者补充叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 能明显降低血浆Hcy水平，并使动物动脉损伤减轻。近来有学者提出胱硫醚β合酶或N5 ，N 10 -亚甲基四氢叶酸还原酶基因等缺陷，可能由叶酸和维生素B 12 等营养物质所影响。但如何正确调控基因尚待进一步研究 [12～14] 。
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动脉硬化有多种独立危险因素，如高血压、高血脂、吸烟及遗传因素等，本文研究证实Hcy水平升高与冠心病亦有一定关系。在冠心病的一级和二级预防中，适当补充叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 ，或许是其中方法之一，值得开展大规模人群的循证医学研究。
参考文献
1 Malinow MR.Plasma homocysteine:a risk factor for arterial occlusive disease.J Nutr，1996，1238-1243.
2 汤佩麟，刘王明，郑家驹，等.高半胱氨酸与动脉粥样硬化关系的研究进展.心血管病学进展，1997，2:95-98.
3 惠汝太.血浆血型半胱氨酸与血管性疾病.中国循环杂志，1999，14(3):129.
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4 汤佩麟，刘王明，王毓明，等.陈旧性心肌梗塞患者血浆同型半胱氨酸水平测定及其临床意义.国际心血管杂志，1999，1(3):220-222.
5 Nomenclature and criteria for diagnosis of ischemic heart disease:Report of the Joint International Society and Federation of Cardiology/World Health Organization task force and standardization of clinical nomenclaˉture.Circulation，1979，59:607-609.
6 Jacobsen DW，Gatautis VJ，Green R，Robinson K，Savon SR，Secic M，Ji J，Otto JM，Taylor LM Jr.Rapid HPLC determination of total homocysˉteine and other thiols in seurm and plasma:Sex differences and correlaˉtion with cobalamin and folate concentrations in healthy subjects.Clin Chem，1994，40:873-881.
, http://www.100md.com
7 Dalery K，Lussier-Cacan S，Selhub J，et al.Homocysteine and coronary artery disease in French Canadian subjects:Relation with vitamins B 12 ，B 6 ，pyridoxal phosphate，and folate.Am J Cardiol，1995，75:1107- 1111.
8 Chambers JC，Obeid OA，Refsum H，et al.Plasma homocysteine concenˉtrations and risk of coronary heart disease in UK Indian Asian and Euroˉpean men.Lancet，2000，355:523-527.
9 汤佩麟，王毓明，李明珍，等.血浆高半胱氨酸水平和冠心病的关系.中国循环杂志，1997，12(5):324-326.
, 百拇医药
10 汤佩麟.冠心病患者血浆高半胱氨酸和血脂水平的关系.临床心血管病杂志，1998，14(2):76-78.
11 刘王明，汤佩麟，王毓明，李明珍，等.冠心病患者血浆同型半胱氨酸水平与颈动脉内膜-中层厚度的关系.中国循环杂志，1999，14(3):137-139.
12 马雪兴，吉吉铭，刘王明.高同型半胱氨酸血症致动脉粥样硬化机制及干预研究.美国中华心血管病杂志，2000，2(4):298-300.
13 马雪兴，刘王明，吾柏铭，等.高蛋氨酸饲料对血浆同型半胱氨酸水平及动脉损伤的实验研究.美国中华心血管病杂志，2000，2(3):155-158.
14 马雪兴，刘王明，王毓明，吾柏铭，等.叶酸、维生素B 6 、维生素B 12 对大鼠同型半胱氨酸水平及动脉损伤的影响.中国循环杂志，2000，15(6):375-377.
(编辑罗 彬)
作者单位:215008江苏省苏州市第三人民医院心内科, http://www.100md.com(刘王明 郑家驹 汤佩麟 马雪兴 王毓明 李明珍)
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关键词 冠心病 动脉损伤 同型半胱氨酸 叶酸 维生素B 6 维生素B 12
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)18-1645-07
The relation between the levels of plasma homocysteine and the levels of
serum folic acid，vitamin-B 12 ，vitamin-B 6 in coronary artery
disease and thestudy of invention with B-vitamins
Liu Wangmin，Zheng Jiaju，Tang Peiling，etal.
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Department of Cardiology，Suzhou Third People’s Hospital and Suzhou Instiute of Digestive and Nutrition215008.
