蚯蚓活性成分与应用研究进展
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2004)02-0130-04
蚯蚓(earthworm或lumbricus)俗称地龙，又名曲蟮、肾蚕、虫蟮等，为环节动物门(Aneelida)寡毛纲(Oligochaeta)动物，其种类繁多，资源丰富，在我国入药已有四千多年历史，《本草纲目》称其“治大腹黄疸”，“治中风疾病”，“化为水，疗伤寒”等等。我国蚯蚓约有3000余种，供药用者仅有秉氏环毛蚓(Pheretima carnosa)、赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)、背暗异唇蚓(Allolobophora caliginosa)、直隶环毛蚓(Pheretima tschiliensis)和参环毛蚓(Pheretima aspergillium)5种 [1] ，中药“广地龙”就是主产于广东、广西等地的参环毛蚓全体经剖腹洗净、晒干或焙干后的制品，“土地龙”则是主产于河南、山东、江苏、福建、安徽等地的背暗异唇蚓的全体制品。
, 百拇医药 国内外学者对蚯蚓的有效成分和药理作用研究表明 [2] ，蚯蚓体内含有丰富的蛋白质、氨基酸和酶类，其中一种酶在pH8.0～8.2时能使蚯蚓溶解;此外，还含有蚯蚓解热碱(Lumbrofebrine)、蚯蚓素(Lumbritin)、蚯蚓毒素(Terrestro-lumbrolysin)、脂类、嘌呤、胆碱(choline)、磷脂、胍(Guaniˉdine)、亚油酸、多种维生素及微量元素，具有活血化瘀、溶栓降压、清热定惊、消炎止痛、平喘止咳、通经利尿等功效，中医临床可用于治疗支气管炎及支气管哮喘、中风半身不遂、高血压、伤寒、流行性腮腺炎、下肢溃疡、骨折及带状疱疹等疾患。自20世纪80年代初日本学者美原恒(Mihara H)教授从蚯蚓中提取得到具有极高活性的纤溶酶以来，国内外对蚯蚓的研究空前活跃，有关纤溶酶的研究更是成为热点，取得了较大的进展。本文就其有效成分及其药理活性的研究进展作一综述。
1 蚯蚓活性成分
1.1 蚯蚓纤溶酶(earthworm fibrinolytic enzymes，EFE，又称蚓激酶) 大量实验证明，蚯蚓提取物具有强烈的直接溶解血栓和人纤维蛋白的活性，且提取、分离、纯化活性组分的难易程度随蚯蚓品种的不同会有很大不同。
, 百拇医药
Mihara H等 [3] 从粉正蚓(Lumbricus rubellus)中分离得到六种具有纤溶活性的组分，这些组分对热较稳定，含有丰富的天冬酰胺和天冬氨酸，很少的脯氨酸和赖氨酸。Sumi H等 [4] 从粉正蚓(Lumbricus rubellus)的自溶液中分离出三个对纤维蛋白或血栓具有强溶解活性的组分，其分子量分别为40kD、21kD和15kD。
程牛亮等 [5，6] 用0.01mol/L、pH7.8的磷酸盐缓冲液抽提，硫酸胺盐析及Sephadex G-75等3种柱层析方法从双胸蚓(Lumbricidae Bimostos)组织匀浆中分离得到分子量为29kD和36kD的两种纤溶组分，具有强烈的溶解纤维蛋白的作用，对家兔实验性血凝块也有明显的溶解作用。
Hrzenjak T等 [7] 从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)提取物中分离得到分子量为34kD(PⅠ)和23kD(PⅡ)的二种丝氨酸 肽酶，PⅠ活性高于PⅡ，前者浓度为10 5 ng/ml时能使纤凝块溶解时间缩短54%，浓度为10 3 ng/ml时则完全抑制静脉血的凝固。熊焱等[8] 以新鲜赤子爱胜蚓为原料，经保温抽提、乙醇沉淀、多种层析、电泳等分离纯化步骤得到一种纯度达95%，分子量为33kD的单肽链纤溶酶，该酶具有很强的溶解纤维蛋白的作用及蛋白酶活性，平板法测得其比活性为900U/mg蛋白，TAME法测得其2500U/mg蛋白。
, http://www.100md.com
何执中等 [9] 用提取、沉淀、凝胶层析和离子交换等方法从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)中得到了单组分酶，活力收率为粗酶粉的19.1%，具有极强的纤溶活性，其分子量为30kD，比活力达6667U/mg蛋白，在pH4～11及25℃～55℃内稳定。赵晓瑜等 [10] 从太平二号蚓(Eisenia foetida)匀浆也进一步提取获得了一组糖蛋白纤溶酶，含糖量为5%左右，分子量为16～33kD，富含Asp，而Met、Trp和Lys含量很少;1mg蚯蚓纤溶酶相当于250～300尿激酶单位。
胡文军等 [11] 采用加提取剂的匀浆盐析及超滤等方法从参环毛蚓(Pheretima aspergillum)中获得了一种分子量为22kD、活性和纯度均较高的单链蛋白纤溶酶。
吴容等 [12] 通过选择热变性、大豆胰蛋白酶抑制剂-Sepharose4B亲和层析技术从蚯蚓中分离纯化得到具有强烈纤溶活性的酶组分，经PAGE检定为单一谱带，分子量为32kD，属丝氨酸蛋白酶。
, http://www.100md.com
彭先凤等 [13] 用硫酸胺盐析、沉淀和PAGE制备电泳从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)纤溶酶粗品中分离纯化得到5种组分(Ⅰ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ)，在PAGE中均呈单一带。其中，组分Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ能将纤维蛋白原中α、β、γ链依次降解，对α链亲和力最大。组分Ⅹ不能降解34.5kD、40kD、24.5kD片段，组分Ⅰ对α链有较高亲和力而对γ链无降解作用。
毛孙忠等 [14] 以正蚓科双胸属蚯蚓(Lumbricus Bimastus)经组织匀浆、缓冲液抽提与选择性热变性，再经抑制剂1，6-己二胺(HD)偶联的Sepharose4B亲和层析及DEAE-Sepharose离子交换层析法分离得到具有强烈纤溶活性的酶组分(EFE-F 1，2 ，EFE-F 3 )，其中EFE-F 3 对合成底物S-2288(HD-Ile-Pro-Arg-PNA)和chromozym P(cb2-Gly-Pro-Arg-PNA)的K m 分别为0.01mmol/L和0.02mmol/L，HD的K i 为1mmol/L;该酶热稳定性强，能抗4mol/L脲。
, http://www.100md.com
徐建民 [15] 、姜东胜 [16] 等，用慈菇蛋白酶抑制剂-Sepharose4B亲和层析法，从蚯蚓丙酮粉组提取物中直接分离出9种具有较高活性和纯度的纤溶酶。林少琴等[17] 用牛血纤溶酶原-Sepharose4B亲和层析法，从太平Ⅱ蚓(Eisenia foetida)丙酮粉粗提物中分离纯化获得一种纤溶酶。该酶为糖蛋白，含糖量约为1.43%，分子量为30kD，具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的间接溶解纤维蛋白的双重作用，并对人血凝块有明显溶解作用。1%PMSF对酶有显著抑制作用，说明该酶为典型的丝氨酸蛋白酶类酶。
