p27、增殖细胞核抗原的表达与胃癌临床病理的关系
【摘要】 目的 探讨胃癌中p27蛋白、PCNA表达与临床病理的关系。方法 应用免疫组化SP法检测52例胃癌组织中p27蛋白、PCNA表达情况。结果 52例胃癌组织中p27蛋白、PCNA表达阳性率分别为36.5%、71.2%。p27蛋白的阳性表达随着肿瘤的分化程度降低、恶性程度的增高和浸润深度的加深，其表达的阳性率逐渐降低，而PCNA的表达则相反。p27蛋白、PCNA表达与胃癌预后有关。结论 p27蛋白、PCNA的检测可作为判断胃癌恶性程度、预测肿瘤转移和预后的参考指标。
关键词 p27 增殖细胞核抗原 胃肿瘤 免疫组织化学
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)18-1682-03
The relationship between the expression of p27protein，proliferating nuclear
, 百拇医药
antigen(PCNA)and clinicopathologic feature of human gastric carcinoma
Zhao Shupeng，Ren Xiyue，Gao Zhian，et al.
Department of Surgery，The First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University，Jinzhou121001.
【Abstract】 Objective To detect The relationship between the expression of p27protein，proliferating nuclear antigen and clinicopathologic feature of human gastric carcinoma.Methods Using SP immunohistochemical methods，the positive rates of p27protein and PCNA were detected in52specimens of gastric carcinoma.Results The positive expressions for p27protein and PCNA were36.5%，71.2%，respectively，the positive rates of p27protein decreased with the progression of the pathological grade and invasion，while the positive rates of PCNA increased(P<0.05).The expressions of p27protein，PCNA were pertinent to prognosis of patients.Conclusion The detection of p27protein，PCNA could be used to evaluate the malignantdegree，predict metastasis and prognosis of gastric carcinoma.
, 百拇医药
Key words p27 proliferating nuclear antigen gastric turmor immunohistochemical
本研究应用免疫组化SP法检测基本正常胃粘膜、癌前病变、胃癌患者p27、PCNA蛋白表达的情况，并结合临床病理及预后指标进行临床分析，探讨其与胃癌发生发展的关系，以期为胃癌的发生学研究积累资料，为胃癌的早期诊断，估计预后提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 标本来源 标本取自于1995～2002年间在我院胃大部分切除及胃镜活检的石蜡包埋标本，这些标本术前均未经化疗及放疗，标本取材后均经10%福尔马林固定，石蜡包埋。每例均制成5μm厚的连续切片，行HE及免疫组化染色。
1.2 胃癌的组织学分型及分级 常规伊红-苏木精染色，经两名病理医师诊断，基本正常胃粘膜11例、中-重度肠腺上皮化生9例、中-重度不典型增生8例、胃癌52例。其中管状腺癌13例，乳头状腺癌9例，低分化腺癌12例，粘液腺癌18例。组织学分级:高中分化胃癌24例，低分化胃癌28例。
, 百拇医药
1.3 免疫组织化学染色 采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法)。试剂:即用型p27鼠抗人单克隆抗体，PCNA抗体，即用型超敏SP(鼠抗兔)试剂盒及液体DAB酶底物显色试剂盒均购于福州迈新公司。染色方法参照试剂盒说明。每批试验采用已知胃癌p27，PCNA阳性切片为阳 性对照。以PBS替代一抗为阴性对照。
1.4 结果判定 以细胞核出现清晰的棕黄色颗粒定为阳性细胞。随机选择10个高倍视野，观察1000个癌细胞，计算阳性细胞的百分比，分别记录为:(1)(-):p27阳性细胞数<10%;PCNA阳性细胞数<20%;(2)(+):p27阳性细胞数在10%以上;PCNA阳性细胞数20%以上。
