血清低密度与高密度脂蛋白胆固醇含量测定方法比较
【摘要】 目的 对四种测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)方法分别进行比较，为载脂蛋白研究和临床检测中测定LDL-C和HDL-C提供参考。方法 用超速离心法、电泳法、化学沉淀法和均相法测定50例门诊及住院病人和92例健康人血清中LDL-C和HDL-C的含量。结果 电泳法、化学沉淀法和均相法与超速离心法进行统计学处理，P>0.05，四种测定方法差异无显著性，同时进行线性回归分析，为相关性显著。结论 超速离心法作为评价其他检测方法准确性的一种参比方法;电泳法多用于脂蛋白的研究;化学沉淀法中磷钨酸-Mg 2+ 法，国内推荐作为HDL-C常规测定方法;均相测定法是一种直接测定法，可用于自动化测定。
关键词 低密度脂蛋白胆固醇 高密度脂蛋白胆固醇 测定方法
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)07-0604-03
, 百拇医药 The comparison of methods for determination of
serum low density and high density lipoprotein cholesterols
Zhang Yanjun，Li Mingrun
Department of Biochemistry，Tianjin Medical University，Tianjin300070.
【Abstract】 Objective To compare the four methods of determinating serum low density and high density lipoprotein cholesterols.To provide reference for thestudying lipoproteins and determination of them in clinical laboraˉtory.Methods Determinating serum low density and high density lipoprotein cholesterols by ultracentrifugation，elecˉtrophoresis，chemical sedimentation method and homogeneous assay.Results Comparing the three methods with ultraˉcentrifugation，the results had no differences(P>0.05).The linear regressive analysis had significant correlation.Conclusion The four methods all can be used to determinate the serum low density and high density lipoprotein cholesterols，because they have different procedures，they have different purpose.Ultracentrifugation is a reference method for evaluation of the other methods，but electrophoresis in studying lipoprotein.One of the chemical sedimentaˉtion methods，PT-Mg 2+ is a routine method in clinical laboratory，but homogeneous assay-a direct method in automˉatization.
, 百拇医药
Key words low density lipoprotein cholesterol high density lipoprotein chole
sterol determinating method
众多流行病学与临床研究证实，动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)的发生率与血清总胆固醇升高有关 [1，2] ，其中与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平呈正相关，被称为“危险因子”，而与血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平呈负相关，被称为“防御因子” [1，2] ，因此分别测定LDL-C和HDL-C的含量在临床诊断与治疗中具有重要意义。本文对50例门诊以及住院冠心病人和92例健康人血清中LDL-C和HDL-C含量用四种方法进行了测定，并对结果进行了比较，为在脂蛋白研究和临床检测中测定LDL-C和HDL-C提供参考。
1 资料与方法
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1.1 对象 健康人92例，其中男52例，女40例，年龄30～53岁，平均(39.6±12.6)岁。门诊和住院冠心病人50例，其中男27例，女23例，年龄42～76岁，平均(59.7±16.2)岁。两组均空腹取血测定LDL-C和HDL-C的含量。
