体外HAP纳米粒子抑癌实验中的影响因素
【摘要】 目的 主要探讨溶媒水在体外HAP纳米粒子抑癌实验中的影响作用。方法 通过体外细胞培养，分正常组、药物作用组以及三种不同加水量的对照组，采用MTT法测定各组OD值并计算抑制率。结果 HAP纳米粒子药物作用组抑制率于第五天达85.3%，等体积水对照组为27.6%;对Bel-7402细胞的抑制作用大小与所加水的量相关，所加水越多对细胞的抑制作用越大，但加水量小对细胞无影响。结论 对照组选择的不同对体外HAP纳米粒子抑癌实验中抑瘤作用大小的评价存在一定的影响。
关键词 水 HAP纳米粒子 抑癌
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-077X(2003)02-0097-02
The effective factors in experiment of HAP
nanoparticles inhibiting cancer cells in vitro
, 百拇医药
Wang Honghui，Cao Xianying，Wang Youfa，et al.
Biomedical Muterials and Engineering Research contre of W.V.T，Wuhan430070.
【Abstract】 Objective Mainly to discuss the effective of water in experiment of HAP nanoparticles inhibiting cancer cells in vitro.Mathods Normal group，drug action group and comparison groups which added three different quantities of water were divided，extracorporeal cell culture of Bel-7402cells and MTT colormetric assaywere used to mensure the inhibition rate of the given groups.Results After5days，the inhibition rate of HAP nanoparticles group is85.3%and the rate of the water group who added the same volume is27.6%.The inhibition rate is correlation to the water quantum added，that is，more water added，more greater the inhibition rate is.But little quantities of water have no influence on the Bel-7402cells.Conclusion There has a little influence in evaluating the effection of HAP nanoparticles on inhibiting cancer cells in vitro，if we select different comparison group.
, 百拇医药
Key words water HAP nanoparticles inhibiting cancer cells
羟基磷灰石纳米粒子(HAP)对多种癌细胞的生长具有抑制作用，有望成为一种新型的抗癌药物 [1] 。过去，我们在体外抑癌实验中，以生理盐水作为溶媒对照组，其对肝癌Bel-7402细胞的抑制作用最高可达85%以上，并且差异存在显著性。实验过程中对照组的选择是一个值得注意的问题，它对HAP纳米粒子抑癌作用的评价存在着一定的影响。本文针对这个问题，采用MTT法，选择溶媒水作为对照组，对其在体外HAP纳米粒子抑癌实验中的影响作用大小进行了探讨。
1材料与方法
1.1 仪器、试剂 CO 2 培养箱(NU-4500E，美国)，酶标仪(MB-Ⅲ，北京)，HAP纳米溶胶液(浓度1.4mg/ml)，由武汉理工大学生物材料与工程研究中心制备，MTT、DMSO(二甲基亚砜)均为Sigma公司产品。
, 百拇医药
1.2 Bel-7402细胞 来源于中科院上海细胞所，购自武汉大学典型培养物保藏中心，用含20%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养液培养。
1.3 方法
1.3.1 实验分组 药物作用组:加入HAP纳米溶胶液;正常对照组:加入等量培养液;实验对照组:分三组，分别加入相应量消毒三蒸水。
1.3.2 肿瘤细胞抑制率测定 采用MTT法 [2] ，取对数生长期的Bel-7402细胞，用含20%胎牛血清的RPMI-1640培养液配成5×10 4 /ml细胞悬液，接种于96孔培养板内，100μl/孔，待细胞贴壁后，药物作用组加含药培养液，实验对照组分别加相应量消毒三蒸水，置37℃、5%CO 2 培养箱中培养5天，于第5天取样，每孔去上清后加50μlMTT溶液，继续培养4h，小心吸去培养液，加入DMSO，150μl/孔，轻轻震荡10min后用酶标仪测量每孔570nm处吸光度(OD)值，计算每组肿瘤细胞抑制率IR=(1-实验孔平均OD值/正常组平均OD值)×100%。