1.5统计学处理 采用卡方检验。
2 结果
2.1 p27蛋白、PCNA表达与不同类型胃粘膜组织的关系 见表1。
, 百拇医药
表1 p27蛋白、PCNA表达与不同类型胃粘膜组织的关系
胃癌组p27蛋白的表达虽然低于基本正常胃粘膜组、肠上皮化生组及不典型增生组，但组间比较，差异均无显著性(P>0.05)。而PCNA在胃癌组的表达明显高于基本正常胃粘膜组、肠上皮化生组及不典型增生组(P<0.05)。
2.2 p27蛋白、PCNA的表达与临床病理特征的关系 见表2。
表2 p27蛋白、PCNA表达与临床病理特征的关系
管状腺癌和乳头状腺癌中p27蛋白的阳性表达高于低分化腺癌、粘液腺癌(P<0.05)。而在管状腺癌和乳头状腺癌、低分化腺癌和粘液腺癌之间，虽然p27蛋白表达有差异，但经统计学处理，差异均无显著性(P>0.05)。而高中分化胃癌组p27蛋白的阳性表达明显高于低分化胃癌组(P<0.05)。随着浸润深度的加深，p27蛋白的阳性表达明显下降，但浸润深度局限在粘膜下层与浆膜以内组比较，差异无显著性(X 2 =3.35，P>0.05)。而浸润深度在浆膜以内组与超出浆膜组比较，差异有显著性(P<0.05)。52例胃癌中，28例淋巴结癌转移，4例p27蛋白阳性表达(14.3%);24例淋巴结无癌转移，15例p27蛋白阳性表达(62.5%)。p27蛋白的表达在有淋巴结转移和无淋巴结转移组比较，差异有显著性(P<0.05)。而PCNA的表达随着肿瘤分化程度的降低，浸润深度的增加，淋巴结癌转移的出现明显增加，且组间比较，差异有显著性(P<0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
胃癌的发生发展是非常复杂的病变过程，涉及多种癌基因和抑癌基因的表达和调控，病变常经历正常胃粘膜-肠上皮化生-不典型增生-胃癌的演变过程。p27基因定位于人12号染色体的12P 12.0 ～12P 13.1 区域内，含有2个外显子和1个内含子。虽然p27能广泛的抑制各种周期素和CDK的活性，但对细胞周期素E-CDK 2 和细胞周期素D-CDK 4 等G 1 期激酶复合物作用较强，通过上述作用机制，使细胞周期停止在G 1 期，使细胞有机会修复损伤的DNA或DNA复制中产生的错误。到目前为止的研究表明，尽管p27参与细胞周期调节的机制错综复杂，但可以肯定的是p27对细胞周期的调控主要依赖于其蛋白的表达水平，而 非基因突变 [1～3] olyak[4] 等研究表明，p27蛋白的表达水平及活性的改变与肿瘤的形成有关。在垂体瘤、甲状腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌等组织中，p27蛋白的表达水平显著低于正常组织 [5～8] 。本研究观察了p27蛋白在不同胃粘膜中有不同的表达，随着病变的发展，表达率呈下降趋势。在基本正常胃粘膜组、中-重度肠上皮化生组、中-重度不典型增生组、胃癌组，p27蛋白的表达分别为63.5%、55.6%、50%、36%，各组间进行统计学处理，差异均无显著性(X 2 =2.75，P>0.05)。提示p27蛋白的表达缺失可能不发生在癌变的早期阶段。分析p27蛋白表达与不同组织学类型、不同分化程度的关系，发现在高中分化胃癌组，p27蛋白阳性率(58.3%)明显高于低分化胃癌组(17.9%)，差异有显著性(P<0.05)。而在管状腺癌和乳头状腺癌组，p27蛋白呈高表达，分别为61.5%、66.7%，在粘液腺癌、低分化腺癌组蛋白呈低表达，分别为11.1%、16.7%，差异有显著性(P<0.05)。观察p27蛋白表达与癌组织浸润深度及有无淋巴结转移的关系发现，p27蛋白表达在浸润深度未超出粘膜下层组为71.4%，未超出浆膜组38.9%，虽然p27的蛋白表达明显下降，但经统计学处理，差异无显著性(P>0.05)。浸润深度超出浆膜组的蛋白表达为10%，和前两组相比，差异均具有显著性(P<0.05)。研究还发现，无淋巴结转移的胃癌组，p27蛋白表达缺失率(37.5%)明显低于有淋巴结转移组(85.7%)，差异有显著性(P<0.05)。提示p27蛋白表达缺失可能对胃癌的恶性进展及转移有一定的作用，并与胃癌的组织学类型有关。PCNA是一种Mr为36000的核蛋白，仅在增殖细胞S期、G 1 期和G 2 初期表达，能与DNA多聚酶δ结合，参与DNA复制。检测PCNA可客观反应细胞增殖特性，它的表达与细胞增殖状态密切相关，检测结果对判断肿瘤的分化和预后有重要的价值 [9，10] 。本研究中PCNA在低分化胃癌组的表达明显高于高分化胃癌组，在有淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组，浸润深度超出浆膜组的表达明显高于未超出浆膜组，提示肿瘤的增殖活性与分化程度的变化规律。因而p27蛋白、PCˉNA表达状况可作为对胃癌生物学行为和评估胃癌预后的生物学指标。
, 百拇医药
参考文献
1 Kawamata N，Morosettir，Miller Cw，et al.Molecular analysis of the Cyˉclin-dependent kinase inhibitor gene p27/kip.Cancer Res，1995，55(8):2266-2269.