辽宁省微生物研究所和中国预防医学科学院病毒研究所从正蚓科双胸属蚯蚓(Lumbricus Bimastus)中提取获得具有纤溶活性的纯品蛋白P(30) [18] ，氨基酸序列测定末端24个氨基酸为VIGGTNASPGEFPWQLSQQRQSGS，正在进行深入的研究。
, 百拇医药
为探讨纤溶酶的适应性和扩大使用范围，国外学者还对纤溶酶的结构进行了部分修饰。Nakajima N等 [19] 利用人血白蛋白片段，对从蚯蚓Lumbricus rubellus中提取的6种蛋白酶中纤溶酶活性最强的一种进行了化学修饰。修饰后的酶失去了母酶的抗原性，并与人血清白蛋白片段结合形成沉淀，这种结合可以显著提高酶对大鼠血浆中蛋白酶抑制剂灭活作用的抵抗能力，且该酶不会诱导血小板凝集，能迅速溶解血栓素引起的全血血栓块。Ryu GH等 [20，21] 则将纤溶活性最强的蚓激酶固定于抗肿瘤药多尿烷(polyurethane)表面并研究其酶活性和抗栓活性，结果表明，与可溶性的蚓激酶活性相比，固定后的酶保留了34%的活性，且不受热灭活、降解和各种酶酸环境的影响而保持稳定，其最适合pH值上升了一个单位。
以上文献资料表明，蚯蚓体内的纤溶酶组分十分复杂，酶学性质也比较复杂。它不仅具有直接水解纤维蛋白的纤溶酶活性，还具有激活纤溶酶原的类尿激酶活性 [22] ;不仅能溶解血栓、抑制血栓形成，而且还具有抗凝作用 [23] 。但它在pH4～10的范围内都很稳定，是一类热稳定性非常好的蛋白水解酶，50℃以下可以长久保持活性 [10] ;虽在人工胃液中极不稳定，在37℃保温1h，酶活性几乎全部丧失，但在人工胃液中加入一定离子强度的缓冲液后保温同样时间，酶活性几乎没有损伤。其干燥物在室温下密封保存5年未见失活 [24] 。
, 百拇医药
1.2 纤溶酶原激活剂 杨嘉树等 [24～27] 从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)体内分离出一种可体外激活纤溶酶原而间接降解纤维蛋白的蚓激酶(e-PA)，纯化过程包括:粗品的盐析、离子交换层析、凝胶过滤层析及疏水相互层析。该酶分子量为45kD，由2个亚基通过疏水相互作用维系在一起，SDS电泳显示大、小亚基的分子量分别是26kD和18kD，而质谱测得大、小亚基的分子量分别是24556.7和15546.6。对大、小亚基进行氨基酸组成分析，结果显示大亚基不含Lys，而小亚基不含Cys，单独的大亚基只有较弱的纤溶活性，单独的小亚基没有任何可见的纤溶活性，很可能小亚基是一个调节亚基，大亚基是催化亚基。氨基酸序列测定大亚基N端25个氨基酸为VIGGTNASPGEIPWQLSQQRQSGSW(即Val-Ile-Gly-Gly-Thr-Asn-Ala-Ser-Pro-Gly-Glu-Ile-Pro-Trp-Glu-Leu-Ser-Gln-Gln-Arg-Gln-Ser-Gly-Ser-Trp…)。e-PA可以切割碱性氨基酸、小的中性氨基酸及Met的羧基端，同时e-PA确能将纤溶酶原切割为纤溶酶。这一结论提示e-PA可能会发展成为新型溶栓药物。e-PA还具有降解苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)和N-乙酰-L-酪氨酸乙酯(ATEE)的作用。
, http://www.100md.com
1.3 钙调素(CaM)和钙调素结合蛋白(CaM-binding Proˉtein，CaMBP) 张燕红等 [28] 以赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)为材料，通过DEAE-Fast Flow离子交换层析、CaM-Sepharose亲和层析分离纯化得到CaMBP。该蛋白对CaM激活的环核苷酸磷酸二酯酶活性有抑制作用，且这种抑制作用可通过加入过量的CaM达到完全恢复。SDS-PAGE显示有3 条明显主带，在EGTA存在时表现的分子量分别为62kD、49kD和30kD，用生物素-CaM覆盖法也检测到3种结合蛋白，两者结果一致。酶活性测定表明该蛋白有Ca 2+ -ATP酶活性，但无NAD激酶活性。王采芹等 [29] 从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)中还分离纯化了CaM和一种新的钙结合蛋白，且两种蛋白表现均一，分子量分别为18.9kD和16kD。王立波等 [30] 应用红外光谱技术对新钙结合蛋白二级结构的研究表明，该蛋白中Z-helix含量较低，而β-sheet含量较高，且随不同比例金属离子的加入，1629cm -1 处β-sheet峰的变化较明显。初步认为其含有与Ca 2+ 浓度相关的特殊的结构和功能。
, 百拇医药
1.4 胆碱酯酶 丁诗华等 [31] 将赤子爱胜蚓(Eisenia foetiˉda)的Tirton-100抽提物经PEG200-磷酸钾缓冲液处理、离子交换及凝胶过滤获得电泳纯的胆碱酯酶，经鉴定为糖蛋白，凝胶过滤和SDS-PAGE法测得其分子量分别为59kD和58kD，其中酸性氨基酸含量约占24%，碱性氨基酸含量约占12%。该酶热稳定性差，酶作用最适温度为39℃，最适pH为7.8。Mg 2+ 、Ca 2+ 和Mn 2+ 对酶活性影响较小，DEP则对该酶有强烈抑制作用。
1.5 过氧化氢酶 徐炜虹等 [32] 以赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)组织匀浆经硫酸胺盐析、透析浓缩后，用大柱制备和电泳纯化得到两个过氧化氢酶，均为糖蛋白，分子量分别为390kD和400kD，KCN及Cu 2+ 、Cd 2+ 、Zn 2+ 、Ni 2+ 等金属离子均抑制酶的活性，Pb 2+ 、Fe 2+ 则有激活作用。在直隶环毛蚓(Pheretima tschiliensis)体内实验中，Zn 2+ 显著提高过氧化氢酶的总活力，Cd 2+ 、Ni 2+ 先是降低，随后提高酶总活力。
, 百拇医药
1.6 抗微生物蛋白 Cho JH等 [33] 采用肝素亲和层析和反相C 18 -HPLC技术从蚯蚓Lumbricus rubellus中分离纯化获得一种新的抗微生物肽类，命名为LumbricinⅠ。该成分为含脯氨酶的62氨基酸肽类，cDNA序列分析证明其为一种76氨基酸的前体形式，在体外实验中表现出广谱抗微生物活性而不会溶血。此外，从LumbricinⅠ的6～34残基分离29氨基酸肽还显示出比LumbricinⅠ稍强的抗微生物活性。Beschin A等 [34] 对赤子爱胜蚓(Eiseniafoetida)体液中所含具有溶血作用、分子量为42kD的蛋白即体腔溶解细胞因子1(CCF-1)进行克隆和序列分析，结果表明CCF-1与无脊椎动物体内存在的凝集因子G和革兰阴性菌结合蛋白具有同源性，后两者均参与无脊椎动物的防御机制。CCF-1还能有效地结合β-1，3-葡聚糖和脂多糖，并通过识别酵母菌和革兰阴性菌细胞壁成分而参与prophenoloxidase的活化。上述结果提示CCF-1可能在蚯蚓抗微生物方面发挥了一定的作用。赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)体液具有抗菌、溶血、凝血等多种活性，这些活性主要是由两种名为Feˉtidins、分子量约为40kD和45kD的蛋白所调节的。Milochau A等 [35] 采用离子交换层析技术，从蚯蚓体液中纯化得到了两种具有同一性的蛋白质，两者均保留其原有的抗菌活性。