【Abstract】 PartⅠ:The animal experimental study1 Materials Fifty male Wistar rats and thirty male New Zealand White rabbits;The animal ward with criterion of GMP.
2 Methods and results
2.1 Twenty male Wistar rats were divided into two groups:the folic acid deficent group(FD n=10)and the control group(Ctl n=10)，which were fed with a folic acid deficient diet and a normal folic acid diet for three months，reˉspectively.After experiment，the levels of total plasma homocysteine(Hcy)(28.66±6.07μmol/L)in FD group were higher than those in Ctl(9.49±1.77)μmol/L(P<0.001)，and there were arterosclerosis-like lesions of aorat in FD group.
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2.2 Tirty male Wistar rats were randomly divided into three groups:control group(Ctl n=10)，high methionine(Met)group(HM n=10)and drug group(DG n=10)，which were fed with a normal diets，a normal diets enriched by1%Met and a normal diets enriched by1%Met supplemented with0.5mg folic acid，2.5mg vitamin-B 6 and50μg vitamin-B 12 daily for3months，respectively.After experiment，the levels of total plasma Hcy(13.65±1.54)μmol/L in HM group were higher than those in Ctl group(9.86±1.75)μmol(P<0.01)，and there were arteroscleˉrosis-like lesions of aorta in DG group.After supplementation of folic acid，vitamin-B 6 andvitamin-B 12 ，the levels of total plasma Hcy were decreased，and the severityof the injured aorta in DG group was significantly milder than that in HM group.
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2.3 Thirty male New Zealand White rabbits were divided into three groups:control group(CG)，Met group(MG)，and Met+B-vitamins group(VG)，which were fed a normal diet，a normal diet enriched with0.5%Met and a 0.5%Met diet supplemented with B-vitamins(2.5mg folic acid，10mg vitamin-B6 ，200μg vitamin-B 12 daily)respectively for six months.After experiment，the total plasma Hcy levels at2h and7h after the cessation of diet in MG group were higher than those in CG group，and there were atherosclerosis changes of aroxas in MG group.In VG group，the levels of plasma Hcy at2h and7h after the cessation of diet were lower than those in MG group and higher than those in CG group.The severity of arterial lesions in VG group was significantly milder than that in MG group. PartⅡ:The clinical study1 Materials and methods The levels of total plasma Hcy and surem folic acid，vitamin-B 6 and vitamin-B 12 in134patients with coronary artery disease and150controls were measured.Results:The levels of total plasma Hcy in the patients with coronary artery disease were significantly increased，and the levels of surem folic acid，vitamin-B 6 and vitamin-B 12 in the patients with coronary artery disease were decreased.There was a inverse relation between the levels of total plasma of Hcy and the levels of serum folic acid，vitamin-B 12 ，vitamin-B 6 in the patients with coronary artery disease.
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2 Materials and methods 42patients with coronary artery disease and16controls were fed with the tri-vitamins-B tablets for10～12weeks.The levels of total plasma Hcy and surem folic acid，vitamin-B 6 and vitamin-B 12 were measured afterthe study.Results:The levels of total plasma Hcy in all persons fed with the tri-vitamins-B tablets were decreased.
