生长抑素对脓毒症大鼠干预作用的研究
张义胜 赵国海 丁乐 梁玲 王明海
【关键词】脓毒症； 生长抑素； 肿瘤坏死因子-α； 白细胞介素- 10
本研究拟选取处于全身炎症反应阶段的脓毒症动物模型，动态观察不同时间点血中促炎和抗炎性细胞因子的变化、各阶段全身性炎症反应的特点，以及生长抑素的早期干预作用，为临床治疗脓毒症提供新的思路和方法。
1 材料与方法
1.1 动物：8~10周龄的SD大鼠,体质量180~220 g,雌雄各半,由南京医科大学动物中心提供。
1.2 材料：肿瘤坏死因子- α(TNF- α)和白细胞介素- 10(IL-10)放射免疫试剂盒购自解放军总医院科技开发中心放射免疫所，生长抑素(商名品善宁)由瑞士诺华公司提供。
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1.3 脓毒症大鼠模型制备方法：将SD大鼠实验前禁食24 h、不禁水,乌拉坦(10 ml/kg)腹腔麻醉后固定，铺无菌孔巾，沿腹正中线切口2 cm，暴露盲肠，丝线结扎盲肠根部，避免肠梗阻，用18号针穿通盲肠3次，避免伤及系膜血管，并留置一条宽2 mm、两头贯通盲肠的橡皮片以防针孔闭合，然后将盲肠放回腹腔，逐层缝合腹部切口。动物皮下注射生理盐水抗休克。
1.4 动物分组：56只SD大鼠随机分为3组：①对照组8只，麻醉后活杀；②脓毒症组24只，盲肠结扎穿孔(CLP)后，分别于术后2、8和16 h各处死8只；③生长抑素干预组24只，CLP后0.5、4和12 h皮下注射善宁，每次20 μg/kg，分别于术后2、8和16 h各处死8只。
1.5 检测指标及方法：各组动物处死前取静脉血4 ml，分离血清，- 20 ℃保存待测。TNF-α和IL- 10检测按试剂盒说明书的要求进行。已标记的TNF- α、IL- 10和待测样品中的TNF- α、IL- 10竞争性地与特异性抗体结合，加入免疫分离剂(PR)充分混匀，放在室温下20 min，4 ℃、3 500 r/min离心25 min，吸弃上清液，由自动γ计数器预先编制程序，直接给出有关参数、标准曲线及样品浓度。
, 百拇医药
1.6 统计学方法：数据采用均数±标准差(x[TX-]±s)表示，相同时段两组间用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 模型制备：制模后，模型组动物出现嗜睡、进食、饮水减少、竖毛；尸体解剖见腹腔有浑浊渗出液，空肠充气，盲肠肿胀、粘连,穿刺孔及留置皮片处广泛粘连，有黄白色脓液，肝、肾有充血。
2.2 TNF- α和IL- 10变化：脓毒症大鼠于术后2、8和16 h血中TNF- α和IL- 10水平均升高，后两个时间段升高更明显；经生长抑素干预后血中上述细胞因子有不同程度下降，8和16 h段下降更明显。见表1。
3 讨 论
脓毒症为感染所引起的全身炎症反应临床综合征，与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)以及多器官功能障碍综合征(MODS)的发生、发展关系密切，可向MODS转化，后者是其严重的结局，常导致较高的病死率。在感染或损伤的动物模型及临床研究中已经观察到，在全身炎症反应的发展过程中，随着炎症介质大量释放，引起全身炎症反应综合征(SIRS)的同时，机体也大量释放内源性抗炎介质，如IL- 10、白细胞介素- 1受体拮抗剂(IL- 1ra)，转化细胞生长因子- β(TGF- β)等。正常时两者保持平衡，内环境恒定；当促炎>抗炎，即炎症反应占优势时，表现为SIRS；当抗炎>促炎，即抗炎反应占优势时，表现为代偿性抗炎反应综合征(CARS)〔1〕。因此，两者均反映了机体炎症反应的失控状态，是导致ARDS，急性肾衰竭(ARF)甚至MODS的根本原因。
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本实验中采用CLP致严重腹膜炎复制脓毒症大鼠模型，动物表现出高代谢和SIRS等感染性休克的特征，与人类腹腔感染脓毒性休克的外科表现相似。我们选取促炎性细胞因子TNF- α和抗炎性细胞因子IL- 10作为观测指标，结果显示，脓毒症后8 hTNF- α和IL- 10含量均明显升高，说明腹腔感染过程中存在SIRS和CARS病理过程。
多种细胞因子和介质造成组织细胞的损伤在脓毒症致MODS发病机制中占重要地位，且这些介质间构成一个复杂的网络，相互作用。目前基础和临床应用单一炎症介质拮抗剂减轻脓毒症致MODS的严重程度和病死率，收效甚微。国外联合应用抗TNF- α抗体、可溶性TNF- α受体(sTNFR)和IL- 1ra等，也没有明确的临床价值，且联合用药可能产生不可预测的互斥和不良反应。因此，寻找对全身炎症反应具有多层次、正效应的新型药物，以达到早期、多环节切断细胞因子、介质间的“交叉对话”(crosstalking)，阻断SIRS和CARS的进展，将有助于腹腔感染患者的救治。
