抑凋亡基因bcl-2表达在子宫内膜早期癌变中的意义
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中华医学研究杂志 2003年2月 第3卷 第2期
【摘要】 目的 探讨抑凋亡基因bcl-2与子宫内膜早期癌变的关系。方法 应用免疫组化SP法，原位检测65例子宫内膜不典型增生和30例子宫内膜癌中bcl-2基因的表达。结果 子宫内膜不典型增生bcl-2基因高表达，子宫内膜癌bcl-2基因低表达(P<0.05)，且在子宫内膜不典型增生中，随病理分级的增加，bcl-2因阳性表达强度升高。结论 抑凋亡基因bcl-2参与了细胞增殖与凋亡的调控，与细胞的异常增殖有关，且主要在子宫内膜恶变的早期起作用。
关键词 凋亡 基因表达 不典型增生 免疫组织化学
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)02-0116-02
The significance of bcl-2gene expression of
theinitial malignant transformation of endometrial tissues
, 百拇医药
Li Xiangzhou，Zhang Jumin，Liu Ping
Weifang People’s Hospital，Weifang，Shandong261041.
【Abstract】 Objective To investigate the relationship between bcl-2gene andthe initial malignant transforˉmation of endometrial tissues.Methods The bcl-2gene expression were examined in65cases with endometrial atypical hyperplasia and30cases with endometrial carcinoma using immunohistochemical method.Results Bcl-2gene expression was higher in endometrial atypical hyperplasia than that of endometrial carcinoma(P<0.05).The positive rate of bcl-2gene expression rise with progression of pathological stage in endometrial atypical hyperplasia.Conclusion Bcl-2gene may play an important role in cellular proliferation/apoptosis and the initial stage of maligˉnant transformation of endometrial tissues.
, 百拇医药
Key words apoptosis gene expression atypical hyperplasia immunohistochemical
近年来研究发现，细胞增殖(Cell proliferation)与凋亡(Apoptosis)平衡失调是导致恶性肿瘤发生的主要原因。bcl-2作为细胞凋亡的抑制基因 [1] ，其表达的异常会引起上述平衡的失调。我们应用免疫组织化学方法，在子宫内膜不典型增生和子宫内膜癌中进行bcl-2基因的原位标记，对其在早期癌变中的意义进行探讨。
1 材料与方法
1.1 一般资料 选择我院近3年刮宫及手术切除标本蜡块，子宫内膜不典型增生65例，其中轻度15例，中度21例，重度29例，平均年龄46.3岁(31～52岁);子宫内膜癌30例，平均年龄51.6岁(33～65岁)。全部标本均为10%的中性福尔马林固定，石蜡包埋。
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1.2 方法 采用免疫组化SP染色法:石蜡包埋组织4μm切片，常规脱蜡至水，滴加0.3%的H 2 O 2 甲醇液室温下10min，以封闭内源性过氧化物酶活性;PBS液充分冲洗后，于0.01mol/L的枸橼酸钠抗原修复液内(pH6.0)高压抗原热修复3min，自然冷却;滴加封闭用的正常山羊血清，封闭特殊性抗原抗体反应，将血清抛净不冲洗;依次滴加:一抗工作液4℃过夜;生物素标记的通用型二抗工作液室温孵育15min;标记辣根过氧化物酶内的三抗(SA-HRP)工作液室温孵育15min;DAB显色与光镜下控制时间。各步骤间均用PBS液充分冲洗。苏木素复染，中性树胶封片。
1.3 试剂 一抗鼠抗人bcl-2单克隆抗体及SP试剂盒均为美国Zymed公司产品，购自北京中山生物技术有限公司。
1.4 对照 用已知阳性切片作阳性对照，以PBS液代替一抗作阴性对照。
, 百拇医药
1.5 结果判断 bcl-2以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，每张切片随机计数十个高倍视野，按阳性细胞所占比例记录:无明显阳性细胞为(-)，阳性细胞数<25%为(+)，25%～50%为(++)，>50%为(+++)(细胞计数应用四川大学图像中心彩色病理图像分析软件)。
1.6 统计学处理 bcl-2基因表达病变组间比较采用X 2 检验。
2 结果