, 百拇医药
1.7 收缩血管蛋白 Lysenin是从赤子爱胜蚓(Eisenia foetiˉda)中分离得到的一种蛋白，具有收缩大鼠血管平滑肌的作用。Senizawa Y等 [36] 利用PCR产生的部分cDNA作为探针，分离出的cDNA编码lysenin具有ORF编码的297氨基酸残基。由cDNA推断的氨基酸序列与以往的收缩血管活性物质缺乏显著的同源性。笔者利用大肠杆菌重组的lysˉenin与从蚓体分离得到的lysenin对大鼠血管的收缩作用相似。
1.8 兼具溶血和凝血作用的蛋白 EueⅠ等 [37] 采用PAGE法从赤子爱胜蚓(Eiseniafoetida)体液中分离出3种具有溶解红细胞作用的蛋白质H1～H3，分子量分别为46kD、43kD和40kD，三者均存在不同的异构体，其中，H1和H2在SDS中表现稳定，H3则断裂为分子量分别为18kD、21kD的两个片段。H3表现出溶血和凝血的双重功效，在56℃时3种蛋白的溶血活性均失去，但H3的凝血活性仍然稳定。此外，该蚯蚓体液中存在的两种蛋白fetidins也具有溶血和凝血的双重作用 [35] 。
, 百拇医药
1.9 溶血蛋白 赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)体液具有溶血活性，Lange S等 [38]认为是一种分子量为38kD名为Eiseniaˉpore的溶血蛋白引起的。Yamaji A等 [39] 也分离得到一种新的具有溶解红细胞作用的蛋白，命名为lysenin，分子量为41kD。
1.10 免疫球蛋白粘连物(adhesins) Popovic M等 [40] 从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)组织匀浆的生物活性提取物G-90中分离出具有免疫球蛋白样结构的物质G-90/4。该物质在ng浓度时刺激细胞增殖的作用即强于G-90，且增殖活性的提高与细胞胞浆蛋白中酪氨酸水平呈正相关;在ng浓度时有溶细胞作用。免疫组分分析证明该结构物质存在于蚯蚓结缔组织和肌肉组织中。
1.11 抗肿瘤成分 国内对蚯蚓抗肿瘤作用研究始于上世纪80年代，其中，地龙胶囊(912)是第四军医大学王克为教授从新鲜蚯蚓中提取制备的抗肿瘤新药。该药具有较强的抑制肿瘤细胞生长的作用，是一种良好的辐射增效剂和化学增效剂 [41] 。它含有多肽、蛋白质类物质以及DNA、RNA、维生素和微量元素等成分，有活血化瘀、清热解毒、消肿散结及提高细胞免疫活性的作用。韩苇等 [42] 用G50凝胶过滤法将蚯蚓提取物分离，获得分子量大小不同的四个组分，组分Ⅰ分子量约为500kD，具有很强的抑制MGC803胃癌细胞生长的作用，且能使癌细胞发生形态学改变，这种作用在一定的加热条件下也不消失;组分Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分子量均在14kD以下;组分Ⅳ也具有较强的抑瘤作用，但这种作用在加热条件下消失;组分Ⅱ、Ⅲ不含直接抑制肿瘤生长的成分。临床研究表明，蚯蚓提取物对食管癌 [41] 、胃癌 [43] 、肺癌 [44] 、咽喉癌、移植性肿瘤(S180和H22)以及其它肿瘤具有明显的抑制作用 [45，46] ，其作用机制可以认为:(1)提高机体的免疫功能 [47～49] ;(2)MΦ吞噬率增高，吞噬质数增高 [49] ;(3)抗脂质过氧化作用对肿瘤产生抑制 [41] 。
, http://www.100md.com
鉴于蚯蚓提取物抗肿瘤成分复杂，林少琴等 [50] 以太平Ⅱ蚓(Eisenia foelida)经匀浆、丙酮沉淀DEAE-Sepharose FF层析柱分离纯化制得一种糖蛋白组分QY-Ⅰ。苯酚-硫酸法测的其含糖量为2%，SDS-PAGE法测得分子量为63kD;氨基酸组成分析表明其含有16种氨基酸，不含色氨酸和半胱氨酸;对小鼠肝癌H22有明显的抑制作用，能够使荷瘤小鼠生命延长率提高达65.4%。
Tsunoda S等 [51] 从蚯蚓中分离出一种胍类D-Lumˉbricine，并证明其具有抑制小鼠自发性乳瘤生长的作用。构效关系研究表明，乙烯基团的存在及其长度对胍类的抗肿瘤作用具有重要意义，抗肿瘤活性的作用位点在于胍乙基团。不同给药途径对抗肿瘤作用也有影响，皮下注射的作 用强于口服给药。
1.12 促髓系细胞增殖组分 李俊娥等 [52] 采用硫酸胺分段盐析、DEAE纤维素-DE52离子交换柱层析、Sephadex G100凝胶过滤柱层析等方法，从蚯蚓组织中提取有促髓系幼稚细胞增殖活性的蛋白质，提纯倍数达190倍。凝胶电泳检测有5条区带，蛋白酶复印结果显示其中3条具蛋白酶活性。该活性蛋白质有一定耐热性(55℃，60min)，促增值活性强的部分，其纤溶活性也强。
, 百拇医药
2 蚯蚓临床应用
2.1 蚯蚓的溶栓作用 根据蚯蚓提取物中含有大量具有强烈的直接溶解血栓和人纤维蛋白的活性的纤溶酶组分，现已有蚯蚓纤溶酶粗提物的口服制剂的商品上市，如溶栓胶囊(山西中远威药业)、蚓激酶胶囊(青岛双龙)、纤溶酶片(哈尔滨卫健制药厂)等。由于蚯蚓纤溶酶能降低血液粘稠度、改善微循环、并具有良好的体内外溶栓抗凝作用，在临床上显示对多种血栓疾病有较好疗效而用于治疗中老年脑梗塞和缺血性脑卒中，并主要侧重于脑血管病的预防及中风后遗症的恢复。张润民等 [53] 用蚓激酶胶囊治疗34例脑梗塞患者，临床总有效率94.12%，显效率79.41%。北京宣武医院等 [54] 多家医院用蚓激酶胶囊治疗脑梗塞患者303例，临床总有效率93.7%，显效率73.6%。上海医科大学附属中山医院等 [55] 多家医院用蚓激酶胶囊治疗缺血性脑卒中患者69例，有效率94.2%，显效率82.5%。为了解决其作用缓慢不能用于治疗急性心脑血管栓塞疾病的问题，已有从事注射液的研究，并采用基因工程技术研制重组型蚯蚓溶栓酶。
, 百拇医药
2.2 蚯蚓的抗肿瘤作用 蚯蚓提取液中含有多肽、蛋白质类物质以及DNA、RNA、维生素和微量元素等成分对抑制肿瘤的生长和提高细胞免疫功能有效 [56] ，其中，抗肿瘤新药-地龙胶囊(912)就是蚯蚓提取物制剂，经天津肿瘤医院、第四军医大学西京医院、北京军区总院等多家医院对3000多例的临床观察结果表明，单用912，晚期食管癌缓解率为43%，与化疗并用优于单纯化疗;与放疗并用，对肺癌和食管癌疗效最佳 [41，44] 。
3 结语和展望
蚯蚓在临床上应用广泛，药理活性显著，疗效确切，且资源丰富，因此，蚯蚓的生物技术产品开发具有广阔的前景。但目前国内外对蚯蚓的研究主要集中于纤溶性成分，抗肿瘤成分研究也较少;对蚯蚓常用于临床的其它疾病如高血压及哮喘等则更是少有研究，据此，笔者认为只有扩大研究领域，发掘新的有效成分和新的适应证，加强蚯蚓提取物的作用机制研究，发挥我国中医临床应用经验丰富的优势，独辟蹊径，刻意创新而不拘泥于国外的研究趋势，才能研究开发出真正具有国际竞争力的产品。
, 百拇医药
参考文献
1 陈德牛，曾中平，徐芹.药用蚯蚓.中草药，1980，11(9):420-422.