1.2 超速离心法测定LDL-C和HDL-C含量 配制NaCl-KBr密度液，吸取2ml新鲜血清加到5ml的离心管内，加入3ml的密度液，在Beckman L8-80M型超速离心机 50000r/min离心14h，吸出HDL-C和LDL-C，定容分别测定胆固醇含量。
1.3 电泳法测定LDL-C和HDL-C含量 取新鲜血清电泳，切割不同脂蛋白区带，分别测定其胆固醇含量。
1.4 化学分离法测定LDL-C和HDL-C含量
1.4.1 肝素-柠檬酸钠沉淀法测定LDL-C含量 称取柠檬酸钠18.8g，肝素4支(12500U)，定容至1L，pH值为5.04±0.05，配制成LDL-C沉淀剂，准确吸取100μl血清加至1ml LDL-C沉淀剂中，混匀并室温静置10min，3000r/min离心10min，取上清液200μl按酶法测定总胆固醇程序测定其胆固醇的含量。
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1.4.2 磷钨酸-Mg 2+ 法测定HDL-C含量 分别称取磷钨酸4.4g和氯化镁11.0g，定容至1L，pH值为6.1±0.1，配制成HDL-C沉淀剂，准确吸取100μl血清加至0.1ml HDL-C沉淀剂时，混匀并室温静置10min后，3000r/min离心15min，取上清液40μl按酶法测定总胆固醇程序测定其胆固醇的含量。
1.5 均相测定法
1.5.1 可溶性反应法测定LDL-C含量 采用罗氏公司生产的试剂盒。
1.5.2 PEG修饰酶法测定HDL-C含量 采用罗氏诊断试剂盒。
1.6 胆固醇含量测定 胆固醇含量测定使用本室研制的已通过成果鉴定并进行推广使用的酶法测定胆固醇试剂盒。
1.7 统计方法 计量资料数据以ˉx±s表示，计量资料两 组间比较用Student-t检验。
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2结果
2.1 血清LDL-C测定方法比较 分别使用超速离心法、电泳法、肝素-柠檬酸钠沉淀法和均相测定法测定50例冠心病人和92例健康人血清中LDL-C的含量，结果见表1。
表1 四种方法测定的血清LDL-C含量比较 (略)
根据表1，A相与B相进行t检验，结果为P>0.05，表明实验结果差异无显著性，即两种测定方法差异无显著性，健康组线性回归分析结果为相关系数r为0.9775，回归方程为Y=1.008X-3.976，表明两种方法相关性显著;A相与C相进行比较，结果为P>0.05，健康组相关系数r为0.9770，Y=1.028X-1.422，表明两种方法差异无显著性，同 时相关性显著;A相与D相进行比较，结果为P>0.05，健康组相关系数r为0.9717，Y=1.059X-0.057，表明两种方法差异无显著性，同时相关性显著。
, 百拇医药
2.2 血清HDL-C测定方法比较 分别使用超速离心法、电泳法、磷钨酸-Mg 2+ 法和均相法测定50例冠心病人和92例健康人血清中HDL-C的含量，结果见表2。
表2 四种方法测定的血清HDL-C含量比较 (略)
根据表2，A相与B相进行t检验，结果为P>0.05，表明实验结果差异无显著性，即两种测定方法差异无显著性，健康组线性回归分析结果为相关系数r为0.9845，回归方程为Y=1.006X-0.976，表明两种方法相关性显著;A相与C相进行比较，结果为P>0.05，健康组相关系数r为0.9768，Y=1.012X-2.432，表明两种方法差异无显著性同时相关性显著;A相与D相进行比较，结果为P>0.05，健康组相关系数r为0.9726，Y=1.069X-0.245，表明两种方法差异无显著性，同时相关性显著。
3 讨论
, 百拇医药
随着生活质量不断提高，心脑血管疾病已成为危害人类身体健康的第一大类疾病，受到极大程度的重视。血清总胆固醇升高是动脉粥样硬化的主要危险因素之一，总胆固醇包括极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)三种，在正常情况下，LDL-C被肝细胞或肝外组织细胞在受体的介导下内吞入胞内而降解掉，但是当LDL-C的含量升高时，LDL-C在动脉壁堆积，引起动脉粥样硬化，因此LDL-C与动脉硬化引起的心脑血管疾病呈正相关，被称为“危险因子”;HDL的功能是将肝外组织的胆固醇逆向转运至肝脏进行代谢，因此HDL-C的含量升高，可以从动脉壁清除多余胆固醇，与动脉硬化引起的心脑血管疾病呈负相关，被称为“防御因子”，因此鉴于HDL-C和LDL-C升高所起的作用不同，分别测定LDL-C和HDL-C的含量在临床诊断与治疗中就具有重要意义。
测定血清LDL-C和HDL-C通常需根据它们的密度、颗粒大小，电荷等性质，应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学或免疫沉淀法将LDL或HDL与其他脂蛋白分离开，然后测定LDL或HDL组分中胆固醇含量。本研究分别采用超速离心法、电泳法、化学沉淀法和均相法测定了142例血清中LDL-C和HDL-C的含量，同时以超速离心法为参比方法，对其它三种方法分别进行了相关性考察。
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从表1LDL-C测定方法考察中可以看出，其超速离心法分别与电泳法、化学沉淀法和均相法比较结果为P>0.05，四种测定方法差异无显著性，健康组线性回归分析表明四种方法相关性显著;但是由于这四种方法所要求的仪器和操作上的不同，它们的用途不同的。超速离心法测定LDL-C需昂贵的设备、操作复杂、费时且技术要求高，不易在普通实验室开展，因此作为评价其他检测方法准确性的一种参比方法;电泳法因仪器、操作要求高等种种原因临床常规实验室也较少应用，多用于脂蛋白的研究;化学沉淀法如本研究所采用的肝素-枸橼酸钠法不需要特殊仪器和试剂，操作比较简单，与超速离心法比较差异无显著性，可以作为一种临床常规实验室采用的方法，但是本方法需一步沉淀离心的步骤，不易于自动化，因此不适用于大规模检测使用 [3] ;均相测定法 [4] 因其具有简便、快速，精密度高，易于自动化的特点，近年来为广大临床实验室所接受，是目前最为理想的方法，但是目前市场上多为进口试剂盒，价格偏贵，有待于开发国内产品。