Key words coronary artery disease Hcy folic acid VitB 6 Vit B 12
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冠状动脉硬化性心脏病(冠心病)是危害人类身体健康的慢性病之一，发病率在我国呈逐年增高趋势 [1] 。有研究表明血浆同型半胱氨酸(Homocystine，Hcy)水平升高是冠心病的危险因素之一 [2，3] 。近3年来，我们对冠心病患者血浆同型半胱氨酸水平与血清叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 的关系进行临床小样本研究，并选取大鼠及兔进行动物干预实验研究，现将结果报告如下。
1 动物实验
我们在国内首次开展了以下动物实验，其目的在于:(1)观察叶酸缺乏饮食能否引发高Hcy血症，能否产生动脉硬化损伤;(2)过量的高蛋氨酸(Methionine，Met)摄入能否引发高Hcy血症，能否产生动脉损伤;(3)在过量Met摄入的同时，补充叶酸、维生素B 6 和维生素B 12 能否减轻或预防高Hcy血症及动脉损伤的产生。
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1.1 实验对象及分组 雄性Wistar大鼠50只，雄性新西兰兔30只，均购自上海实验动物中心。大鼠体重160～180g/只，兔2.0～2.5kg/只。
1.1.1 实验大鼠分为2个部分共5组 第一部分:叶酸缺乏对大鼠同型半胱氨酸水平及动脉损伤的影响:20只Wisˉtar大鼠分2组，每组10只。叶酸缺乏组:叶酸缺乏饲料，购于美国ICN公司，其配比为:无维生素酪蛋白15%，无叶酸混和维生素1%，盐混和物1.8%，葡萄糖20%，黄油8%，锯木屑10%，果糖9%，植物素1.2%，向日葵油5%，菜籽油7%，医用淀粉22%。以上成分充分混合前加入0.5%的磺胺甲基嘧啶以防细菌产生叶酸，加工成块，4℃保存。正常对照组:饲料为叶酸缺乏饲料中加入叶酸粉末750/kg(叶酸粉末购于美国ICN公司，批号:9901018)。
第二部分:高Met摄入对Hcy水平和动脉损伤的影响以及补充叶酸、维生素B 7 、维生素B 12 对上述过程的干预作用:30只Wistar大鼠分3组，每组10只。正常对照组:给予普通鼠饲料(购自中科院上海实验动物中心)。高Met组:在普通鼠饲料中加入1%的Met。给药组:普通鼠饲料中加入1%的Met+0.5mg叶酸，2.5mg维生素B 6 和50μg维生素B 12 /(天·只)。
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1.1.2 实验兔30只随机分组 正常对照组(10只):喂普通 饲料;高Met组(10只):普通兔饲料添加0.5%Met;给药组(10只):普通兔饲料添加0.5%Met+2.5mg叶酸，10mg维生素B 6 和200μg维生素B 12 /(天·只)。叶酸、维生素B 6 、维生素B 12 为中美合资苏州中化工业药品有限公司提供(粉末制剂，批号9904007)。
1.2 方法
1.2.1 饲养时间及样本采集 所有实验动物均在符合GMP条件的动物房内饲养，家兔饲养6个月，大鼠饲养3个月。实验前及饲养期满结束时:(1)断食后2h兔耳缘静脉采血，7h后断头采血;(2)大鼠剪尾采血(0.7ml)及7h后断头采血(5ml)，部分血样以2%肝素抗凝，再分别以3000rpm离心10min，取上层血清及血浆置-30℃冰箱供测。
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1.2.2 测定指标及内容 (1)血浆Hcy浓度:采用高效液相色谱法，参照Cornwell报道的方法稍作改良。采用岛津LC-9A型高效液相色谱仪，反相分析柱为碳185μm(250.0mm×4.6mm内径)，荧光检测仪为岛津RF535型，激发波长为385nm，发射波长为515nm、流动相为0.1mol/L磷酸二氢钾(以正磷酸调至酸碱度pH为2.1，含10%乙腈)，具体方法见文献。(2)血清叶酸浓度:采用放射免疫法(RIA)测定，放免药盒购自美国DPC公司，批内变异系数CV=2.3%，n=20，批间变异系数为CV=3.7%，n=20，回收率为97.75%。(3)组织学检测:①电镜标本制备:处死动物后迅速取下主动脉，切下主动脉弓上段3～4mm，兔取下主动脉至髂总动脉分支处纵向剖开，放入4%戊二醛溶液中固定10h以上，然后用磷酸缓冲液(PBS)冲洗3次，每次15min，接着用1%鹅酸固定1h，PBS冲洗2次，每次15min，丙酮酸递度脱水后用1:1包埋剂(丙酮)包埋，再用纯包埋剂浸透，40℃2h聚合，再60℃时24h聚合，最后修块切片，日立H-600型电镜观察。②光镜标本制备:电镜的标本切下后，余下段放入10%福尔马林液中固定，经石蜡包埋、切片，常规苏木素-伊红(HE)染色后进行光镜检测。(4)肝、肾功能和血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、脂蛋白(a)[Lp(a)]测定用日立7060全自动生化分析仪，低密度脂蛋白(LDL)以Firedwald公式LDL(mmol/L)=TC-HDL-TG/2.2，Lp(a)采用免疫比浊法(南京聚力生物医学工程研究所提供试剂)。