2 江苏新医学院编.中药大辞典(下册).上海:上海科学技术出版社，1986，2111-2114.
3 Mihara H，Sumi H.A novel fibrinolytic enzyme extracted from the earthˉworm，Lumbricus rubellus.Jpn Physiol，1991，41(3):461-472.
4 Sumi H，Nake J，Mihara H.A very stable and potent fibrinolygic enzyme found in earthwormLumbricus rubellus antolyzate.Comp Biochem，Physˉiol，B:Comp Biochem，1993，106B(3):763-766.
, http://www.100md.com
5 程牛亮，牛勃，张祖询，等.双胸蚓纤溶酶的纯化及性质.生物化学杂志，1990，6(2):186-190.
6 程牛亮.中国实验临床免疫学杂志，1996，8(2):8.
7 Hrzenjak T.Comp Biochem，Physiol，B:Biochem Mol Biol，1998，119(4):825.
8 熊焱，杨四成，刘晓英.蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分序列测定.生物化学杂志，1997，13(3):292-295.
9 何执中，何执静，宗瑜琮，等.高活力纤溶酶的纯化及性质研究.中国药科大学学报，1997，28(6):362-365.
10 赵晓瑜，静天玉.蚯蚓纤溶酶的成分分析.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(4):407-411.11 吴文军.中药材，1997，20(2):78.12 吴容.生物技术，1998，5(2):84.
, 百拇医药
13 彭先凤，杨继虞，陶建宁，等.赤子爱胜蚓五种纤溶酶组分的分离纯化及对纤维蛋白原酶解的初步研究.华西药学杂志，1999，(1):16.
14 毛孙忠，严哲，陈石根.蚯蚓纤溶酶的分离纯化及动力学性质研究.温州医学院学报，2000，30(4):277-278.
15 徐建民，张国桢，陈松鹤，等.赤子爱胜蚓纤维蛋白溶解酶的亲和层析纯化和生化特性.上海医科大学学报，1991，18(4):252.
16 姜东胜，刘复强，赵相印，等.用亲和色谱柱纯化蚯蚓纤溶酶.中国医药工业杂志，1996，27(4):147.
17 林少琴，余萍，兰瑞芳.蚯蚓纤溶酶的亲和层析纯化及部分性质.药物生物技术，2000，7(4):229-133.
18 陈飞，刘艳玲，吴红艳，等.蚯蚓有效成分研究进展.微生物学杂志，2000，20(1):45-46.
, 百拇医药
19 Nakajima N.Biomed Biotechnol Biochem，1996，60(2):293.
20 Ryu GH.J Biomed Mater Res，1994，28(9):1069.
21 Ryu GH.J Biomed Mater Res，1995，29(3):403.
22 路英华.巨齿远蚓纤溶酶的分离纯化及其若干性质.生物化学杂志，1988，4(2):166.
23 杨树东，王中，李金荣，等.蚯蚓纤溶性成分的抗凝及溶栓作用.心肺血管杂志，1997，16(3):228-230.
24 杨嘉树，李令婉，茹炳根.蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的部分性质研究.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(2):164-169.
, http://www.100md.com
25 杨嘉树，李令婉，茹炳根.蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的分离纯化.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(2):156-163.
26 杨嘉树，李令婉，茹炳根.蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对ATEE的降解.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(4):417-421.
27 杨嘉树，李令婉，茹炳根.蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对BAEE的降解.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(4):421-426.
28 张燕红，张庭芳.蚯蚓钙调素结合蛋白的分离纯化及性质研究.北京大学学报(自然科学版)，1997，33(6):731-735.
29 王采芹，张庭芳.蚯蚓钙结合蛋白的分离纯化及性质的研究.北京大学学报(自然科学版)，1996，32(6):741-748.
, 百拇医药
30 王立波.生物物理学报，1997，13(2):167.
31 丁诗华.应用环境生物学报，1997，3(3):246.
32 徐炜虹.华东师范大学学报(自然科学版)，1996，(4):95.
33 Cho JH.Biochem Biophys Acta，1998，1408(1):67.
34 Beschin A.J Biol chem，1998，273(38):24948.
35 Beschin A.Biochem Biophys Acta，1997，1337(1):123.
36 Sekizawa Y.Gene，1997，19(1):97.
, http://www.100md.com
37 Eue I.Dev Comp Immunol，1998，22(1):13.
38 Lange S.J Biol chem，1997，272(33):20884.
39 Yamaji A.J Biol chem，1998，273(9):5300.
40 Popovic M.Gen Pharmacol，1998，30(5):795.
41 王克为，张绍章，李玉蓉，等.地龙胶囊(912)专刊.中国肿瘤临床，1991，18(3):13-186.
42 韩苇，王克为.蚯蚓提取物凝胶过滤不同组分对MGC803胃癌细胞DNA合成的影响.第四军医大学学报，1991，12(6):409-410.
, http://www.100md.com
43 韩苇.蚯蚓提取物透析组分对MGC803胃癌细胞DNA合成的抑制作用.第四军医大学学报，1991，12:302.
44 张绍章，田琼，王克为，等.中药地龙胶囊对食管癌和肺癌的辐射增效作用.第四军医大学学报，1992，13(3):165-168.
45 张发科.912对Hep-2癌细胞的抑制作用.第四军医大学学报，1987，8:224.
46 王克为，张绍章，李玉蓉.912蚯蚓提取物对小鼠移植瘤的抑制作用.第四军医大学学报，1986，7(2):85-88.
47 张建.“912”对荷瘤小鼠免疫功能的调节及抑制作用.中华微生物和免疫杂志，1991，11:281.
48 张绍章.蚯蚓提取物对小鼠脾脏抗形成细胞的影响.第四军医大学学报，1993，14(5):350-352.
, 百拇医药
49 智刚，朱敏生.912抗肿瘤作用初探.第四军医大学学报，1988，9(3):171-172.
50 林少琴，余萍，兰瑞芳.蚯蚓抗肿瘤成分的研究.海峡药学，2000，12(3):59-61.
51 Tsunoda S，et al.Anticancer Res，1997，17(5A):3349.
52 李俊娥.中国海洋药物，1997，18(3):119.
53 张润民，马琳，陈旭.博洛克治疗中老年脑梗塞34例.陕西中医，1995，16(9):392.
54 全民.国家级新药“蚓激酶”和“蚓激酶胶囊”研制成功.生物化学与生物物理进展，1994，21(1):85.
55 百奥蚓激酶胶囊治疗缺血性脑卒中在上海市的临床观察.生物化学与生物物理进展，1996，23(1):封三.
56 张祖询，曾小澜.蚯蚓提取物对多种瘤细胞的作用.山西医学院学报，1995，26(2):81-83.