, 百拇医药
生长抑素对急性胰腺炎的良好治疗效果已被大量动物实验和临床研究所证实，其不仅能抑制胰腺活性，还具有调节免疫异常的作用〔2〕，能抑制多种炎症性细胞因子的活性，缓解胰腺炎的炎症过激反应，从而减少ARDS和MODS的发生率，提高存活率〔3，4〕。
本实验结果证实生长抑素可在早期同时降低脓毒症大鼠血浆TNF- α和IL-10的含量，具有双向调节作用〔5〕，调整促炎和抗炎双方力量，促使机体恢复内环境平衡，使机体的炎症和抗炎症反应处于一种低水平的平衡状态。但其免疫调节作用机制不明，有待于进一步研究。
参考文献
1 Bone R C.Immunologic dissonance:a continuing evolution in our understanding of systemic inflammatory response syndrome (SIRS) and the multiple organ dysfunction syndrome(MODS)〔J〕.Ann Intern Med，1996，125：680- 687.
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2 扬倩.生长抑素与免疫〔J〕.免疫学杂志，2003，19(1)：75- 77.
3 黄广建，张延龄.生长抑素在外科治疗中的应用〔J〕.中国实用外科杂志，2001，21(6)：375- 376.
4 王玉海.重症急性胰腺炎治疗进展〔J〕.河北医药，2001，23(12)：941.
5 陈晓理，黄兴兰，吴浩，等.急性胰腺炎血中抗炎性细胞因子的变化和生长抑素的调节作用〔J〕.中国危重病急救医学，2001，13(4)：223- 225.
作者单位：241001 皖南医学院弋矶山医院急诊外科(张义胜，赵国海，丁乐，王明海)；
芜湖市妇幼保健院(梁玲)
作者简介：张义胜(1965- )，男(汉族)，安徽省安庆市人，副主任医师。, http://www.100md.com
【关键词】脓毒症； 生长抑素； 肿瘤坏死因子-α； 白细胞介素- 10
本研究拟选取处于全身炎症反应阶段的脓毒症动物模型，动态观察不同时间点血中促炎和抗炎性细胞因子的变化、各阶段全身性炎症反应的特点，以及生长抑素的早期干预作用，为临床治疗脓毒症提供新的思路和方法。
1 材料与方法
1.1 动物：8~10周龄的SD大鼠,体质量180~220 g,雌雄各半,由南京医科大学动物中心提供。
1.2 材料：肿瘤坏死因子- α(TNF- α)和白细胞介素- 10(IL-10)放射免疫试剂盒购自解放军总医院科技开发中心放射免疫所，生长抑素(商名品善宁)由瑞士诺华公司提供。
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1.3 脓毒症大鼠模型制备方法：将SD大鼠实验前禁食24 h、不禁水,乌拉坦(10 ml/kg)腹腔麻醉后固定，铺无菌孔巾，沿腹正中线切口2 cm，暴露盲肠，丝线结扎盲肠根部，避免肠梗阻，用18号针穿通盲肠3次，避免伤及系膜血管，并留置一条宽2 mm、两头贯通盲肠的橡皮片以防针孔闭合，然后将盲肠放回腹腔，逐层缝合腹部切口。动物皮下注射生理盐水抗休克。
1.4 动物分组：56只SD大鼠随机分为3组：①对照组8只，麻醉后活杀；②脓毒症组24只，盲肠结扎穿孔(CLP)后，分别于术后2、8和16 h各处死8只；③生长抑素干预组24只，CLP后0.5、4和12 h皮下注射善宁，每次20 μg/kg，分别于术后2、8和16 h各处死8只。
1.5 检测指标及方法：各组动物处死前取静脉血4 ml，分离血清，- 20 ℃保存待测。TNF-α和IL- 10检测按试剂盒说明书的要求进行。已标记的TNF- α、IL- 10和待测样品中的TNF- α、IL- 10竞争性地与特异性抗体结合，加入免疫分离剂(PR)充分混匀，放在室温下20 min，4 ℃、3 500 r/min离心25 min，吸弃上清液，由自动γ计数器预先编制程序，直接给出有关参数、标准曲线及样品浓度。
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1.6 统计学方法：数据采用均数±标准差(x[TX-]±s)表示，相同时段两组间用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 模型制备：制模后，模型组动物出现嗜睡、进食、饮水减少、竖毛；尸体解剖见腹腔有浑浊渗出液，空肠充气，盲肠肿胀、粘连,穿刺孔及留置皮片处广泛粘连，有黄白色脓液，肝、肾有充血。
