NAC、DTT对CoCl 2 诱导的PC12细胞凋亡的影响
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【摘要】 目的 检测抗氧化剂NAC、DTT在CoCl 2 诱导的PC12细胞凋亡中的作用。方法 结晶紫染色法检测PC12细胞存活率，分光光度法检测ROS的生成量。结果 在CoCl 2 诱导的PC12细胞凋亡中，细胞凋亡率和ROS水平明显上升;NAC、DTT可有效抑制CoCl 2 诱导的PC12细胞凋亡及ROS的生成。结论 ROS介导了CoCl 2 诱导的PC12细胞凋亡。
关键词 PC12细胞细胞凋亡
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)07-0589-02
Effect of NAC and DTT on CoCl 2 -induced apoptosis in PC12cells
Zeng Jiping，Kong Feng，Wang Fuwu，et al.
, http://www.100md.com
Institute of Biochemistry and Molecular Biology，Medical College，Shandong University，Jinan250012.
【Abstract】 Objective To identify the effect of NAC and DTT on CoCl 2 -induced apoptosis in PC12cells.Methods to inspect the survival percent of PC12cells by crystal violet staining assay，and to examine the production of ROS by spectrophotometry.Results In CoCl 2 -induced apoptosis of RC12cells，the percent of apoptosis and the level of FOS production arises distinctly.NAC and DTT can inhibit the apoptosis induced by CoCl 2 and the production of ROS in PC12cells.Conclusion ROS is mediated in CoCl 2 -induced apoptosis in PC12cells.
, 百拇医药
Key words PC12cell apoptosis
PC12细胞是大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞系，近年来被广泛用于神经细胞凋亡方面的研究 [1] 。已有研究证明氯化钴(CoCl 2 )诱导的PC12细胞可以模拟缺氧条件下神经细胞的凋亡 [2] ，因此在本实验中利用此模型观察抗氧化剂NAC、DTT对其的影响。
1 材料与方法
1.1 材料 大鼠嗜铬瘤细胞系PC12细胞购自上海生化细胞所。DMEM、胎牛血清、马血清购自Gibco BRL。CoCl 2 、多聚赖氨酸(PDL)、NAC和DTT购自Sigma Chemical Co.，其它试剂均为国产分析纯。ROS活性测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.2 方法 (1)PC12细胞的培养:培养基为含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM培养基。 (2)PC12细胞存活率的检测:采用结晶紫染色法检测。(3)ROS生成量的检测:参照试剂盒说明进行。
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1.3 数据处理 结果均以均数±标准差来表示，并用t检验对实验数据进行统计学分析。
2 结果
(1)NAC、DTT可抑制CoCl 2 诱导的PC12细胞凋亡:500μMCoCl 2 诱导PC12细胞24h后，PC12细胞的存活率明显下降(P<0.001)。10mM NAC与2mM DTT可有效抑制CoCl 2 造成的细胞凋亡(P<0.001)。(2)NAC、DTT可抑制ROS的生成500 M CoCl 2 诱导PC12小细胞24h后，ROS的生成量明显上升(P<0.01)。10mM NAC与2mM DTT可有效抑制CoCl 2 诱导的PC12细胞中ROS的生成量(P<0.001，见表1)。
表1 PC12细胞中ROS的生成量与CoCl 2 诱导浓度的关系 (略)
, 百拇医药
3讨论
神经细胞在缺氧条件下会造成许多严重的疾病，如帕金森氏症等 [3] 。已有研究表明，CoCl 2 能在某些方面模拟缺氧反应，包括生成活性氧和影响某些基因的表达等。PC12 细胞是大鼠嗜铬瘤细胞系，作为体外模型被广泛地应用于神经细胞凋亡等方面的研究。因此研究神经细胞缺氧反应时，CoCl 2 诱导的PC12细胞是十分理想的模型。
ROS已被证明，在多种因素诱导的细胞凋亡中起着重要的作用，作为一种重要的信号传导因子，在传递凋亡信号过程中起着重要的作用 [4] 。已有报道证明，在H 2 O 2 诱导的PC12细胞中ROS的水平有明显的上升 [5] 。在CoCl 2 诱导的PC12细胞中，ROS生成量显著增加，并与CoCl 2 诱导的浓度和时间呈正相关关系。同时，抗氧化剂NAC和DTT可有效地抑制CoCl 2 诱导的PC12细胞的凋亡率和ROS的生成。以上结果表明，在CoCl 2 诱导的PC12细胞凋亡中，ROS起着重要的作用，介导了细胞的凋亡。
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参考文献
1 Guillemin K，Krasnow MA.The hypoxic response:huffing and HZFing.Cell，1997，89:9-12.
2 Rukenstein A.Multiple agents rescue PC12cells from serum-free cell death by translation-and transcription-independent machanisms.JNeurosci，1991，11:2552-2563.
3 Ssenmeyer-Pourie C.CPP32/caspase-3-like proteases in hypoxia-induced apoptosis in developing brain neurons.Brain Res Mol Brain Res，1999，71:255-237.
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4 Migonotte B.Mitochondria and apoptosis.Eur J Biochem，1998，252:1-15.