, 百拇医药
2 结果
HAP纳米粒子药物作用组抑制率于第五天达85.3%，水对照组为27.6%;对Bel-7402细胞的抑制作用大小与所加水的量相关，所加水越多对细胞的抑制作用越大，但加水量小对细胞无影响。见表1。
3 讨论
在体外细胞培养的过程中，对细胞生长的影响因子众多，包括温度、水、CO 2 、营养、渗透压、微生物的污染等等。要控制所有这些影响条件，实属不易。因此，在实验过程中难免会产生一些外界的或人为的影响，使实验结果产生误差。本实验中，HAP纳米溶胶体系，其组成主要成分HAP纳米粒子、稳定剂、溶媒水等;在体外肿瘤细胞抑制实验中，发挥主要作用的虽然是HAP纳米粒子，但是其他成分对肿瘤细胞会产生或多或少的作用，这种作用直接影响着我们对体外HAP纳米粒子抑癌作用效果的评价。本实验的设计，旨在单独提取HAP纳米溶胶体系中的某一成分，探讨其对体外培养的Bel-7402细胞的抑制作用大小，从实验结果不难看出:对Bel-7402细胞的抑制作用大小与所加水的量相关，所加水的量越多对细胞的抑制作用越大，加水量少则对细胞生长无影响。总的来说，水的这种作用是有限的， 对体外抑瘤效果的评价有一定影响，但不是很大。水的这种作用，推测不是它的直接作用产生的，而是通过改变整个培养环境的渗透压、离子浓度亦/或对培养液的稀释形成的。因为过去我们采用生理盐水作为对照组，就看不到这种作用。有关HAP纳米粒子体外抑制癌细胞作用的机理有待我们进一步证实和研究。
, http://www.100md.com
表1 HAP纳米粒子对Bel-7402细胞增殖5天的影响(略)
参考文献
1 Feng Lingyun，Li Shipu，Yan Yuhua.The Effect of CaCO 3 and TiO 2nanometer particles on A 549 and L 929 cells.Bioceramics，2000，13:325- 328.
2 司徒镇强，吴军正.细胞培养，西安:世界图书出版公司，2000，186-187.
基金项目:湖北省科技攻关重大项目(2002AA105A)
作者单位:430070湖北武汉理工大学生物中心
(收稿日期:2002-10-25)
(编辑 一坤), 百拇医药(王红晖)
关键词 水 HAP纳米粒子 抑癌
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-077X(2003)02-0097-02
The effective factors in experiment of HAP
nanoparticles inhibiting cancer cells in vitro
, 百拇医药
Wang Honghui，Cao Xianying，Wang Youfa，et al.
Biomedical Muterials and Engineering Research contre of W.V.T，Wuhan430070.
【Abstract】 Objective Mainly to discuss the effective of water in experiment of HAP nanoparticles inhibiting cancer cells in vitro.Mathods Normal group，drug action group and comparison groups which added three different quantities of water were divided，extracorporeal cell culture of Bel-7402cells and MTT colormetric assaywere used to mensure the inhibition rate of the given groups.Results After5days，the inhibition rate of HAP nanoparticles group is85.3%and the rate of the water group who added the same volume is27.6%.The inhibition rate is correlation to the water quantum added，that is，more water added，more greater the inhibition rate is.But little quantities of water have no influence on the Bel-7402cells.Conclusion There has a little influence in evaluating the effection of HAP nanoparticles on inhibiting cancer cells in vitro，if we select different comparison group.