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1.2.3 统计学分析 采用Excel软件处理，测值用均值±标准差(X±s)表示。组间差异的显著性用t检验、参数的关系用直线相关分析。
1.3 结果
1.3.1 实验大鼠 第一部分:叶酸缺乏对Hcy水平及动脉损伤的影响，血清叶酸及血浆Hcy浓度实验前、后的变化比较，见表1。
表1 血清叶酸及血浆Hcy浓度实验前后变化比较
注:与对照组相比， ˇ P<0.01，与实验前比较 △ P<0.01
1.3.1.1 主动脉组织学变化 光镜下见叶酸缺乏组大鼠主动脉弓和胸主动脉均出现散在的内皮细胞肿胀，脱落，内弹力膜断裂。有部分内膜同中层平滑肌细胞脱落，形成管壁溃疡及附壁血栓。电镜下见叶酸缺乏组:内皮细胞脱落， 内皮下组织疏松，胶原纤维增生沉着，内弹力膜分裂，分叉，中断。尤其可见平滑肌细胞增生并在内膜下出现。
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1.3.1.2 实验前后肝肾功能的变化 见表2。
表2 两组肝肾功能比较
由表2见，实验后叶酸缺乏组和对照组肝肾功能，包括AST、ALT、BUN、CR、UA测值两组之间无明显差异。
1.3.2 实验兔
1.3.2.1 实验前后血清叶酸和血浆Hcy浓度变化 实验 前血清叶酸、血浆Hcy浓度3组间无明显差异。实验后，给药组血清叶酸浓度明显高于实验前和高Met组及对照组，血浆Hcy浓度断食后2h和7h均低于高Met组，但均高于对照组，见表3。
表3 实验前后血清叶酸和血浆Hcy浓度比较
注:与高蛋氨酸组相比 ˇ P<0.001，与实验前相比 △ P<0.001，与对照组相比 ☆ P<0.01，与断食2h相比 ▲ P<0.01。括弧内为取血离断后时间
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实验前各组断食7h血浆Hcy浓度与血清叶酸浓度呈负相关(r=-0.326，P<0.05)。实验后，对照组及给药组断食7h血浆Hcy浓度与同时采样的血清叶酸浓度呈负相关(分别r=-0.293，r=-0.358，P<0.05)。
1.3.2.2 实验后3组肝、肾功能变化 高Met组ALT、AST均高于对照组，给药组AST明显低于高Met组，ALT同高Met组无差异。肾功能3组间差异无显著性，见表4。
表4 实验后3组肝肾功能比较 (X±s)
注:与高Met组相比， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01
1.3.2.3 实验后血脂、空腹血糖3组比较 高Met组TC、TG、HDL、LDL、Lp(a)均高于对照组，给药组TC、TG低于高 Met组，HDL、LDL、Lp(a)同高Met组无明显差异，空腹血糖3组间差异无显著性。见表5。
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表5 实验后血脂、空腹血糖3组比较 (X±s)
注:与高Met组相比， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01
1.3.2.4 主动脉组织学改变 对照组见一只兔主动脉内膜增生，二只出现内皮细胞肿胀，其余正常。高Met组大部分主动脉肉眼见增厚、粥样斑块、内膜表面混浊、管壁溃疡、钙化点;光镜下示中膜平滑肌细胞肌瘤样增殖，钙化灶及粥样斑块，内皮层增厚，纤维蛋白沉积、内皮细胞脱落、附壁血栓形成及内皮下出现泡沫细胞。给药组大部分出现轻度内皮增生、内皮下水肿、内弹力膜断裂，未见平滑肌增生。
2 小样本人群试验研究
2.1 研究对象 (1)冠心病组:选择不伴有严重肝、肾、肺、脑及其他心脏病的门诊和住院冠心病患者134例(WHO标准)，其中男79例，女55例，平均年龄58.66±9.19岁(41～ 75岁)。134例冠心病中，初发劳累性心绞痛47例(男25例，女22例，年龄54.92±5.89岁)，恶化型劳累性心绞痛45例，(男25例，女20例，年龄59.86±9.49岁)，陈旧性心肌梗死42例(男29例，女13例，年龄62.59±8.52岁)。(2)正常对照组:详细询问病史并经体检与实验室检查(心电图、超声心动图、X线胸片检查和临床生化指标)均正常，并排除心血管系统和消化系统与营养不良性疾病的正常人150例(男、女各为75例)其中21～60岁4组120例为医院工作人员和其他企、事业单位的工作人员;61～70岁组30例均为企事业单位的退休人员，年龄构成见表6。