2 Ponce-Castaneda MV，Lee MH，Latres E，et al.p27 kip1 :Chromosomal mappingto12P12-12P13.1and absence of mutation in human maligˉnancies.Cancer Res，1995，55:1211-1214.
3 Spirin Ks，Simpson JF，Jakeuchi S，et al.p27/kip1mutation found in breast cancer.Res，1996，56:2400.
, 百拇医药
4 Polyak K，Lee MH，Erdjument-Bromage H，et al.Cloning of p27 kip ，a cyclin-dependent kinase inhibitor and a potential mediator of exbracelˉlular antimitogenic signals.Cell，1994，78:59-66.
5 Lioyd RV，Jin L，Quan X，et al.Aberrant p27kip1expression in enˉdocrine and other tumor.Am J Pathol，1997，150:401.
6 Tan P，Cady B，WannerM，et al.The cell cycle inhibitor p27is an indeˉpendent prognostic marker in small(Tla，b)invasive breast carcinomas.Cancer Res，1997，57:1259.
, 百拇医药
7 Loda M，Cukor B，Tam SW，et al.increased proteasome-dependent degradation of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27in aggressive colorectal carcinomas.Nat Med，1997，3:231.
8 Yasui W，Kudo Y，Semba S，et al.Redused expression of cyclin-deˉpendent kinase inhibitor p27is assiociated with advanced stage and inˉvasiveness of gastric carcinomas.Jpn J Cancer Res，1997，88:625.
9 Kurki P，Lotz M，Ogata K，et al.Proliferating cell nuclear antigen(PCˉNA)/cyclin in activated human T lymphocytes.J Immunol，1987，138: 4114-4120.
10 Al-Sheneber IF，Shibata HR，Sampalis J，et al.Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in colorectal cancer.Canˉcer，1993，71:1954-1959.
(编辑黄 杰)
作者单位:121001辽宁省锦州医学院附属第一医院普外科
辽宁省黑山县红十字会医院检验科, 百拇医药(赵树鹏)
关键词 p27 增殖细胞核抗原 胃肿瘤 免疫组织化学
【文献标识码】 A 【文章编号】 1609-6614(2003)18-1682-03
The relationship between the expression of p27protein，proliferating nuclear
, 百拇医药
antigen(PCNA)and clinicopathologic feature of human gastric carcinoma
Zhao Shupeng，Ren Xiyue，Gao Zhian，et al.
Department of Surgery，The First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University，Jinzhou121001.
【Abstract】 Objective To detect The relationship between the expression of p27protein，proliferating nuclear antigen and clinicopathologic feature of human gastric carcinoma.Methods Using SP immunohistochemical methods，the positive rates of p27protein and PCNA were detected in52specimens of gastric carcinoma.Results The positive expressions for p27protein and PCNA were36.5%，71.2%，respectively，the positive rates of p27protein decreased with the progression of the pathological grade and invasion，while the positive rates of PCNA increased(P<0.05).The expressions of p27protein，PCNA were pertinent to prognosis of patients.Conclusion The detection of p27protein，PCNA could be used to evaluate the malignantdegree，predict metastasis and prognosis of gastric carcinoma.
