鲎试剂用于生附注射液细菌内毒素检测的研究
【摘要】 目的 考察生附注射液细菌内毒素检查法的可行性。方法 按《中国药典》2000年版细菌内毒素检查法和细菌内毒素法应用指导原则要求进行试验。结果 将样品稀释成2倍后无干扰。结论 将样品稀释2倍，可用灵敏度0.5EU/ml的鲎试剂作细菌内毒素检查。
关键词 生附注射液 细菌内毒素检查法 干扰试验
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-077X(2003)06-0533-02
生附注射液在临床主要用于治疗各型休克及心力衰竭、冠心病心绞痛、心肌梗死等心血管疾病，也可用于脑血管意外及再生障碍性贫血。其热原检查采用家兔法 [1] ，方法为取样品溶液，剂量按家兔体重注射3kg/ml。本文参考《中国药典》2000年版细菌内毒素检查法 [2] 和细菌内毒素检查法应用指导原则 [3] ，对生附注射液细菌内毒素检查进行了方法学研究，结果报告如下。
, 百拇医药
1 材料鲎试剂(TAL):批号:000812、010221;细菌内毒素Ⅰ作标 准:(CSE)批号:0008012;细菌内毒素检查用水(BET水):批号:010816;以上均为湛江安度斯生物有限公司出品;生附注射液:本院制剂，批号:000818、001006、001201。XW-80A型漩涡混合器;BHW-Ⅳ型电热恒温水浴锅等;玻璃试管、吸管等均经250℃干烤1h以上。
2 方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核 按《中国药典》2000年版二部细菌内毒素检查法 [2] 操作，结果见表1。
表1 鲎试剂灵敏度复核结果
根据公式:灵敏度测定值λc=1g -1 (∑x/4)，计算出λc:0.420;0.420;0.5∈(0.5λ～2.0λ)，符合灵敏度要求。
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2.2 细菌内毒素限量值(L)的确定 [3] 根据公式L=K/M，式中L为细菌内毒素限值;K为细菌内毒素致热阈剂量，大容量注射液一般定为10mg/(kg·h);M为人用每公斤体重每小时最大给药量。根据生附注射液每次最大用量为100ml，按普通中国人60kg体重计算M=1.7ml/(kg·h);L=10/1.7=6EU/ml;MVD=L/λ=12。
2.3 干扰试验的预试验 干扰预试验:在做干扰试验前，要先做干扰预试验。将三批经热原检查合格的样品原液，分别稀释2、4、6、8、10倍后，制成细菌内毒素为2λ浓度的供试品液，用λ=0.5EU/ml的TAL进行试验，同时作阳性对照、阴性对照。结果稀释2倍的供试品液均呈阳性反应，认为此稀释倍数是最高抑制浓度。
2.4 干扰试验 将生附注射液2倍稀释液与内毒素工作标准混合，进行干扰试验，结果见表2。
表2 生附注射液干扰试验结果样品
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2.5 样品的细菌内毒素检查 将三批检查合格的供试品稀释2倍，按《中国药典》2000年版二部的细菌内毒素检查法，依法检查，结果供试品和阴性对照管均呈阴性，供试品 阳性管和阳性对照管均呈阳性，试验结果成立。3个批号供试品的细菌内毒素检查均符合规定，与家兔法结果一致。
3 讨论
3.1 试验结果的判定 当鲎试剂的Es在0.5～2.0λ，且Et均在0.5～2.0Es范围内时，则认为供试品在该浓度下不干扰，从表1结果看:三个批号供试品都满足以上条件，因此认为供试品2倍稀释液无干扰。
3.2 鲎试剂最合适的pH范围为6.4～8.0，pH过大或过小都会影响鲎试剂的灵敏度和细菌内毒素的活性，而导致试验失败 [4] ，本试验所用的生附注射液的pH值为6.5，对实验结果无影响。
3.3 鲎试剂灵敏度实测值因生产厂家不同而可能产生差异，从而导致两种完全不同的检验结果，实验时应注意鲎试 剂的选择。
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参考文献
1 卫生部药典委员会编.药品标准第6册.生化药品，第1分册，1998，3.
2 中国药典.第2部.2000，附录:86.
3 中国药典.第2部.2000，附录:204.
4 褚衍立，张淑英，张淑梅.议鲎试验法中不容忽视的几个问题.中国医院药学杂志，2000，20(1):62.