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表6 150例正常对照组血浆总Hcy和血清叶酸、VitB 12 、VitB 6 水平及相关系数 (X±s)
注:与同一年龄组的男性组比较 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01; # P<0.052.2 研究方法
2.2.1 血浆总Hcy测定 受检对象于上午6时空腹抽取2ml血液置入含有2%乙二胺四乙酸二钠100μl的试管内，离心的血浆标本置-30℃冷藏。具体操作方法见动物实验。
2.2.2 血清叶酸、维生素B 12 和总维生素B 6 测定 在抽取测定血浆总Hcy的血液标本时抽取5ml血液，离心的血清标本置-30℃冷藏。待血清标本收集全后采用放射免疫法 125 I测定叶酸水平、 57 Co测定维生素B 12 水平，试剂采用英国DPC公司的产品。采用DG-3022A型免疫酶联测定仪和96孔培养板(Corning，U.S.A)细菌学微量法测定血清总维生素B 6 水平。
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2.2.3 给予42例冠心病患者和16例对照者上午空腹口服复方叶酸制剂(本院协定处方)一片/天;在服药前和服药后10～12周抽取血液标本，测定血浆总Hcy血清叶酸、维生素B 12 和B 6 水平。未服药的10例冠心病患者在测定血浆总Hcy、血清叶酸、维生素B 12 和B 6 水平后10～12周复查，作为对照。
2.2.4 质控指标 测定血浆总Hcy时由美国SIGMA公司提供的Hcy标准品作对照，并对其作稳定性检验，批内变异为3.52%，批间变异为4.83%。测定叶酸的批内变异为6.1%，批间变异为7.9%。测定维生素B 12 的批内变异为6.6%，批间变异为9.2%。
2.2.5 统计学分析 检测结果用均值±标准差(X±s)表示，资料由计算机运用SPSS6.0版本软件包处理，作t或t′检验、方差分析及因素相关分析。
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2.3 结果
2.3.1 150例正常对照者血浆总Hcy和血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平及相关系数见表6。正常对照者和冠 心病患者血浆总Hcy和血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平及相关系数见表7。口服复方叶酸片对血浆总Hcy和血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平的影响见表8。在冠心病患者中口服复方叶酸片对伴有高Hcy血症者和非高Hcy血症者的血浆总Hcy和血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平的影响见表9:①冠心病患者组血浆Hcy水平显著高于对照组:血浆Hcy水平与冠心病的严重程度一致;②冠心病患者血清叶酸水平显著低于正常对照者(P<0.001);血清叶酸与血浆Hcy水平呈负相关关系，相关性的统计学意义似与病变的严重程度有关;③分年龄段的正常对照者的血清叶酸水平测定表明青年对照者的血清叶酸水平显著低于老年正常对照者，但老年冠心病患者的血清叶酸水平显著低于老年正常对照者(P<0.001);④血清维生素B 12 水平冠心病患者组显著低于正常对照组(P<0.01);与血浆总Hcy水平呈负相关关系(P<0.05);⑤血清维生素B 6 水平，初发劳累性心绞痛患者与正常对照组差异无显著性(P>0.05)，但恶化型劳累性心绞痛患者组和陈旧性心肌梗死患者组显著低于正常对照组(P<0.01和0.001);与血浆Hcy水平无显著相关性(P>0.05)。
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表7 正常对照者和冠心病患者血浆总Hcy和血清叶酸、VitB 12 、VitB 6 水平及相关系数 (X±s)
注:A组:正常对照组;B组:初发劳累性心绞痛组;C组:恶化型劳累性心绞痛组;D组:陈旧性心肌梗死组 ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01
表8 口服复方叶酸片对血浆总Hcy和血清叶酸、VitB 12 、VitB 6 水平的影响 (X±s)
注:与服药前比较 ˇ P<0.001;与服药对照组比较 △ P<0.01， △△ P<0.001