作者单位:200052上海解放军第455医院
(收稿日期:2003-10-27)
(编辑小 川), http://www.100md.com(马福家)
蚯蚓(earthworm或lumbricus)俗称地龙，又名曲蟮、肾蚕、虫蟮等，为环节动物门(Aneelida)寡毛纲(Oligochaeta)动物，其种类繁多，资源丰富，在我国入药已有四千多年历史，《本草纲目》称其“治大腹黄疸”，“治中风疾病”，“化为水，疗伤寒”等等。我国蚯蚓约有3000余种，供药用者仅有秉氏环毛蚓(Pheretima carnosa)、赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)、背暗异唇蚓(Allolobophora caliginosa)、直隶环毛蚓(Pheretima tschiliensis)和参环毛蚓(Pheretima aspergillium)5种 [1] ，中药“广地龙”就是主产于广东、广西等地的参环毛蚓全体经剖腹洗净、晒干或焙干后的制品，“土地龙”则是主产于河南、山东、江苏、福建、安徽等地的背暗异唇蚓的全体制品。
, 百拇医药 国内外学者对蚯蚓的有效成分和药理作用研究表明 [2] ，蚯蚓体内含有丰富的蛋白质、氨基酸和酶类，其中一种酶在pH8.0～8.2时能使蚯蚓溶解;此外，还含有蚯蚓解热碱(Lumbrofebrine)、蚯蚓素(Lumbritin)、蚯蚓毒素(Terrestro-lumbrolysin)、脂类、嘌呤、胆碱(choline)、磷脂、胍(Guaniˉdine)、亚油酸、多种维生素及微量元素，具有活血化瘀、溶栓降压、清热定惊、消炎止痛、平喘止咳、通经利尿等功效，中医临床可用于治疗支气管炎及支气管哮喘、中风半身不遂、高血压、伤寒、流行性腮腺炎、下肢溃疡、骨折及带状疱疹等疾患。自20世纪80年代初日本学者美原恒(Mihara H)教授从蚯蚓中提取得到具有极高活性的纤溶酶以来，国内外对蚯蚓的研究空前活跃，有关纤溶酶的研究更是成为热点，取得了较大的进展。本文就其有效成分及其药理活性的研究进展作一综述。
1 蚯蚓活性成分
1.1 蚯蚓纤溶酶(earthworm fibrinolytic enzymes，EFE，又称蚓激酶) 大量实验证明，蚯蚓提取物具有强烈的直接溶解血栓和人纤维蛋白的活性，且提取、分离、纯化活性组分的难易程度随蚯蚓品种的不同会有很大不同。
, 百拇医药
Mihara H等 [3] 从粉正蚓(Lumbricus rubellus)中分离得到六种具有纤溶活性的组分，这些组分对热较稳定，含有丰富的天冬酰胺和天冬氨酸，很少的脯氨酸和赖氨酸。Sumi H等 [4] 从粉正蚓(Lumbricus rubellus)的自溶液中分离出三个对纤维蛋白或血栓具有强溶解活性的组分，其分子量分别为40kD、21kD和15kD。
程牛亮等 [5，6] 用0.01mol/L、pH7.8的磷酸盐缓冲液抽提，硫酸胺盐析及Sephadex G-75等3种柱层析方法从双胸蚓(Lumbricidae Bimostos)组织匀浆中分离得到分子量为29kD和36kD的两种纤溶组分，具有强烈的溶解纤维蛋白的作用，对家兔实验性血凝块也有明显的溶解作用。
Hrzenjak T等 [7] 从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)提取物中分离得到分子量为34kD(PⅠ)和23kD(PⅡ)的二种丝氨酸 肽酶，PⅠ活性高于PⅡ，前者浓度为10 5 ng/ml时能使纤凝块溶解时间缩短54%，浓度为10 3 ng/ml时则完全抑制静脉血的凝固。熊焱等[8] 以新鲜赤子爱胜蚓为原料，经保温抽提、乙醇沉淀、多种层析、电泳等分离纯化步骤得到一种纯度达95%，分子量为33kD的单肽链纤溶酶，该酶具有很强的溶解纤维蛋白的作用及蛋白酶活性，平板法测得其比活性为900U/mg蛋白，TAME法测得其2500U/mg蛋白。
, http://www.100md.com
何执中等 [9] 用提取、沉淀、凝胶层析和离子交换等方法从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)中得到了单组分酶，活力收率为粗酶粉的19.1%，具有极强的纤溶活性，其分子量为30kD，比活力达6667U/mg蛋白，在pH4～11及25℃～55℃内稳定。赵晓瑜等 [10] 从太平二号蚓(Eisenia foetida)匀浆也进一步提取获得了一组糖蛋白纤溶酶，含糖量为5%左右，分子量为16～33kD，富含Asp，而Met、Trp和Lys含量很少;1mg蚯蚓纤溶酶相当于250～300尿激酶单位。
胡文军等 [11] 采用加提取剂的匀浆盐析及超滤等方法从参环毛蚓(Pheretima aspergillum)中获得了一种分子量为22kD、活性和纯度均较高的单链蛋白纤溶酶。
吴容等 [12] 通过选择热变性、大豆胰蛋白酶抑制剂-Sepharose4B亲和层析技术从蚯蚓中分离纯化得到具有强烈纤溶活性的酶组分，经PAGE检定为单一谱带，分子量为32kD，属丝氨酸蛋白酶。
, http://www.100md.com
彭先凤等 [13] 用硫酸胺盐析、沉淀和PAGE制备电泳从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)纤溶酶粗品中分离纯化得到5种组分(Ⅰ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ)，在PAGE中均呈单一带。其中，组分Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ能将纤维蛋白原中α、β、γ链依次降解，对α链亲和力最大。组分Ⅹ不能降解34.5kD、40kD、24.5kD片段，组分Ⅰ对α链有较高亲和力而对γ链无降解作用。
毛孙忠等 [14] 以正蚓科双胸属蚯蚓(Lumbricus Bimastus)经组织匀浆、缓冲液抽提与选择性热变性，再经抑制剂1，6-己二胺(HD)偶联的Sepharose4B亲和层析及DEAE-Sepharose离子交换层析法分离得到具有强烈纤溶活性的酶组分(EFE-F 1，2 ，EFE-F 3 )，其中EFE-F 3 对合成底物S-2288(HD-Ile-Pro-Arg-PNA)和chromozym P(cb2-Gly-Pro-Arg-PNA)的K m 分别为0.01mmol/L和0.02mmol/L，HD的K i 为1mmol/L;该酶热稳定性强，能抗4mol/L脲。
, http://www.100md.com
徐建民 [15] 、姜东胜 [16] 等，用慈菇蛋白酶抑制剂-Sepharose4B亲和层析法，从蚯蚓丙酮粉组提取物中直接分离出9种具有较高活性和纯度的纤溶酶。林少琴等[17] 用牛血纤溶酶原-Sepharose4B亲和层析法，从太平Ⅱ蚓(Eisenia foetida)丙酮粉粗提物中分离纯化获得一种纤溶酶。该酶为糖蛋白，含糖量约为1.43%，分子量为30kD，具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的间接溶解纤维蛋白的双重作用，并对人血凝块有明显溶解作用。1%PMSF对酶有显著抑制作用，说明该酶为典型的丝氨酸蛋白酶类酶。
