免疫印迹法(IBT)从分子水平检测ENA多肽抗体的临床意义
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2003)15-2361-01
ENA试剂盒采用国际先进的生物技术-免疫印迹技术(Immunoblotting)，将具有多种抗原性的细胞核盐水可提取性抗原(DNA)经凝胶电泳分离后，转印于硝酸纤维素膜上，可一次检测8～10种自身抗体，用于系统性红斑狼疮(SLE)、混合性结缔组织病(MCTD)、硬皮病(PSS)、干燥综合征(SS)、多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)及类风湿性关节炎(PA)等六种不同风湿病的诊断和鉴别诊断。与传统方法比较具有敏感性高、特异性强、操作简便快速等优点，适合于各大医院推广应用。
1 材料与方法
1.1 ENA抗原 由恒佳生物工程公司提供。
1.2 受检血清 SLE128例，MCTD17例，SS18例，PSS11例，PM32例，RA35例，共计241例，非结缔组织病包括药 疹、接触性皮炎、多形性红斑、银屑病、多发性斑秃、扁平苔藓等60例，30例健康血清来源于本院血库。
1.3 实验方法 印迹:即转移电泳，由恒佳生物工程公司提供之转移印迹好的硝酸纤维薄膜。酶联免疫:洗涤液用含0.3%Tween-20的pH8.3、0.3mmol/LTris-HCl缓冲液，血清10μl，底物用OPD先将转移电泳好的硝酸纤维薄膜与血清37℃反应40min，再用Tween-20洗涤液洗3次，每次1min，再加辣根过氧化酶标记的抗人IgG抗体37℃反应40min，同上洗涤，加底物反应10min，以流水冲洗中止反应，观察硝酸纤维膜上ENA显色的多肽带分子量。
2 结果见表1。
表1 各组ENA多肽检测的阳性结果 (n，%)
3 讨论
抗SM抗体和抗RNP抗体能识别的蛋白多肽能和B’/B(29/28kD)多肽的反应，说明28/29kD多肽存在SM的抗原决定簇，同时抗SM抗体又和D(13.5kD)多肽反应，说明13.5kD也同样具有SM的抗原决定簇。抗核糖体抗体(Rib)可以和38kD、16.5kD、15kD多肽反应，说明这3条带上都具有Rib的抗原决定簇，而且仅见SLE，支持Rib是SLE的标记性抗体，阳性率占25%。JO-1抗体是DM/PM的标记性抗体，但主要见于PM，本文以IBT法检测PM32例，12例阳性，JO-1抗体和55kD发生反应说明55kD具有JO-1抗体的抗原决定簇，阳性率为37.5%，高于国内外水平，原 因有待进一步探讨。抗RNP抗体在SLE中阳性率为42.2%，在MCTD中占82.4%，抗RNP抗体和ENA多肽抗原中的73kD、32kD、17.5kD发生反应，说明73kD、32kD、17.2kD具有RNP抗体的抗原决定簇。该抗体几乎见于100%的MCTD病人和30%～40%的SLE病人，其它疾病虽可出现，但效价较低，该抗体对于确诊MCTD和研究SLE亚型有重要意义。本文中SSA抗体和52kD反应，SSB抗体和47、48、45kD反应，Scl-70抗体和70kD反应，但病例甚少，其意义有待进一步研究。
我们还发现多数抗SM抗体阳性病人都同时伴有RNP抗体，说明这两种抗原难于纯化和分离，它们之间存在一定的生物学联系。
作者单位:1010050内蒙古医学院第一附属医院皮肤科
2内蒙古丰镇县医院
(编辑李年令), 百拇医药(罗夏)
ENA试剂盒采用国际先进的生物技术-免疫印迹技术(Immunoblotting)，将具有多种抗原性的细胞核盐水可提取性抗原(DNA)经凝胶电泳分离后，转印于硝酸纤维素膜上，可一次检测8～10种自身抗体，用于系统性红斑狼疮(SLE)、混合性结缔组织病(MCTD)、硬皮病(PSS)、干燥综合征(SS)、多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)及类风湿性关节炎(PA)等六种不同风湿病的诊断和鉴别诊断。与传统方法比较具有敏感性高、特异性强、操作简便快速等优点，适合于各大医院推广应用。
1 材料与方法
1.1 ENA抗原 由恒佳生物工程公司提供。
1.2 受检血清 SLE128例，MCTD17例，SS18例，PSS11例，PM32例，RA35例，共计241例，非结缔组织病包括药 疹、接触性皮炎、多形性红斑、银屑病、多发性斑秃、扁平苔藓等60例，30例健康血清来源于本院血库。
1.3 实验方法 印迹:即转移电泳，由恒佳生物工程公司提供之转移印迹好的硝酸纤维薄膜。酶联免疫:洗涤液用含0.3%Tween-20的pH8.3、0.3mmol/LTris-HCl缓冲液，血清10μl，底物用OPD先将转移电泳好的硝酸纤维薄膜与血清37℃反应40min，再用Tween-20洗涤液洗3次，每次1min，再加辣根过氧化酶标记的抗人IgG抗体37℃反应40min，同上洗涤，加底物反应10min，以流水冲洗中止反应，观察硝酸纤维膜上ENA显色的多肽带分子量。
2 结果见表1。
表1 各组ENA多肽检测的阳性结果 (n，%)
3 讨论
抗SM抗体和抗RNP抗体能识别的蛋白多肽能和B’/B(29/28kD)多肽的反应，说明28/29kD多肽存在SM的抗原决定簇，同时抗SM抗体又和D(13.5kD)多肽反应，说明13.5kD也同样具有SM的抗原决定簇。抗核糖体抗体(Rib)可以和38kD、16.5kD、15kD多肽反应，说明这3条带上都具有Rib的抗原决定簇，而且仅见SLE，支持Rib是SLE的标记性抗体，阳性率占25%。JO-1抗体是DM/PM的标记性抗体，但主要见于PM，本文以IBT法检测PM32例，12例阳性，JO-1抗体和55kD发生反应说明55kD具有JO-1抗体的抗原决定簇，阳性率为37.5%，高于国内外水平，原 因有待进一步探讨。抗RNP抗体在SLE中阳性率为42.2%，在MCTD中占82.4%，抗RNP抗体和ENA多肽抗原中的73kD、32kD、17.5kD发生反应，说明73kD、32kD、17.2kD具有RNP抗体的抗原决定簇。该抗体几乎见于100%的MCTD病人和30%～40%的SLE病人，其它疾病虽可出现，但效价较低，该抗体对于确诊MCTD和研究SLE亚型有重要意义。本文中SSA抗体和52kD反应，SSB抗体和47、48、45kD反应，Scl-70抗体和70kD反应，但病例甚少，其意义有待进一步研究。
我们还发现多数抗SM抗体阳性病人都同时伴有RNP抗体，说明这两种抗原难于纯化和分离，它们之间存在一定的生物学联系。
作者单位:1010050内蒙古医学院第一附属医院皮肤科
2内蒙古丰镇县医院
(编辑李年令), 百拇医药(罗夏)