表9 冠心病患者口服复方叶酸片对伴有高Hcy血症者和非高Hcy血症者的血浆总Hcy和血清叶酸、VitB 12 、VitB 6 水平的影响 (X±s)
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注:与服药前比较 ˇ P<0.001;与非高Hcy血症组比较 △ P<0.01， △△ P<0.001
2.3.2 冠心病组和对照组服药前、后比较血浆总Hcy水平均有显著降低(P<0.001)、血清叶酸、维生素B 12 、维生素B 6 水平均有显著增加。血浆总Hcy水平下降和血清叶酸、维生素B 12 、维生素B 6 水平升高幅度在伴有高Hcy血症的冠心病组比不伴有高Hcy血症的冠心病组大。
2.3.3 未服药的10例冠心病患者在测定血浆总Hcy、血清叶酸、维生素B 12 和维生素B6 水平后10～12周复查，结果表明血浆总Hcy、血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平差异无显著性(P?0.05)。
, 百拇医药 3 讨论
同型半胱氨酸(Hcy)是蛋氨酸的代谢产物，系腺苷蛋氨酸水解反应产生的一种含硫氨基酸，在病理情况下由于胱硫醚β合酶缺乏，Hcy代谢发生障碍，在肝细胞内由蛋氨酸生成的Hcy硫内酯，具有高度反应性可与低密度脂蛋白的脂蛋白B的游离氨基酸形成肽键Hcy(酯化)，从而导致细胞摄取并凝聚低密度脂蛋白与胆固醇沉着。此外，尚有其它因素参与内皮损伤及动脉粥样硬化形成过程 [5～7] 。
根据近来研究结果，动脉粥样硬化与Hcy的联系可能有多种机制:(1)游离的硫基基团介导H 2 O 2 生成，产生细胞毒性;(2)同型半胱氨酸(Hcy的二硫化物二聚体)活化Ⅶ因子，促进凝血因子;(3)Hcy抑制C蛋白的活化;(4)生理量的Hcy增加内皮细胞组织因子的促凝活性;(5)内皮舒张因子(EDRF)受损促进单核细胞粘附于内皮细胞;(6)Hcy可增加脂蛋白a[LP(a)]与纤维蛋白结合。最近高分辨率超声证明高Hcy水平的人内皮依赖性血管舒张受损 [8] 。
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本文研究结果提示，实验动物叶酸缺乏组及高Met饲养组，均可导致血浆Hcy浓度明显升高，并产生主动脉内皮细胞肿胀、坏死、内皮下层水肿、胶原纤维沉积和平滑肌细胞增生，血管壁溃疡等改变，严重者甚至出现中膜平滑肌增殖呈肌瘤样改变。但所有实验动物(大鼠及兔)在补充叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 后可以降低Hcy水平，并减轻动脉损伤程度。
在小样本人群研究中发现:冠心病患者初发劳累性心绞痛组血浆总Hcy水平为14.83±2.78μmol/L，恶化型劳累性心绞痛组血浆总Hcy水平为19.25±5.89μmol/L，陈旧性心肌梗死组血浆总Hcy水平为26.32±9.61μmol/L，而对照 组正常人血浆总Hcy水平仅为11.32±2.83μmol/L。提示冠心病患者血浆总Hcy水平显著高于正常对照组。结果也显示，冠心病患者血清叶酸水平(4.89±2.15μg/L)显著低于正常对照者(6.12±2.35μg/L，P<0.001，见表7);血清叶酸与血浆Hcy水平呈负相关 [9～11] 。
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研究结果还显示:血清维生素B 12 水平冠心病患组显著低于正常对照组(P<0.01)，与血浆Hcy水平呈负相关关系(P<0.05);血清维生素B 6 水平，初发劳累性心绞痛患者与正常对照组差异无显著性(P>0.05)，但恶化型劳累性心绞痛患组和陈旧性心肌梗死患者组显著低于正常对照组(P<0.01和0.001);与血浆Hcy水平无显著相关关系(P>0.05)。口服补充叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 对研究对象的血浆Hcy水平的影响，结果表明:冠心病组和对照组服药前、后比较血浆总Hcy水平均有显著性降低(P<0.001)、血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 水平均有显著增加。血浆总Hcy水平下降和血清叶酸、维生素B 12 和维生素B 6水平升高幅度伴有高Hcy血症的冠心病组比不伴有高Hcy血症的冠心病组大。
国外不少学者研究结果表明血浆Hcy水平升高与饮食中叶酸、维生素B 12 含量较少有关，增加富含维生素的饮食摄入有助于减低冠心病危险。并使早发动脉血栓性疾病患者的血浆Hcy水平降低，减少发生冠心病事件的危险(Lancet，2000，355:517)。有作者报道在西方人群中，每天补充0.5～5mg叶酸及约0.5mg维生素B 12 将降低1/4至1/3的血Hcy浓度(BMJ，1998，316:894)。本研究结果提示在实验动物及冠心病患者补充叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 能明显降低血浆Hcy水平，并使动物动脉损伤减轻。近来有学者提出胱硫醚β合酶或N5 ，N 10 -亚甲基四氢叶酸还原酶基因等缺陷，可能由叶酸和维生素B 12 等营养物质所影响。但如何正确调控基因尚待进一步研究 [12～14] 。