辽宁省微生物研究所和中国预防医学科学院病毒研究所从正蚓科双胸属蚯蚓(Lumbricus Bimastus)中提取获得具有纤溶活性的纯品蛋白P(30) [18] ，氨基酸序列测定末端24个氨基酸为VIGGTNASPGEFPWQLSQQRQSGS，正在进行深入的研究。
, 百拇医药
为探讨纤溶酶的适应性和扩大使用范围，国外学者还对纤溶酶的结构进行了部分修饰。Nakajima N等 [19] 利用人血白蛋白片段，对从蚯蚓Lumbricus rubellus中提取的6种蛋白酶中纤溶酶活性最强的一种进行了化学修饰。修饰后的酶失去了母酶的抗原性，并与人血清白蛋白片段结合形成沉淀，这种结合可以显著提高酶对大鼠血浆中蛋白酶抑制剂灭活作用的抵抗能力，且该酶不会诱导血小板凝集，能迅速溶解血栓素引起的全血血栓块。Ryu GH等 [20，21] 则将纤溶活性最强的蚓激酶固定于抗肿瘤药多尿烷(polyurethane)表面并研究其酶活性和抗栓活性，结果表明，与可溶性的蚓激酶活性相比，固定后的酶保留了34%的活性，且不受热灭活、降解和各种酶酸环境的影响而保持稳定，其最适合pH值上升了一个单位。
以上文献资料表明，蚯蚓体内的纤溶酶组分十分复杂，酶学性质也比较复杂。它不仅具有直接水解纤维蛋白的纤溶酶活性，还具有激活纤溶酶原的类尿激酶活性 [22] ;不仅能溶解血栓、抑制血栓形成，而且还具有抗凝作用 [23] 。但它在pH4～10的范围内都很稳定，是一类热稳定性非常好的蛋白水解酶，50℃以下可以长久保持活性 [10] ;虽在人工胃液中极不稳定，在37℃保温1h，酶活性几乎全部丧失，但在人工胃液中加入一定离子强度的缓冲液后保温同样时间，酶活性几乎没有损伤。其干燥物在室温下密封保存5年未见失活 [24] 。
, 百拇医药
1.2 纤溶酶原激活剂 杨嘉树等 [24～27] 从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)体内分离出一种可体外激活纤溶酶原而间接降解纤维蛋白的蚓激酶(e-PA)，纯化过程包括:粗品的盐析、离子交换层析、凝胶过滤层析及疏水相互层析。该酶分子量为45kD，由2个亚基通过疏水相互作用维系在一起，SDS电泳显示大、小亚基的分子量分别是26kD和18kD，而质谱测得大、小亚基的分子量分别是24556.7和15546.6。对大、小亚基进行氨基酸组成分析，结果显示大亚基不含Lys，而小亚基不含Cys，单独的大亚基只有较弱的纤溶活性，单独的小亚基没有任何可见的纤溶活性，很可能小亚基是一个调节亚基，大亚基是催化亚基。氨基酸序列测定大亚基N端25个氨基酸为VIGGTNASPGEIPWQLSQQRQSGSW(即Val-Ile-Gly-Gly-Thr-Asn-Ala-Ser-Pro-Gly-Glu-Ile-Pro-Trp-Glu-Leu-Ser-Gln-Gln-Arg-Gln-Ser-Gly-Ser-Trp…)。e-PA可以切割碱性氨基酸、小的中性氨基酸及Met的羧基端，同时e-PA确能将纤溶酶原切割为纤溶酶。这一结论提示e-PA可能会发展成为新型溶栓药物。e-PA还具有降解苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)和N-乙酰-L-酪氨酸乙酯(ATEE)的作用。
, http://www.100md.com
1.3 钙调素(CaM)和钙调素结合蛋白(CaM-binding Proˉtein，CaMBP) 张燕红等 [28] 以赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)为材料，通过DEAE-Fast Flow离子交换层析、CaM-Sepharose亲和层析分离纯化得到CaMBP。该蛋白对CaM激活的环核苷酸磷酸二酯酶活性有抑制作用，且这种抑制作用可通过加入过量的CaM达到完全恢复。SDS-PAGE显示有3 条明显主带，在EGTA存在时表现的分子量分别为62kD、49kD和30kD，用生物素-CaM覆盖法也检测到3种结合蛋白，两者结果一致。酶活性测定表明该蛋白有Ca 2+ -ATP酶活性，但无NAD激酶活性。王采芹等 [29] 从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)中还分离纯化了CaM和一种新的钙结合蛋白，且两种蛋白表现均一，分子量分别为18.9kD和16kD。王立波等 [30] 应用红外光谱技术对新钙结合蛋白二级结构的研究表明，该蛋白中Z-helix含量较低，而β-sheet含量较高，且随不同比例金属离子的加入，1629cm -1 处β-sheet峰的变化较明显。初步认为其含有与Ca 2+ 浓度相关的特殊的结构和功能。
, 百拇医药
1.4 胆碱酯酶 丁诗华等 [31] 将赤子爱胜蚓(Eisenia foetiˉda)的Tirton-100抽提物经PEG200-磷酸钾缓冲液处理、离子交换及凝胶过滤获得电泳纯的胆碱酯酶，经鉴定为糖蛋白，凝胶过滤和SDS-PAGE法测得其分子量分别为59kD和58kD，其中酸性氨基酸含量约占24%，碱性氨基酸含量约占12%。该酶热稳定性差，酶作用最适温度为39℃，最适pH为7.8。Mg 2+ 、Ca 2+ 和Mn 2+ 对酶活性影响较小，DEP则对该酶有强烈抑制作用。
1.5 过氧化氢酶 徐炜虹等 [32] 以赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)组织匀浆经硫酸胺盐析、透析浓缩后，用大柱制备和电泳纯化得到两个过氧化氢酶，均为糖蛋白，分子量分别为390kD和400kD，KCN及Cu 2+ 、Cd 2+ 、Zn 2+ 、Ni 2+ 等金属离子均抑制酶的活性，Pb 2+ 、Fe 2+ 则有激活作用。在直隶环毛蚓(Pheretima tschiliensis)体内实验中，Zn 2+ 显著提高过氧化氢酶的总活力，Cd 2+ 、Ni 2+ 先是降低，随后提高酶总活力。
, 百拇医药
1.6 抗微生物蛋白 Cho JH等 [33] 采用肝素亲和层析和反相C 18 -HPLC技术从蚯蚓Lumbricus rubellus中分离纯化获得一种新的抗微生物肽类，命名为LumbricinⅠ。该成分为含脯氨酶的62氨基酸肽类，cDNA序列分析证明其为一种76氨基酸的前体形式，在体外实验中表现出广谱抗微生物活性而不会溶血。此外，从LumbricinⅠ的6～34残基分离29氨基酸肽还显示出比LumbricinⅠ稍强的抗微生物活性。Beschin A等 [34] 对赤子爱胜蚓(Eiseniafoetida)体液中所含具有溶血作用、分子量为42kD的蛋白即体腔溶解细胞因子1(CCF-1)进行克隆和序列分析，结果表明CCF-1与无脊椎动物体内存在的凝集因子G和革兰阴性菌结合蛋白具有同源性，后两者均参与无脊椎动物的防御机制。CCF-1还能有效地结合β-1，3-葡聚糖和脂多糖，并通过识别酵母菌和革兰阴性菌细胞壁成分而参与prophenoloxidase的活化。上述结果提示CCF-1可能在蚯蚓抗微生物方面发挥了一定的作用。赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)体液具有抗菌、溶血、凝血等多种活性，这些活性主要是由两种名为Feˉtidins、分子量约为40kD和45kD的蛋白所调节的。Milochau A等 [35] 采用离子交换层析技术，从蚯蚓体液中纯化得到了两种具有同一性的蛋白质，两者均保留其原有的抗菌活性。