5 Satoh T.Free radical-independent protection by NGF and Bcl-2of PC12cells from H 2 O 2 -triggered apoptosis.J Biochem，1996，120:540-546.
作者单位:1 250012山东大学医学院生化与分子生物学研究所
2 250100山东轻工业学院轻化与环境工程系
(编辑 海涛), 百拇医药
关键词 PC12细胞细胞凋亡
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)07-0589-02
Effect of NAC and DTT on CoCl 2 -induced apoptosis in PC12cells
Zeng Jiping，Kong Feng，Wang Fuwu，et al.
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Institute of Biochemistry and Molecular Biology，Medical College，Shandong University，Jinan250012.
【Abstract】 Objective To identify the effect of NAC and DTT on CoCl 2 -induced apoptosis in PC12cells.Methods to inspect the survival percent of PC12cells by crystal violet staining assay，and to examine the production of ROS by spectrophotometry.Results In CoCl 2 -induced apoptosis of RC12cells，the percent of apoptosis and the level of FOS production arises distinctly.NAC and DTT can inhibit the apoptosis induced by CoCl 2 and the production of ROS in PC12cells.Conclusion ROS is mediated in CoCl 2 -induced apoptosis in PC12cells.
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Key words PC12cell apoptosis
PC12细胞是大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞系，近年来被广泛用于神经细胞凋亡方面的研究 [1] 。已有研究证明氯化钴(CoCl 2 )诱导的PC12细胞可以模拟缺氧条件下神经细胞的凋亡 [2] ，因此在本实验中利用此模型观察抗氧化剂NAC、DTT对其的影响。
1 材料与方法
1.1 材料 大鼠嗜铬瘤细胞系PC12细胞购自上海生化细胞所。DMEM、胎牛血清、马血清购自Gibco BRL。CoCl 2 、多聚赖氨酸(PDL)、NAC和DTT购自Sigma Chemical Co.，其它试剂均为国产分析纯。ROS活性测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.2 方法 (1)PC12细胞的培养:培养基为含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM培养基。 (2)PC12细胞存活率的检测:采用结晶紫染色法检测。(3)ROS生成量的检测:参照试剂盒说明进行。
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1.3 数据处理 结果均以均数±标准差来表示，并用t检验对实验数据进行统计学分析。
2 结果
(1)NAC、DTT可抑制CoCl 2 诱导的PC12细胞凋亡:500μMCoCl 2 诱导PC12细胞24h后，PC12细胞的存活率明显下降(P<0.001)。10mM NAC与2mM DTT可有效抑制CoCl 2 造成的细胞凋亡(P<0.001)。(2)NAC、DTT可抑制ROS的生成500 M CoCl 2 诱导PC12小细胞24h后，ROS的生成量明显上升(P<0.01)。10mM NAC与2mM DTT可有效抑制CoCl 2 诱导的PC12细胞中ROS的生成量(P<0.001，见表1)。
表1 PC12细胞中ROS的生成量与CoCl 2 诱导浓度的关系 (略)
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3讨论
神经细胞在缺氧条件下会造成许多严重的疾病，如帕金森氏症等 [3] 。已有研究表明，CoCl 2 能在某些方面模拟缺氧反应，包括生成活性氧和影响某些基因的表达等。PC12 细胞是大鼠嗜铬瘤细胞系，作为体外模型被广泛地应用于神经细胞凋亡等方面的研究。因此研究神经细胞缺氧反应时，CoCl 2 诱导的PC12细胞是十分理想的模型。
ROS已被证明，在多种因素诱导的细胞凋亡中起着重要的作用，作为一种重要的信号传导因子，在传递凋亡信号过程中起着重要的作用 [4] 。已有报道证明，在H 2 O 2 诱导的PC12细胞中ROS的水平有明显的上升 [5] 。在CoCl 2 诱导的PC12细胞中，ROS生成量显著增加，并与CoCl 2 诱导的浓度和时间呈正相关关系。同时，抗氧化剂NAC和DTT可有效地抑制CoCl 2 诱导的PC12细胞的凋亡率和ROS的生成。以上结果表明，在CoCl 2 诱导的PC12细胞凋亡中，ROS起着重要的作用，介导了细胞的凋亡。
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参考文献
1 Guillemin K，Krasnow MA.The hypoxic response:huffing and HZFing.Cell，1997，89:9-12.
2 Rukenstein A.Multiple agents rescue PC12cells from serum-free cell death by translation-and transcription-independent machanisms.JNeurosci，1991，11:2552-2563.
3 Ssenmeyer-Pourie C.CPP32/caspase-3-like proteases in hypoxia-induced apoptosis in developing brain neurons.Brain Res Mol Brain Res，1999，71:255-237.
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4 Migonotte B.Mitochondria and apoptosis.Eur J Biochem，1998，252:1-15.
5 Satoh T.Free radical-independent protection by NGF and Bcl-2of PC12cells from H 2 O 2 -triggered apoptosis.J Biochem，1996，120:540-546.
作者单位:1 250012山东大学医学院生化与分子生物学研究所
2 250100山东轻工业学院轻化与环境工程系
(编辑 海涛), 百拇医药