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动脉硬化有多种独立危险因素，如高血压、高血脂、吸烟及遗传因素等，本文研究证实Hcy水平升高与冠心病亦有一定关系。在冠心病的一级和二级预防中，适当补充叶酸、维生素B 12 和维生素B 6 ，或许是其中方法之一，值得开展大规模人群的循证医学研究。
参考文献
1 Malinow MR.Plasma homocysteine:a risk factor for arterial occlusive disease.J Nutr，1996，1238-1243.
2 汤佩麟，刘王明，郑家驹，等.高半胱氨酸与动脉粥样硬化关系的研究进展.心血管病学进展，1997，2:95-98.
3 惠汝太.血浆血型半胱氨酸与血管性疾病.中国循环杂志，1999，14(3):129.
, 百拇医药
4 汤佩麟，刘王明，王毓明，等.陈旧性心肌梗塞患者血浆同型半胱氨酸水平测定及其临床意义.国际心血管杂志，1999，1(3):220-222.
5 Nomenclature and criteria for diagnosis of ischemic heart disease:Report of the Joint International Society and Federation of Cardiology/World Health Organization task force and standardization of clinical nomenclaˉture.Circulation，1979，59:607-609.
6 Jacobsen DW，Gatautis VJ，Green R，Robinson K，Savon SR，Secic M，Ji J，Otto JM，Taylor LM Jr.Rapid HPLC determination of total homocysˉteine and other thiols in seurm and plasma:Sex differences and correlaˉtion with cobalamin and folate concentrations in healthy subjects.Clin Chem，1994，40:873-881.
, http://www.100md.com
7 Dalery K，Lussier-Cacan S，Selhub J，et al.Homocysteine and coronary artery disease in French Canadian subjects:Relation with vitamins B 12 ，B 6 ，pyridoxal phosphate，and folate.Am J Cardiol，1995，75:1107- 1111.
8 Chambers JC，Obeid OA，Refsum H，et al.Plasma homocysteine concenˉtrations and risk of coronary heart disease in UK Indian Asian and Euroˉpean men.Lancet，2000，355:523-527.
9 汤佩麟，王毓明，李明珍，等.血浆高半胱氨酸水平和冠心病的关系.中国循环杂志，1997，12(5):324-326.
, 百拇医药
10 汤佩麟.冠心病患者血浆高半胱氨酸和血脂水平的关系.临床心血管病杂志，1998，14(2):76-78.
11 刘王明，汤佩麟，王毓明，李明珍，等.冠心病患者血浆同型半胱氨酸水平与颈动脉内膜-中层厚度的关系.中国循环杂志，1999，14(3):137-139.
12 马雪兴，吉吉铭，刘王明.高同型半胱氨酸血症致动脉粥样硬化机制及干预研究.美国中华心血管病杂志，2000，2(4):298-300.
13 马雪兴，刘王明，吾柏铭，等.高蛋氨酸饲料对血浆同型半胱氨酸水平及动脉损伤的实验研究.美国中华心血管病杂志，2000，2(3):155-158.
14 马雪兴，刘王明，王毓明，吾柏铭，等.叶酸、维生素B 6 、维生素B 12 对大鼠同型半胱氨酸水平及动脉损伤的影响.中国循环杂志，2000，15(6):375-377.
(编辑罗 彬)
作者单位:215008江苏省苏州市第三人民医院心内科, http://www.100md.com(刘王明 郑家驹 汤佩麟 马雪兴 王毓明 李明珍)