, 百拇医药
1.7 收缩血管蛋白 Lysenin是从赤子爱胜蚓(Eisenia foetiˉda)中分离得到的一种蛋白，具有收缩大鼠血管平滑肌的作用。Senizawa Y等 [36] 利用PCR产生的部分cDNA作为探针，分离出的cDNA编码lysenin具有ORF编码的297氨基酸残基。由cDNA推断的氨基酸序列与以往的收缩血管活性物质缺乏显著的同源性。笔者利用大肠杆菌重组的lysˉenin与从蚓体分离得到的lysenin对大鼠血管的收缩作用相似。
1.8 兼具溶血和凝血作用的蛋白 EueⅠ等 [37] 采用PAGE法从赤子爱胜蚓(Eiseniafoetida)体液中分离出3种具有溶解红细胞作用的蛋白质H1～H3，分子量分别为46kD、43kD和40kD，三者均存在不同的异构体，其中，H1和H2在SDS中表现稳定，H3则断裂为分子量分别为18kD、21kD的两个片段。H3表现出溶血和凝血的双重功效，在56℃时3种蛋白的溶血活性均失去，但H3的凝血活性仍然稳定。此外，该蚯蚓体液中存在的两种蛋白fetidins也具有溶血和凝血的双重作用 [35] 。
, 百拇医药
1.9 溶血蛋白 赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)体液具有溶血活性，Lange S等 [38]认为是一种分子量为38kD名为Eiseniaˉpore的溶血蛋白引起的。Yamaji A等 [39] 也分离得到一种新的具有溶解红细胞作用的蛋白，命名为lysenin，分子量为41kD。
1.10 免疫球蛋白粘连物(adhesins) Popovic M等 [40] 从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)组织匀浆的生物活性提取物G-90中分离出具有免疫球蛋白样结构的物质G-90/4。该物质在ng浓度时刺激细胞增殖的作用即强于G-90，且增殖活性的提高与细胞胞浆蛋白中酪氨酸水平呈正相关;在ng浓度时有溶细胞作用。免疫组分分析证明该结构物质存在于蚯蚓结缔组织和肌肉组织中。
1.11 抗肿瘤成分 国内对蚯蚓抗肿瘤作用研究始于上世纪80年代，其中，地龙胶囊(912)是第四军医大学王克为教授从新鲜蚯蚓中提取制备的抗肿瘤新药。该药具有较强的抑制肿瘤细胞生长的作用，是一种良好的辐射增效剂和化学增效剂 [41] 。它含有多肽、蛋白质类物质以及DNA、RNA、维生素和微量元素等成分，有活血化瘀、清热解毒、消肿散结及提高细胞免疫活性的作用。韩苇等 [42] 用G50凝胶过滤法将蚯蚓提取物分离，获得分子量大小不同的四个组分，组分Ⅰ分子量约为500kD，具有很强的抑制MGC803胃癌细胞生长的作用，且能使癌细胞发生形态学改变，这种作用在一定的加热条件下也不消失;组分Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分子量均在14kD以下;组分Ⅳ也具有较强的抑瘤作用，但这种作用在加热条件下消失;组分Ⅱ、Ⅲ不含直接抑制肿瘤生长的成分。临床研究表明，蚯蚓提取物对食管癌 [41] 、胃癌 [43] 、肺癌 [44] 、咽喉癌、移植性肿瘤(S180和H22)以及其它肿瘤具有明显的抑制作用 [45，46] ，其作用机制可以认为:(1)提高机体的免疫功能 [47～49] ;(2)MΦ吞噬率增高，吞噬质数增高 [49] ;(3)抗脂质过氧化作用对肿瘤产生抑制 [41] 。
, http://www.100md.com
鉴于蚯蚓提取物抗肿瘤成分复杂，林少琴等 [50] 以太平Ⅱ蚓(Eisenia foelida)经匀浆、丙酮沉淀DEAE-Sepharose FF层析柱分离纯化制得一种糖蛋白组分QY-Ⅰ。苯酚-硫酸法测的其含糖量为2%，SDS-PAGE法测得分子量为63kD;氨基酸组成分析表明其含有16种氨基酸，不含色氨酸和半胱氨酸;对小鼠肝癌H22有明显的抑制作用，能够使荷瘤小鼠生命延长率提高达65.4%。
Tsunoda S等 [51] 从蚯蚓中分离出一种胍类D-Lumˉbricine，并证明其具有抑制小鼠自发性乳瘤生长的作用。构效关系研究表明，乙烯基团的存在及其长度对胍类的抗肿瘤作用具有重要意义，抗肿瘤活性的作用位点在于胍乙基团。不同给药途径对抗肿瘤作用也有影响，皮下注射的作 用强于口服给药。
1.12 促髓系细胞增殖组分 李俊娥等 [52] 采用硫酸胺分段盐析、DEAE纤维素-DE52离子交换柱层析、Sephadex G100凝胶过滤柱层析等方法，从蚯蚓组织中提取有促髓系幼稚细胞增殖活性的蛋白质，提纯倍数达190倍。凝胶电泳检测有5条区带，蛋白酶复印结果显示其中3条具蛋白酶活性。该活性蛋白质有一定耐热性(55℃，60min)，促增值活性强的部分，其纤溶活性也强。
, 百拇医药
2 蚯蚓临床应用
2.1 蚯蚓的溶栓作用 根据蚯蚓提取物中含有大量具有强烈的直接溶解血栓和人纤维蛋白的活性的纤溶酶组分，现已有蚯蚓纤溶酶粗提物的口服制剂的商品上市，如溶栓胶囊(山西中远威药业)、蚓激酶胶囊(青岛双龙)、纤溶酶片(哈尔滨卫健制药厂)等。由于蚯蚓纤溶酶能降低血液粘稠度、改善微循环、并具有良好的体内外溶栓抗凝作用，在临床上显示对多种血栓疾病有较好疗效而用于治疗中老年脑梗塞和缺血性脑卒中，并主要侧重于脑血管病的预防及中风后遗症的恢复。张润民等 [53] 用蚓激酶胶囊治疗34例脑梗塞患者，临床总有效率94.12%，显效率79.41%。北京宣武医院等 [54] 多家医院用蚓激酶胶囊治疗脑梗塞患者303例，临床总有效率93.7%，显效率73.6%。上海医科大学附属中山医院等 [55] 多家医院用蚓激酶胶囊治疗缺血性脑卒中患者69例，有效率94.2%，显效率82.5%。为了解决其作用缓慢不能用于治疗急性心脑血管栓塞疾病的问题，已有从事注射液的研究，并采用基因工程技术研制重组型蚯蚓溶栓酶。
, 百拇医药
2.2 蚯蚓的抗肿瘤作用 蚯蚓提取液中含有多肽、蛋白质类物质以及DNA、RNA、维生素和微量元素等成分对抑制肿瘤的生长和提高细胞免疫功能有效 [56] ，其中，抗肿瘤新药-地龙胶囊(912)就是蚯蚓提取物制剂，经天津肿瘤医院、第四军医大学西京医院、北京军区总院等多家医院对3000多例的临床观察结果表明，单用912，晚期食管癌缓解率为43%，与化疗并用优于单纯化疗;与放疗并用，对肺癌和食管癌疗效最佳 [41，44] 。
3 结语和展望
蚯蚓在临床上应用广泛，药理活性显著，疗效确切，且资源丰富，因此，蚯蚓的生物技术产品开发具有广阔的前景。但目前国内外对蚯蚓的研究主要集中于纤溶性成分，抗肿瘤成分研究也较少;对蚯蚓常用于临床的其它疾病如高血压及哮喘等则更是少有研究，据此，笔者认为只有扩大研究领域，发掘新的有效成分和新的适应证，加强蚯蚓提取物的作用机制研究，发挥我国中医临床应用经验丰富的优势，独辟蹊径，刻意创新而不拘泥于国外的研究趋势，才能研究开发出真正具有国际竞争力的产品。
, 百拇医药
参考文献
1 陈德牛，曾中平，徐芹.药用蚯蚓.中草药，1980，11(9):420-422.