(收稿日期:2003-01-14)
作者单位:530021广西医科大学第一附属医院药剂科
(编辑晓 亮), http://www.100md.com(张靖贤)
关键词 生附注射液 细菌内毒素检查法 干扰试验
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-077X(2003)06-0533-02
生附注射液在临床主要用于治疗各型休克及心力衰竭、冠心病心绞痛、心肌梗死等心血管疾病，也可用于脑血管意外及再生障碍性贫血。其热原检查采用家兔法 [1] ，方法为取样品溶液，剂量按家兔体重注射3kg/ml。本文参考《中国药典》2000年版细菌内毒素检查法 [2] 和细菌内毒素检查法应用指导原则 [3] ，对生附注射液细菌内毒素检查进行了方法学研究，结果报告如下。
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1 材料鲎试剂(TAL):批号:000812、010221;细菌内毒素Ⅰ作标 准:(CSE)批号:0008012;细菌内毒素检查用水(BET水):批号:010816;以上均为湛江安度斯生物有限公司出品;生附注射液:本院制剂，批号:000818、001006、001201。XW-80A型漩涡混合器;BHW-Ⅳ型电热恒温水浴锅等;玻璃试管、吸管等均经250℃干烤1h以上。
2 方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核 按《中国药典》2000年版二部细菌内毒素检查法 [2] 操作，结果见表1。
表1 鲎试剂灵敏度复核结果
根据公式:灵敏度测定值λc=1g -1 (∑x/4)，计算出λc:0.420;0.420;0.5∈(0.5λ～2.0λ)，符合灵敏度要求。
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2.2 细菌内毒素限量值(L)的确定 [3] 根据公式L=K/M，式中L为细菌内毒素限值;K为细菌内毒素致热阈剂量，大容量注射液一般定为10mg/(kg·h);M为人用每公斤体重每小时最大给药量。根据生附注射液每次最大用量为100ml，按普通中国人60kg体重计算M=1.7ml/(kg·h);L=10/1.7=6EU/ml;MVD=L/λ=12。
2.3 干扰试验的预试验 干扰预试验:在做干扰试验前，要先做干扰预试验。将三批经热原检查合格的样品原液，分别稀释2、4、6、8、10倍后，制成细菌内毒素为2λ浓度的供试品液，用λ=0.5EU/ml的TAL进行试验，同时作阳性对照、阴性对照。结果稀释2倍的供试品液均呈阳性反应，认为此稀释倍数是最高抑制浓度。
2.4 干扰试验 将生附注射液2倍稀释液与内毒素工作标准混合，进行干扰试验，结果见表2。
表2 生附注射液干扰试验结果样品
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2.5 样品的细菌内毒素检查 将三批检查合格的供试品稀释2倍，按《中国药典》2000年版二部的细菌内毒素检查法，依法检查，结果供试品和阴性对照管均呈阴性，供试品 阳性管和阳性对照管均呈阳性，试验结果成立。3个批号供试品的细菌内毒素检查均符合规定，与家兔法结果一致。
3 讨论
3.1 试验结果的判定 当鲎试剂的Es在0.5～2.0λ，且Et均在0.5～2.0Es范围内时，则认为供试品在该浓度下不干扰，从表1结果看:三个批号供试品都满足以上条件，因此认为供试品2倍稀释液无干扰。
3.2 鲎试剂最合适的pH范围为6.4～8.0，pH过大或过小都会影响鲎试剂的灵敏度和细菌内毒素的活性，而导致试验失败 [4] ，本试验所用的生附注射液的pH值为6.5，对实验结果无影响。
3.3 鲎试剂灵敏度实测值因生产厂家不同而可能产生差异，从而导致两种完全不同的检验结果，实验时应注意鲎试 剂的选择。
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参考文献
1 卫生部药典委员会编.药品标准第6册.生化药品，第1分册，1998，3.
2 中国药典.第2部.2000，附录:86.
3 中国药典.第2部.2000，附录:204.
4 褚衍立，张淑英，张淑梅.议鲎试验法中不容忽视的几个问题.中国医院药学杂志，2000，20(1):62.
(收稿日期:2003-01-14)
作者单位:530021广西医科大学第一附属医院药剂科
(编辑晓 亮), http://www.100md.com(张靖贤)