从表2HDL-C测定方法考察中可以看出，其超速离心法分别与电泳法、化学沉淀法和均相法比较结果为P>0.05，四种测定方法差异无显著性，健康组线性回归分析表明四种方法相关性显著。同LDL-C测定方法一样，超速离心法作为评价其他检测方法准确性的一种参比方法;电泳法也多用于脂蛋白的研究;化学沉淀法，如本研究所采用的磷钨酸-Mg 2+ 法在1995年被中华医学会检验分会推荐作为HDL-C测定常规方法 [5] ;均相测定法 [6] 也已为广大临床实验室所接受，同样也有待于开发国内产品。
, 百拇医药
参考文献
1 李贤英，张蜀平.中老年人血脂水平与心脑血管病的调查研究.解放军保健医学杂志，2002，48(2):235-253.
2 陈礼平，曾春来.低密度和高密度脂蛋白胆固醇比值对冠心病 的诊断价值.心脑血管病防治，2002，2(3):11-12.
3 李明润，张艳君.血清低密度脂蛋白胆固醇测定及其临床意义.临床检验杂志，1992，10(2):76-77.
4 Matthias Nauck G，Russell Warnick，Nater Rifai.Methods for measureˉment of LDL-cholesterol:a critical assessment of direct measurement by homogeneous assays versus calculation.Clinical chemistry，2002，48(2):236-253.
5 中华医学会检验学会血脂测定推荐方法.中华医学检验杂志，1995，18.
6 陈涛，丁进芳.高密度脂蛋白胆固醇PEG-修饰酶直接测定法与DS-镁法比较.中国检验医学与临床，2002，3(3):121-122.
作者单位:1 300070天津医科大学生化教研室
2 天津医药科学研究所医用生化室
(收稿日期:2003-03-13)
(编辑 小川), http://www.100md.com
关键词 低密度脂蛋白胆固醇 高密度脂蛋白胆固醇 测定方法
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2003)07-0604-03
, 百拇医药 The comparison of methods for determination of
serum low density and high density lipoprotein cholesterols
Zhang Yanjun，Li Mingrun
Department of Biochemistry，Tianjin Medical University，Tianjin300070.
【Abstract】 Objective To compare the four methods of determinating serum low density and high density lipoprotein cholesterols.To provide reference for thestudying lipoproteins and determination of them in clinical laboraˉtory.Methods Determinating serum low density and high density lipoprotein cholesterols by ultracentrifugation，elecˉtrophoresis，chemical sedimentation method and homogeneous assay.Results Comparing the three methods with ultraˉcentrifugation，the results had no differences(P>0.05).The linear regressive analysis had significant correlation.Conclusion The four methods all can be used to determinate the serum low density and high density lipoprotein cholesterols，because they have different procedures，they have different purpose.Ultracentrifugation is a reference method for evaluation of the other methods，but electrophoresis in studying lipoprotein.One of the chemical sedimentaˉtion methods，PT-Mg 2+ is a routine method in clinical laboratory，but homogeneous assay-a direct method in automˉatization.