2 江苏新医学院编.中药大辞典(下册).上海:上海科学技术出版社，1986，2111-2114.
3 Mihara H，Sumi H.A novel fibrinolytic enzyme extracted from the earthˉworm，Lumbricus rubellus.Jpn Physiol，1991，41(3):461-472.
4 Sumi H，Nake J，Mihara H.A very stable and potent fibrinolygic enzyme found in earthwormLumbricus rubellus antolyzate.Comp Biochem，Physˉiol，B:Comp Biochem，1993，106B(3):763-766.
, http://www.100md.com
5 程牛亮，牛勃，张祖询，等.双胸蚓纤溶酶的纯化及性质.生物化学杂志，1990，6(2):186-190.
6 程牛亮.中国实验临床免疫学杂志，1996，8(2):8.
7 Hrzenjak T.Comp Biochem，Physiol，B:Biochem Mol Biol，1998，119(4):825.
8 熊焱，杨四成，刘晓英.蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分序列测定.生物化学杂志，1997，13(3):292-295.
9 何执中，何执静，宗瑜琮，等.高活力纤溶酶的纯化及性质研究.中国药科大学学报，1997，28(6):362-365.
10 赵晓瑜，静天玉.蚯蚓纤溶酶的成分分析.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(4):407-411.11 吴文军.中药材，1997，20(2):78.12 吴容.生物技术，1998，5(2):84.
, 百拇医药
13 彭先凤，杨继虞，陶建宁，等.赤子爱胜蚓五种纤溶酶组分的分离纯化及对纤维蛋白原酶解的初步研究.华西药学杂志，1999，(1):16.
14 毛孙忠，严哲，陈石根.蚯蚓纤溶酶的分离纯化及动力学性质研究.温州医学院学报，2000，30(4):277-278.
15 徐建民，张国桢，陈松鹤，等.赤子爱胜蚓纤维蛋白溶解酶的亲和层析纯化和生化特性.上海医科大学学报，1991，18(4):252.
16 姜东胜，刘复强，赵相印，等.用亲和色谱柱纯化蚯蚓纤溶酶.中国医药工业杂志，1996，27(4):147.
17 林少琴，余萍，兰瑞芳.蚯蚓纤溶酶的亲和层析纯化及部分性质.药物生物技术，2000，7(4):229-133.
18 陈飞，刘艳玲，吴红艳，等.蚯蚓有效成分研究进展.微生物学杂志，2000，20(1):45-46.
, 百拇医药
19 Nakajima N.Biomed Biotechnol Biochem，1996，60(2):293.
20 Ryu GH.J Biomed Mater Res，1994，28(9):1069.
21 Ryu GH.J Biomed Mater Res，1995，29(3):403.
22 路英华.巨齿远蚓纤溶酶的分离纯化及其若干性质.生物化学杂志，1988，4(2):166.
23 杨树东，王中，李金荣，等.蚯蚓纤溶性成分的抗凝及溶栓作用.心肺血管杂志，1997，16(3):228-230.
24 杨嘉树，李令婉，茹炳根.蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的部分性质研究.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(2):164-169.
, http://www.100md.com
25 杨嘉树，李令婉，茹炳根.蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的分离纯化.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(2):156-163.
26 杨嘉树，李令婉，茹炳根.蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对ATEE的降解.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(4):417-421.
27 杨嘉树，李令婉，茹炳根.蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)对BAEE的降解.中国生物化学与分子生物学报，1998，14(4):421-426.
28 张燕红，张庭芳.蚯蚓钙调素结合蛋白的分离纯化及性质研究.北京大学学报(自然科学版)，1997，33(6):731-735.
29 王采芹，张庭芳.蚯蚓钙结合蛋白的分离纯化及性质的研究.北京大学学报(自然科学版)，1996，32(6):741-748.
, 百拇医药
30 王立波.生物物理学报，1997，13(2):167.
31 丁诗华.应用环境生物学报，1997，3(3):246.
32 徐炜虹.华东师范大学学报(自然科学版)，1996，(4):95.
33 Cho JH.Biochem Biophys Acta，1998，1408(1):67.
34 Beschin A.J Biol chem，1998，273(38):24948.
35 Beschin A.Biochem Biophys Acta，1997，1337(1):123.
36 Sekizawa Y.Gene，1997，19(1):97.
, http://www.100md.com
37 Eue I.Dev Comp Immunol，1998，22(1):13.
38 Lange S.J Biol chem，1997，272(33):20884.
39 Yamaji A.J Biol chem，1998，273(9):5300.
40 Popovic M.Gen Pharmacol，1998，30(5):795.
41 王克为，张绍章，李玉蓉，等.地龙胶囊(912)专刊.中国肿瘤临床，1991，18(3):13-186.
42 韩苇，王克为.蚯蚓提取物凝胶过滤不同组分对MGC803胃癌细胞DNA合成的影响.第四军医大学学报，1991，12(6):409-410.
, http://www.100md.com
43 韩苇.蚯蚓提取物透析组分对MGC803胃癌细胞DNA合成的抑制作用.第四军医大学学报，1991，12:302.
44 张绍章，田琼，王克为，等.中药地龙胶囊对食管癌和肺癌的辐射增效作用.第四军医大学学报，1992，13(3):165-168.
45 张发科.912对Hep-2癌细胞的抑制作用.第四军医大学学报，1987，8:224.
46 王克为，张绍章，李玉蓉.912蚯蚓提取物对小鼠移植瘤的抑制作用.第四军医大学学报，1986，7(2):85-88.
47 张建.“912”对荷瘤小鼠免疫功能的调节及抑制作用.中华微生物和免疫杂志，1991，11:281.
48 张绍章.蚯蚓提取物对小鼠脾脏抗形成细胞的影响.第四军医大学学报，1993，14(5):350-352.
, 百拇医药
49 智刚，朱敏生.912抗肿瘤作用初探.第四军医大学学报，1988，9(3):171-172.
50 林少琴，余萍，兰瑞芳.蚯蚓抗肿瘤成分的研究.海峡药学，2000，12(3):59-61.
51 Tsunoda S，et al.Anticancer Res，1997，17(5A):3349.
52 李俊娥.中国海洋药物，1997，18(3):119.
53 张润民，马琳，陈旭.博洛克治疗中老年脑梗塞34例.陕西中医，1995，16(9):392.
54 全民.国家级新药“蚓激酶”和“蚓激酶胶囊”研制成功.生物化学与生物物理进展，1994，21(1):85.
55 百奥蚓激酶胶囊治疗缺血性脑卒中在上海市的临床观察.生物化学与生物物理进展，1996，23(1):封三.
56 张祖询，曾小澜.蚯蚓提取物对多种瘤细胞的作用.山西医学院学报，1995，26(2):81-83.
作者单位:200052上海解放军第455医院
(收稿日期:2003-10-27)
(编辑小 川), http://www.100md.com(马福家)