, 百拇医药
Key words p27 proliferating nuclear antigen gastric turmor immunohistochemical
本研究应用免疫组化SP法检测基本正常胃粘膜、癌前病变、胃癌患者p27、PCNA蛋白表达的情况，并结合临床病理及预后指标进行临床分析，探讨其与胃癌发生发展的关系，以期为胃癌的发生学研究积累资料，为胃癌的早期诊断，估计预后提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 标本来源 标本取自于1995～2002年间在我院胃大部分切除及胃镜活检的石蜡包埋标本，这些标本术前均未经化疗及放疗，标本取材后均经10%福尔马林固定，石蜡包埋。每例均制成5μm厚的连续切片，行HE及免疫组化染色。
1.2 胃癌的组织学分型及分级 常规伊红-苏木精染色，经两名病理医师诊断，基本正常胃粘膜11例、中-重度肠腺上皮化生9例、中-重度不典型增生8例、胃癌52例。其中管状腺癌13例，乳头状腺癌9例，低分化腺癌12例，粘液腺癌18例。组织学分级:高中分化胃癌24例，低分化胃癌28例。
, 百拇医药
1.3 免疫组织化学染色 采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法)。试剂:即用型p27鼠抗人单克隆抗体，PCNA抗体，即用型超敏SP(鼠抗兔)试剂盒及液体DAB酶底物显色试剂盒均购于福州迈新公司。染色方法参照试剂盒说明。每批试验采用已知胃癌p27，PCNA阳性切片为阳 性对照。以PBS替代一抗为阴性对照。
1.4 结果判定 以细胞核出现清晰的棕黄色颗粒定为阳性细胞。随机选择10个高倍视野，观察1000个癌细胞，计算阳性细胞的百分比，分别记录为:(1)(-):p27阳性细胞数<10%;PCNA阳性细胞数<20%;(2)(+):p27阳性细胞数在10%以上;PCNA阳性细胞数20%以上。
1.5统计学处理 采用卡方检验。
2 结果
2.1 p27蛋白、PCNA表达与不同类型胃粘膜组织的关系 见表1。
, 百拇医药
表1 p27蛋白、PCNA表达与不同类型胃粘膜组织的关系
胃癌组p27蛋白的表达虽然低于基本正常胃粘膜组、肠上皮化生组及不典型增生组，但组间比较，差异均无显著性(P>0.05)。而PCNA在胃癌组的表达明显高于基本正常胃粘膜组、肠上皮化生组及不典型增生组(P<0.05)。
2.2 p27蛋白、PCNA的表达与临床病理特征的关系 见表2。
表2 p27蛋白、PCNA表达与临床病理特征的关系
管状腺癌和乳头状腺癌中p27蛋白的阳性表达高于低分化腺癌、粘液腺癌(P<0.05)。而在管状腺癌和乳头状腺癌、低分化腺癌和粘液腺癌之间，虽然p27蛋白表达有差异，但经统计学处理，差异均无显著性(P>0.05)。而高中分化胃癌组p27蛋白的阳性表达明显高于低分化胃癌组(P<0.05)。随着浸润深度的加深，p27蛋白的阳性表达明显下降，但浸润深度局限在粘膜下层与浆膜以内组比较，差异无显著性(X 2 =3.35，P>0.05)。而浸润深度在浆膜以内组与超出浆膜组比较，差异有显著性(P<0.05)。52例胃癌中，28例淋巴结癌转移，4例p27蛋白阳性表达(14.3%);24例淋巴结无癌转移，15例p27蛋白阳性表达(62.5%)。p27蛋白的表达在有淋巴结转移和无淋巴结转移组比较，差异有显著性(P<0.05)。而PCNA的表达随着肿瘤分化程度的降低，浸润深度的增加，淋巴结癌转移的出现明显增加，且组间比较，差异有显著性(P<0.05)。
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3 讨论
胃癌的发生发展是非常复杂的病变过程，涉及多种癌基因和抑癌基因的表达和调控，病变常经历正常胃粘膜-肠上皮化生-不典型增生-胃癌的演变过程。p27基因定位于人12号染色体的12P 12.0 ～12P 13.1 区域内，含有2个外显子和1个内含子。虽然p27能广泛的抑制各种周期素和CDK的活性，但对细胞周期素E-CDK 2 和细胞周期素D-CDK 4 等G 1 期激酶复合物作用较强，通过上述作用机制，使细胞周期停止在G 1 期，使细胞有机会修复损伤的DNA或DNA复制中产生的错误。到目前为止的研究表明，尽管p27参与细胞周期调节的机制错综复杂，但可以肯定的是p27对细胞周期的调控主要依赖于其蛋白的表达水平，而 非基因突变 [1～3] olyak[4] 等研究表明，p27蛋白的表达水平及活性的改变与肿瘤的形成有关。在垂体瘤、甲状腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌等组织中，p27蛋白的表达水平显著低于正常组织 [5～8] 。本研究观察了p27蛋白在不同胃粘膜中有不同的表达，随着病变的发展，表达率呈下降趋势。在基本正常胃粘膜组、中-重度肠上皮化生组、中-重度不典型增生组、胃癌组，p27蛋白的表达分别为63.5%、55.6%、50%、36%，各组间进行统计学处理，差异均无显著性(X 2 =2.75，P>0.05)。提示p27蛋白的表达缺失可能不发生在癌变的早期阶段。