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Key words water HAP nanoparticles inhibiting cancer cells
羟基磷灰石纳米粒子(HAP)对多种癌细胞的生长具有抑制作用，有望成为一种新型的抗癌药物 [1] 。过去，我们在体外抑癌实验中，以生理盐水作为溶媒对照组，其对肝癌Bel-7402细胞的抑制作用最高可达85%以上，并且差异存在显著性。实验过程中对照组的选择是一个值得注意的问题，它对HAP纳米粒子抑癌作用的评价存在着一定的影响。本文针对这个问题，采用MTT法，选择溶媒水作为对照组，对其在体外HAP纳米粒子抑癌实验中的影响作用大小进行了探讨。
1材料与方法
1.1 仪器、试剂 CO 2 培养箱(NU-4500E，美国)，酶标仪(MB-Ⅲ，北京)，HAP纳米溶胶液(浓度1.4mg/ml)，由武汉理工大学生物材料与工程研究中心制备，MTT、DMSO(二甲基亚砜)均为Sigma公司产品。
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1.2 Bel-7402细胞 来源于中科院上海细胞所，购自武汉大学典型培养物保藏中心，用含20%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养液培养。
1.3 方法
1.3.1 实验分组 药物作用组:加入HAP纳米溶胶液;正常对照组:加入等量培养液;实验对照组:分三组，分别加入相应量消毒三蒸水。
1.3.2 肿瘤细胞抑制率测定 采用MTT法 [2] ，取对数生长期的Bel-7402细胞，用含20%胎牛血清的RPMI-1640培养液配成5×10 4 /ml细胞悬液，接种于96孔培养板内，100μl/孔，待细胞贴壁后，药物作用组加含药培养液，实验对照组分别加相应量消毒三蒸水，置37℃、5%CO 2 培养箱中培养5天，于第5天取样，每孔去上清后加50μlMTT溶液，继续培养4h，小心吸去培养液，加入DMSO，150μl/孔，轻轻震荡10min后用酶标仪测量每孔570nm处吸光度(OD)值，计算每组肿瘤细胞抑制率IR=(1-实验孔平均OD值/正常组平均OD值)×100%。
, 百拇医药
2 结果
HAP纳米粒子药物作用组抑制率于第五天达85.3%，水对照组为27.6%;对Bel-7402细胞的抑制作用大小与所加水的量相关，所加水越多对细胞的抑制作用越大，但加水量小对细胞无影响。见表1。
3 讨论
在体外细胞培养的过程中，对细胞生长的影响因子众多，包括温度、水、CO 2 、营养、渗透压、微生物的污染等等。要控制所有这些影响条件，实属不易。因此，在实验过程中难免会产生一些外界的或人为的影响，使实验结果产生误差。本实验中，HAP纳米溶胶体系，其组成主要成分HAP纳米粒子、稳定剂、溶媒水等;在体外肿瘤细胞抑制实验中，发挥主要作用的虽然是HAP纳米粒子，但是其他成分对肿瘤细胞会产生或多或少的作用，这种作用直接影响着我们对体外HAP纳米粒子抑癌作用效果的评价。本实验的设计，旨在单独提取HAP纳米溶胶体系中的某一成分，探讨其对体外培养的Bel-7402细胞的抑制作用大小，从实验结果不难看出:对Bel-7402细胞的抑制作用大小与所加水的量相关，所加水的量越多对细胞的抑制作用越大，加水量少则对细胞生长无影响。总的来说，水的这种作用是有限的， 对体外抑瘤效果的评价有一定影响，但不是很大。水的这种作用，推测不是它的直接作用产生的，而是通过改变整个培养环境的渗透压、离子浓度亦/或对培养液的稀释形成的。因为过去我们采用生理盐水作为对照组，就看不到这种作用。有关HAP纳米粒子体外抑制癌细胞作用的机理有待我们进一步证实和研究。
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表1 HAP纳米粒子对Bel-7402细胞增殖5天的影响(略)
参考文献
1 Feng Lingyun，Li Shipu，Yan Yuhua.The Effect of CaCO 3 and TiO 2nanometer particles on A 549 and L 929 cells.Bioceramics，2000，13:325- 328.
2 司徒镇强，吴军正.细胞培养，西安:世界图书出版公司，2000，186-187.
基金项目:湖北省科技攻关重大项目(2002AA105A)
作者单位:430070湖北武汉理工大学生物中心
(收稿日期:2002-10-25)
(编辑 一坤), 百拇医药(王红晖)