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Key words low density lipoprotein cholesterol high density lipoprotein chole
sterol determinating method
众多流行病学与临床研究证实，动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)的发生率与血清总胆固醇升高有关 [1，2] ，其中与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平呈正相关，被称为“危险因子”，而与血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平呈负相关，被称为“防御因子” [1，2] ，因此分别测定LDL-C和HDL-C的含量在临床诊断与治疗中具有重要意义。本文对50例门诊以及住院冠心病人和92例健康人血清中LDL-C和HDL-C含量用四种方法进行了测定，并对结果进行了比较，为在脂蛋白研究和临床检测中测定LDL-C和HDL-C提供参考。
1 资料与方法
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1.1 对象 健康人92例，其中男52例，女40例，年龄30～53岁，平均(39.6±12.6)岁。门诊和住院冠心病人50例，其中男27例，女23例，年龄42～76岁，平均(59.7±16.2)岁。两组均空腹取血测定LDL-C和HDL-C的含量。
1.2 超速离心法测定LDL-C和HDL-C含量 配制NaCl-KBr密度液，吸取2ml新鲜血清加到5ml的离心管内，加入3ml的密度液，在Beckman L8-80M型超速离心机 50000r/min离心14h，吸出HDL-C和LDL-C，定容分别测定胆固醇含量。
1.3 电泳法测定LDL-C和HDL-C含量 取新鲜血清电泳，切割不同脂蛋白区带，分别测定其胆固醇含量。
1.4 化学分离法测定LDL-C和HDL-C含量
1.4.1 肝素-柠檬酸钠沉淀法测定LDL-C含量 称取柠檬酸钠18.8g，肝素4支(12500U)，定容至1L，pH值为5.04±0.05，配制成LDL-C沉淀剂，准确吸取100μl血清加至1ml LDL-C沉淀剂中，混匀并室温静置10min，3000r/min离心10min，取上清液200μl按酶法测定总胆固醇程序测定其胆固醇的含量。
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1.4.2 磷钨酸-Mg 2+ 法测定HDL-C含量 分别称取磷钨酸4.4g和氯化镁11.0g，定容至1L，pH值为6.1±0.1，配制成HDL-C沉淀剂，准确吸取100μl血清加至0.1ml HDL-C沉淀剂时，混匀并室温静置10min后，3000r/min离心15min，取上清液40μl按酶法测定总胆固醇程序测定其胆固醇的含量。
1.5 均相测定法
1.5.1 可溶性反应法测定LDL-C含量 采用罗氏公司生产的试剂盒。
1.5.2 PEG修饰酶法测定HDL-C含量 采用罗氏诊断试剂盒。
1.6 胆固醇含量测定 胆固醇含量测定使用本室研制的已通过成果鉴定并进行推广使用的酶法测定胆固醇试剂盒。
1.7 统计方法 计量资料数据以ˉx±s表示，计量资料两 组间比较用Student-t检验。
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2结果
2.1 血清LDL-C测定方法比较 分别使用超速离心法、电泳法、肝素-柠檬酸钠沉淀法和均相测定法测定50例冠心病人和92例健康人血清中LDL-C的含量，结果见表1。
表1 四种方法测定的血清LDL-C含量比较 (略)
根据表1，A相与B相进行t检验，结果为P>0.05，表明实验结果差异无显著性，即两种测定方法差异无显著性，健康组线性回归分析结果为相关系数r为0.9775，回归方程为Y=1.008X-3.976，表明两种方法相关性显著;A相与C相进行比较，结果为P>0.05，健康组相关系数r为0.9770，Y=1.028X-1.422，表明两种方法差异无显著性，同 时相关性显著;A相与D相进行比较，结果为P>0.05，健康组相关系数r为0.9717，Y=1.059X-0.057，表明两种方法差异无显著性，同时相关性显著。
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2.2 血清HDL-C测定方法比较 分别使用超速离心法、电泳法、磷钨酸-Mg 2+ 法和均相法测定50例冠心病人和92例健康人血清中HDL-C的含量，结果见表2。
表2 四种方法测定的血清HDL-C含量比较 (略)