分析p27蛋白表达与不同组织学类型、不同分化程度的关系，发现在高中分化胃癌组，p27蛋白阳性率(58.3%)明显高于低分化胃癌组(17.9%)，差异有显著性(P<0.05)。而在管状腺癌和乳头状腺癌组，p27蛋白呈高表达，分别为61.5%、66.7%，在粘液腺癌、低分化腺癌组蛋白呈低表达，分别为11.1%、16.7%，差异有显著性(P<0.05)。观察p27蛋白表达与癌组织浸润深度及有无淋巴结转移的关系发现，p27蛋白表达在浸润深度未超出粘膜下层组为71.4%，未超出浆膜组38.9%，虽然p27的蛋白表达明显下降，但经统计学处理，差异无显著性(P>0.05)。浸润深度超出浆膜组的蛋白表达为10%，和前两组相比，差异均具有显著性(P<0.05)。研究还发现，无淋巴结转移的胃癌组，p27蛋白表达缺失率(37.5%)明显低于有淋巴结转移组(85.7%)，差异有显著性(P<0.05)。提示p27蛋白表达缺失可能对胃癌的恶性进展及转移有一定的作用，并与胃癌的组织学类型有关。PCNA是一种Mr为36000的核蛋白，仅在增殖细胞S期、G 1 期和G 2 初期表达，能与DNA多聚酶δ结合，参与DNA复制。检测PCNA可客观反应细胞增殖特性，它的表达与细胞增殖状态密切相关，检测结果对判断肿瘤的分化和预后有重要的价值 [9，10] 。本研究中PCNA在低分化胃癌组的表达明显高于高分化胃癌组，在有淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组，浸润深度超出浆膜组的表达明显高于未超出浆膜组，提示肿瘤的增殖活性与分化程度的变化规律。因而p27蛋白、PCˉNA表达状况可作为对胃癌生物学行为和评估胃癌预后的生物学指标。
, 百拇医药
参考文献
1 Kawamata N，Morosettir，Miller Cw，et al.Molecular analysis of the Cyˉclin-dependent kinase inhibitor gene p27/kip.Cancer Res，1995，55(8):2266-2269.
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4 Polyak K，Lee MH，Erdjument-Bromage H，et al.Cloning of p27 kip ，a cyclin-dependent kinase inhibitor and a potential mediator of exbracelˉlular antimitogenic signals.Cell，1994，78:59-66.
5 Lioyd RV，Jin L，Quan X，et al.Aberrant p27kip1expression in enˉdocrine and other tumor.Am J Pathol，1997，150:401.
6 Tan P，Cady B，WannerM，et al.The cell cycle inhibitor p27is an indeˉpendent prognostic marker in small(Tla，b)invasive breast carcinomas.Cancer Res，1997，57:1259.
, 百拇医药
7 Loda M，Cukor B，Tam SW，et al.increased proteasome-dependent degradation of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27in aggressive colorectal carcinomas.Nat Med，1997，3:231.
8 Yasui W，Kudo Y，Semba S，et al.Redused expression of cyclin-deˉpendent kinase inhibitor p27is assiociated with advanced stage and inˉvasiveness of gastric carcinomas.Jpn J Cancer Res，1997，88:625.
9 Kurki P，Lotz M，Ogata K，et al.Proliferating cell nuclear antigen(PCˉNA)/cyclin in activated human T lymphocytes.J Immunol，1987，138: 4114-4120.
10 Al-Sheneber IF，Shibata HR，Sampalis J，et al.Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in colorectal cancer.Canˉcer，1993，71:1954-1959.
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作者单位:121001辽宁省锦州医学院附属第一医院普外科
辽宁省黑山县红十字会医院检验科, 百拇医药(赵树鹏)