子宫内膜不典型增生和癌中抑凋亡基因bcl-2蛋白表达情况见表1。表1 bcl-2基因在子宫内膜不典型增生和癌中的表达在65例子宫内膜不典型增生中bcl-2基因蛋白33例呈中→强阳性表达，20例呈阳性，12例呈阴性表达，总阳性表达率为81.54%(53/65)。其中轻度子宫内膜不典型增生阳性率为40%(6/15)，中度为85.7%(18/21)，重度为100%(29/29)，表现为阳性率随病理分级的增加而上升。在30例子宫内膜癌中，bcl-2基因蛋白中→强阳性表达8例，阳性3例，阴性19例，总阳性率为36.67%(11/30)，明显低于子宫内膜不典型增生(X 2 =4.139，P<0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
性肿瘤的发生和发展是由多因素影响、多基因调控的复杂过程，其中参与细胞增殖与凋亡平衡调控的基因的突变及表达异常，是导致恶性肿瘤发生的主要原因。bcl-2是一种抑制细胞凋亡的基因，首先在B细胞相关的恶性淋巴瘤中发现。近年来在结肠癌、乳腺癌及胆囊腺癌等上皮性肿瘤中也检测到该基因的表达 [2] 。我们研究结果表明:bcl-2基因蛋白在子宫内膜不典型增生中的阳性表达随病理分级的增高而呈上升趋势。在重度不典型增生中，其阳性表达率和表达强度达到最高，提示细胞凋亡抑制的增强，导致了细胞凋亡的减少或不凋亡，使其出现了细胞的异常增殖。而在子宫内膜癌中，bcl-2的阳性表达率较不典型增生明显降低(P<0.05)，与庄小强等 [3] 在大肠肿瘤中的表达结果相近，仅有的少数(3例)强阳性表达病例，其组织形态学上均为高分化的腺癌，表明高分化的或早期的子宫内膜腺癌与重度不典型增生中的部分病例bcl-2基因表达状况相近。
对于bcl-2基因抑制细胞凋亡的机制，Korsmeyer SJ [4] 认为可能是通过防止受损的DNA翻译成参与细胞凋亡基因的信号或通过阻止这些基因产物的表达，从而显著阻止 或减少由各种刺激引起的细胞杀伤，在肿瘤的发生和发展中起重要作用。同时bcl-2基因受许多调控因子的调控，其中最主要的是凋亡基因bax [1] ，它可与bcl-2基因形成bcl-2-bax异源二聚体，使其丧失抑凋亡功能。
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本项研究中，子宫内膜不典型增生从轻度到重度表现为细胞增生的逐渐活跃，bcl-2基因的阳性表达率及强度也逐渐升高，二者呈正相关，而在腺癌中bcl-2的表达率及强度却明显下降，表明该基因自细胞异常增殖的早期即开始参与，到重度不典型增生及早期癌变中达到高峰，而随着细胞生物学行为的进一步恶化，bcl-2基因不再起重要作用。
参考文献
1 Levine B，Huang Q，Isaacs T，et al.Conversion of lytic to persistent alˉphavirus infection by the bcl-2cellular oncogene.Nature，1993，361:739-742.
2 姚宏，武群英，赵玛丽，等.bcl-2和P16蛋白在胆囊粘膜上皮异形增生和胆囊腺癌中的表达.中华病理学杂志，1999，2:134-135.
3 庄小强，袁世珍，王晓怀，等.大肠肿瘤中抑凋亡基因bcl-2和P53蛋白产物的表达和意义.临床与实验病理学杂志，1996，12:23-26.
4 Korsmeyer SJ.Bcl-2initiates a new category of oncogenes:regulators of calldeath.Blood，1992，80:879-886.
(收稿日期:2002-10-19)
作者单位:261041山东省潍坊市人民医院
(编辑于少伟), 百拇医药(李湘洲)
关键词 凋亡 基因表达 不典型增生 免疫组织化学
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)02-0116-02
The significance of bcl-2gene expression of
theinitial malignant transformation of endometrial tissues
, 百拇医药
Li Xiangzhou，Zhang Jumin，Liu Ping
Weifang People’s Hospital，Weifang，Shandong261041.
【Abstract】 Objective To investigate the relationship between bcl-2gene andthe initial malignant transforˉmation of endometrial tissues.Methods The bcl-2gene expression were examined in65cases with endometrial atypical hyperplasia and30cases with endometrial carcinoma using immunohistochemical method.Results Bcl-2gene expression was higher in endometrial atypical hyperplasia than that of endometrial carcinoma(P<0.05).The positive rate of bcl-2gene expression rise with progression of pathological stage in endometrial atypical hyperplasia.Conclusion Bcl-2gene may play an important role in cellular proliferation/apoptosis and the initial stage of maligˉnant transformation of endometrial tissues.