根据表2，A相与B相进行t检验，结果为P>0.05，表明实验结果差异无显著性，即两种测定方法差异无显著性，健康组线性回归分析结果为相关系数r为0.9845，回归方程为Y=1.006X-0.976，表明两种方法相关性显著;A相与C相进行比较，结果为P>0.05，健康组相关系数r为0.9768，Y=1.012X-2.432，表明两种方法差异无显著性同时相关性显著;A相与D相进行比较，结果为P>0.05，健康组相关系数r为0.9726，Y=1.069X-0.245，表明两种方法差异无显著性，同时相关性显著。
3 讨论
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随着生活质量不断提高，心脑血管疾病已成为危害人类身体健康的第一大类疾病，受到极大程度的重视。血清总胆固醇升高是动脉粥样硬化的主要危险因素之一，总胆固醇包括极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)三种，在正常情况下，LDL-C被肝细胞或肝外组织细胞在受体的介导下内吞入胞内而降解掉，但是当LDL-C的含量升高时，LDL-C在动脉壁堆积，引起动脉粥样硬化，因此LDL-C与动脉硬化引起的心脑血管疾病呈正相关，被称为“危险因子”;HDL的功能是将肝外组织的胆固醇逆向转运至肝脏进行代谢，因此HDL-C的含量升高，可以从动脉壁清除多余胆固醇，与动脉硬化引起的心脑血管疾病呈负相关，被称为“防御因子”，因此鉴于HDL-C和LDL-C升高所起的作用不同，分别测定LDL-C和HDL-C的含量在临床诊断与治疗中就具有重要意义。
测定血清LDL-C和HDL-C通常需根据它们的密度、颗粒大小，电荷等性质，应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学或免疫沉淀法将LDL或HDL与其他脂蛋白分离开，然后测定LDL或HDL组分中胆固醇含量。本研究分别采用超速离心法、电泳法、化学沉淀法和均相法测定了142例血清中LDL-C和HDL-C的含量，同时以超速离心法为参比方法，对其它三种方法分别进行了相关性考察。
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从表1LDL-C测定方法考察中可以看出，其超速离心法分别与电泳法、化学沉淀法和均相法比较结果为P>0.05，四种测定方法差异无显著性，健康组线性回归分析表明四种方法相关性显著;但是由于这四种方法所要求的仪器和操作上的不同，它们的用途不同的。超速离心法测定LDL-C需昂贵的设备、操作复杂、费时且技术要求高，不易在普通实验室开展，因此作为评价其他检测方法准确性的一种参比方法;电泳法因仪器、操作要求高等种种原因临床常规实验室也较少应用，多用于脂蛋白的研究;化学沉淀法如本研究所采用的肝素-枸橼酸钠法不需要特殊仪器和试剂，操作比较简单，与超速离心法比较差异无显著性，可以作为一种临床常规实验室采用的方法，但是本方法需一步沉淀离心的步骤，不易于自动化，因此不适用于大规模检测使用 [3] ;均相测定法 [4] 因其具有简便、快速，精密度高，易于自动化的特点，近年来为广大临床实验室所接受，是目前最为理想的方法，但是目前市场上多为进口试剂盒，价格偏贵，有待于开发国内产品。
从表2HDL-C测定方法考察中可以看出，其超速离心法分别与电泳法、化学沉淀法和均相法比较结果为P>0.05，四种测定方法差异无显著性，健康组线性回归分析表明四种方法相关性显著。同LDL-C测定方法一样，超速离心法作为评价其他检测方法准确性的一种参比方法;电泳法也多用于脂蛋白的研究;化学沉淀法，如本研究所采用的磷钨酸-Mg 2+ 法在1995年被中华医学会检验分会推荐作为HDL-C测定常规方法 [5] ;均相测定法 [6] 也已为广大临床实验室所接受，同样也有待于开发国内产品。
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参考文献
1 李贤英，张蜀平.中老年人血脂水平与心脑血管病的调查研究.解放军保健医学杂志，2002，48(2):235-253.
2 陈礼平，曾春来.低密度和高密度脂蛋白胆固醇比值对冠心病 的诊断价值.心脑血管病防治，2002，2(3):11-12.
3 李明润，张艳君.血清低密度脂蛋白胆固醇测定及其临床意义.临床检验杂志，1992，10(2):76-77.
4 Matthias Nauck G，Russell Warnick，Nater Rifai.Methods for measureˉment of LDL-cholesterol:a critical assessment of direct measurement by homogeneous assays versus calculation.Clinical chemistry，2002，48(2):236-253.
5 中华医学会检验学会血脂测定推荐方法.中华医学检验杂志，1995，18.
6 陈涛，丁进芳.高密度脂蛋白胆固醇PEG-修饰酶直接测定法与DS-镁法比较.中国检验医学与临床，2002，3(3):121-122.
作者单位:1 300070天津医科大学生化教研室
2 天津医药科学研究所医用生化室
(收稿日期:2003-03-13)
(编辑 小川), http://www.100md.com