2.2 TNF- α和IL- 10变化：脓毒症大鼠于术后2、8和16 h血中TNF- α和IL- 10水平均升高，后两个时间段升高更明显；经生长抑素干预后血中上述细胞因子有不同程度下降，8和16 h段下降更明显。见表1。
3 讨 论
脓毒症为感染所引起的全身炎症反应临床综合征，与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)以及多器官功能障碍综合征(MODS)的发生、发展关系密切，可向MODS转化，后者是其严重的结局，常导致较高的病死率。在感染或损伤的动物模型及临床研究中已经观察到，在全身炎症反应的发展过程中，随着炎症介质大量释放，引起全身炎症反应综合征(SIRS)的同时，机体也大量释放内源性抗炎介质，如IL- 10、白细胞介素- 1受体拮抗剂(IL- 1ra)，转化细胞生长因子- β(TGF- β)等。正常时两者保持平衡，内环境恒定；当促炎>抗炎，即炎症反应占优势时，表现为SIRS；当抗炎>促炎，即抗炎反应占优势时，表现为代偿性抗炎反应综合征(CARS)〔1〕。因此，两者均反映了机体炎症反应的失控状态，是导致ARDS，急性肾衰竭(ARF)甚至MODS的根本原因。
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本实验中采用CLP致严重腹膜炎复制脓毒症大鼠模型，动物表现出高代谢和SIRS等感染性休克的特征，与人类腹腔感染脓毒性休克的外科表现相似。我们选取促炎性细胞因子TNF- α和抗炎性细胞因子IL- 10作为观测指标，结果显示，脓毒症后8 hTNF- α和IL- 10含量均明显升高，说明腹腔感染过程中存在SIRS和CARS病理过程。
多种细胞因子和介质造成组织细胞的损伤在脓毒症致MODS发病机制中占重要地位，且这些介质间构成一个复杂的网络，相互作用。目前基础和临床应用单一炎症介质拮抗剂减轻脓毒症致MODS的严重程度和病死率，收效甚微。国外联合应用抗TNF- α抗体、可溶性TNF- α受体(sTNFR)和IL- 1ra等，也没有明确的临床价值，且联合用药可能产生不可预测的互斥和不良反应。因此，寻找对全身炎症反应具有多层次、正效应的新型药物，以达到早期、多环节切断细胞因子、介质间的“交叉对话”(crosstalking)，阻断SIRS和CARS的进展，将有助于腹腔感染患者的救治。
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生长抑素对急性胰腺炎的良好治疗效果已被大量动物实验和临床研究所证实，其不仅能抑制胰腺活性，还具有调节免疫异常的作用〔2〕，能抑制多种炎症性细胞因子的活性，缓解胰腺炎的炎症过激反应，从而减少ARDS和MODS的发生率，提高存活率〔3，4〕。
本实验结果证实生长抑素可在早期同时降低脓毒症大鼠血浆TNF- α和IL-10的含量，具有双向调节作用〔5〕，调整促炎和抗炎双方力量，促使机体恢复内环境平衡，使机体的炎症和抗炎症反应处于一种低水平的平衡状态。但其免疫调节作用机制不明，有待于进一步研究。
参考文献
1 Bone R C.Immunologic dissonance:a continuing evolution in our understanding of systemic inflammatory response syndrome (SIRS) and the multiple organ dysfunction syndrome(MODS)〔J〕.Ann Intern Med，1996，125：680- 687.
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2 扬倩.生长抑素与免疫〔J〕.免疫学杂志，2003，19(1)：75- 77.
3 黄广建，张延龄.生长抑素在外科治疗中的应用〔J〕.中国实用外科杂志，2001，21(6)：375- 376.
4 王玉海.重症急性胰腺炎治疗进展〔J〕.河北医药，2001，23(12)：941.
5 陈晓理，黄兴兰，吴浩，等.急性胰腺炎血中抗炎性细胞因子的变化和生长抑素的调节作用〔J〕.中国危重病急救医学，2001，13(4)：223- 225.
作者单位：241001 皖南医学院弋矶山医院急诊外科(张义胜，赵国海，丁乐，王明海)；
芜湖市妇幼保健院(梁玲)
作者简介：张义胜(1965- )，男(汉族)，安徽省安庆市人，副主任医师。, http://www.100md.com