, 百拇医药
Key words apoptosis gene expression atypical hyperplasia immunohistochemical
近年来研究发现，细胞增殖(Cell proliferation)与凋亡(Apoptosis)平衡失调是导致恶性肿瘤发生的主要原因。bcl-2作为细胞凋亡的抑制基因 [1] ，其表达的异常会引起上述平衡的失调。我们应用免疫组织化学方法，在子宫内膜不典型增生和子宫内膜癌中进行bcl-2基因的原位标记，对其在早期癌变中的意义进行探讨。
1 材料与方法
1.1 一般资料 选择我院近3年刮宫及手术切除标本蜡块，子宫内膜不典型增生65例，其中轻度15例，中度21例，重度29例，平均年龄46.3岁(31～52岁);子宫内膜癌30例，平均年龄51.6岁(33～65岁)。全部标本均为10%的中性福尔马林固定，石蜡包埋。
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1.2 方法 采用免疫组化SP染色法:石蜡包埋组织4μm切片，常规脱蜡至水，滴加0.3%的H 2 O 2 甲醇液室温下10min，以封闭内源性过氧化物酶活性;PBS液充分冲洗后，于0.01mol/L的枸橼酸钠抗原修复液内(pH6.0)高压抗原热修复3min，自然冷却;滴加封闭用的正常山羊血清，封闭特殊性抗原抗体反应，将血清抛净不冲洗;依次滴加:一抗工作液4℃过夜;生物素标记的通用型二抗工作液室温孵育15min;标记辣根过氧化物酶内的三抗(SA-HRP)工作液室温孵育15min;DAB显色与光镜下控制时间。各步骤间均用PBS液充分冲洗。苏木素复染，中性树胶封片。
1.3 试剂 一抗鼠抗人bcl-2单克隆抗体及SP试剂盒均为美国Zymed公司产品，购自北京中山生物技术有限公司。
1.4 对照 用已知阳性切片作阳性对照，以PBS液代替一抗作阴性对照。
, 百拇医药
1.5 结果判断 bcl-2以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，每张切片随机计数十个高倍视野，按阳性细胞所占比例记录:无明显阳性细胞为(-)，阳性细胞数<25%为(+)，25%～50%为(++)，>50%为(+++)(细胞计数应用四川大学图像中心彩色病理图像分析软件)。
1.6 统计学处理 bcl-2基因表达病变组间比较采用X 2 检验。
2 结果
子宫内膜不典型增生和癌中抑凋亡基因bcl-2蛋白表达情况见表1。表1 bcl-2基因在子宫内膜不典型增生和癌中的表达在65例子宫内膜不典型增生中bcl-2基因蛋白33例呈中→强阳性表达，20例呈阳性，12例呈阴性表达，总阳性表达率为81.54%(53/65)。其中轻度子宫内膜不典型增生阳性率为40%(6/15)，中度为85.7%(18/21)，重度为100%(29/29)，表现为阳性率随病理分级的增加而上升。在30例子宫内膜癌中，bcl-2基因蛋白中→强阳性表达8例，阳性3例，阴性19例，总阳性率为36.67%(11/30)，明显低于子宫内膜不典型增生(X 2 =4.139，P<0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
性肿瘤的发生和发展是由多因素影响、多基因调控的复杂过程，其中参与细胞增殖与凋亡平衡调控的基因的突变及表达异常，是导致恶性肿瘤发生的主要原因。bcl-2是一种抑制细胞凋亡的基因，首先在B细胞相关的恶性淋巴瘤中发现。近年来在结肠癌、乳腺癌及胆囊腺癌等上皮性肿瘤中也检测到该基因的表达 [2] 。我们研究结果表明:bcl-2基因蛋白在子宫内膜不典型增生中的阳性表达随病理分级的增高而呈上升趋势。在重度不典型增生中，其阳性表达率和表达强度达到最高，提示细胞凋亡抑制的增强，导致了细胞凋亡的减少或不凋亡，使其出现了细胞的异常增殖。而在子宫内膜癌中，bcl-2的阳性表达率较不典型增生明显降低(P<0.05)，与庄小强等 [3] 在大肠肿瘤中的表达结果相近，仅有的少数(3例)强阳性表达病例，其组织形态学上均为高分化的腺癌，表明高分化的或早期的子宫内膜腺癌与重度不典型增生中的部分病例bcl-2基因表达状况相近。
对于bcl-2基因抑制细胞凋亡的机制，Korsmeyer SJ [4] 认为可能是通过防止受损的DNA翻译成参与细胞凋亡基因的信号或通过阻止这些基因产物的表达，从而显著阻止 或减少由各种刺激引起的细胞杀伤，在肿瘤的发生和发展中起重要作用。同时bcl-2基因受许多调控因子的调控，其中最主要的是凋亡基因bax [1] ，它可与bcl-2基因形成bcl-2-bax异源二聚体，使其丧失抑凋亡功能。
, http://www.100md.com
本项研究中，子宫内膜不典型增生从轻度到重度表现为细胞增生的逐渐活跃，bcl-2基因的阳性表达率及强度也逐渐升高，二者呈正相关，而在腺癌中bcl-2的表达率及强度却明显下降，表明该基因自细胞异常增殖的早期即开始参与，到重度不典型增生及早期癌变中达到高峰，而随着细胞生物学行为的进一步恶化，bcl-2基因不再起重要作用。
参考文献
1 Levine B，Huang Q，Isaacs T，et al.Conversion of lytic to persistent alˉphavirus infection by the bcl-2cellular oncogene.Nature，1993，361:739-742.
2 姚宏，武群英，赵玛丽，等.bcl-2和P16蛋白在胆囊粘膜上皮异形增生和胆囊腺癌中的表达.中华病理学杂志，1999，2:134-135.
3 庄小强，袁世珍，王晓怀，等.大肠肿瘤中抑凋亡基因bcl-2和P53蛋白产物的表达和意义.临床与实验病理学杂志，1996，12:23-26.
4 Korsmeyer SJ.Bcl-2initiates a new category of oncogenes:regulators of calldeath.Blood，1992，80:879-886.
(收稿日期:2002-10-19)
作者单位:261041山东省潍坊市人民医院
(编辑于少伟), 百拇医药(李湘洲)