刺五加皂甙对白血病细胞DNA合成抑制作用研究
【文献标识码】 B 【文章编号】 1726-7587(2004)05-0734-02
刺五加作为药物应用已有悠久历史，在中药材中被解释为具有补肝肾、强筋骨作用的抗风湿制剂，多年来国内外对刺五加的药理作用进行了大量的研究，证明是很有前途的“适应源”性药物，有扶正固本，增强免疫，抗炎及抗心律失常的作用，但对肿瘤细胞的生物活性尚未见报道，现将实验结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 刺五加皂甙，由白求恩医科大学基础医学部化学教研室提供，为黄褐色粉末，含11种皂甙的混合物，平均分子量约1000左右，可溶于水、乙醇等极性溶液。
1.2 细胞继代培养法 将1×10 5 /ml浓度的白血病细胞株U-937(由日本东京大学提供)分别在刺五加皂甙0mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml非刺激与刺激下用RP1M1640完全培养液置于5%CO 2 ，37℃饱和温度的孵箱中培养，每24h计数1次。
, 百拇医药
1.3 体外细胞集落法 按部分改变朴氏细胞株的方法进行。把备好的1×10 5 /ml的细胞株分别加入到含有20%胎中血清1640培养液、0.8%甲基纤维麦(由日本住友制药会社提供)和含刺五加皂甙分别为0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml培养液中混匀，总体积达2ml，浇于24穴培养皿内常规孵育5～7天后，把≥20个的细胞群定为一个集落，计数，同时设无药对照组。
1.4 噻唑蓝法 将培养的白血病细胞株计数，配成1×10 6 /ml，加入96孔培养板内，将不同浓度的药物分别加入各孔并设三个复孔同时设对照孔，CO 2 孵箱培养3天，加入噻唑蓝液(10μl/孔)振荡混匀，继续培养6h，加入酸化异丙醇(100μl/ml)充分缓慢振荡，使黑色结晶(甲)溶解，测每孔OD值(波长540nm)，计算其抑制率。
2 结果
2.1 增殖状态中的白血病细胞株对刺五加皂甙的感受性 如表1所示，在刺五加皂甙不同浓度刺激下各种细胞株的增殖数目明显低于非刺激下的对照组，显示增殖初期在刺五加皂甙的作用下细胞总数呈明显下降后缓慢上升趋势。
, 百拇医药
表1 U-937在刺五加皂甙作用下细胞数
2.2 刺五加皂甙对具有自我复制作用的白血病细胞的抑制作用 如表2所示，随着刺五加皂甙浓度的增加细胞集落数减少，提示刺五加皂甙抑制肿瘤细胞增殖周期中的某个环节而抑制肿瘤细胞增殖。
表2 U-937在刺激与非刺激下集落形成结果药物浓度
2.3 不同浓度的刺五加皂甙对肿瘤细胞的作用 刺五加皂甙对肿瘤细胞有显著的抑制作用，其浓度与抑制剂呈正相关。浓度为0.1mg/ml，抑制率为14.8%，0.5mg/ml为21.4%，1mg/ml为59.8%，提示刺五加皂甙对肿瘤细胞有明显抑制作用。
3 讨论
目前，刺五加皂甙在临床上主要被作为免疫增强剂来应用，我们用体外实验的方法证实其为人类白血病细胞的 直接抑制作用，结果表明继代培养法增殖状态中的肿瘤细胞总数明显减少，具有自我复制作用的肿瘤细胞在刺五加皂甙刺激下集落形成受抑制，噻唑蓝法实验结果提示DNA合成受阻。刺五加皂甙这种抗癌作用可能是比较复杂和多方面的，提示这种直接作用的协调与综合效应在体内起较强的抗癌作用，此作用的机制及抗癌效应在细胞的力学中的作用有待进一步研究探讨。
作者单位:130062吉林省长春市第二医院
130012吉林省人民医院
(收稿日期:2003-12-06)
(编辑李 木), 百拇医药
刺五加作为药物应用已有悠久历史，在中药材中被解释为具有补肝肾、强筋骨作用的抗风湿制剂，多年来国内外对刺五加的药理作用进行了大量的研究，证明是很有前途的“适应源”性药物，有扶正固本，增强免疫，抗炎及抗心律失常的作用，但对肿瘤细胞的生物活性尚未见报道，现将实验结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 刺五加皂甙，由白求恩医科大学基础医学部化学教研室提供，为黄褐色粉末，含11种皂甙的混合物，平均分子量约1000左右，可溶于水、乙醇等极性溶液。
1.2 细胞继代培养法 将1×10 5 /ml浓度的白血病细胞株U-937(由日本东京大学提供)分别在刺五加皂甙0mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml非刺激与刺激下用RP1M1640完全培养液置于5%CO 2 ，37℃饱和温度的孵箱中培养，每24h计数1次。
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1.3 体外细胞集落法 按部分改变朴氏细胞株的方法进行。把备好的1×10 5 /ml的细胞株分别加入到含有20%胎中血清1640培养液、0.8%甲基纤维麦(由日本住友制药会社提供)和含刺五加皂甙分别为0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml培养液中混匀，总体积达2ml，浇于24穴培养皿内常规孵育5～7天后，把≥20个的细胞群定为一个集落，计数，同时设无药对照组。
1.4 噻唑蓝法 将培养的白血病细胞株计数，配成1×10 6 /ml，加入96孔培养板内，将不同浓度的药物分别加入各孔并设三个复孔同时设对照孔，CO 2 孵箱培养3天，加入噻唑蓝液(10μl/孔)振荡混匀，继续培养6h，加入酸化异丙醇(100μl/ml)充分缓慢振荡，使黑色结晶(甲)溶解，测每孔OD值(波长540nm)，计算其抑制率。
2 结果
2.1 增殖状态中的白血病细胞株对刺五加皂甙的感受性 如表1所示，在刺五加皂甙不同浓度刺激下各种细胞株的增殖数目明显低于非刺激下的对照组，显示增殖初期在刺五加皂甙的作用下细胞总数呈明显下降后缓慢上升趋势。
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表1 U-937在刺五加皂甙作用下细胞数
2.2 刺五加皂甙对具有自我复制作用的白血病细胞的抑制作用 如表2所示，随着刺五加皂甙浓度的增加细胞集落数减少，提示刺五加皂甙抑制肿瘤细胞增殖周期中的某个环节而抑制肿瘤细胞增殖。
表2 U-937在刺激与非刺激下集落形成结果药物浓度
2.3 不同浓度的刺五加皂甙对肿瘤细胞的作用 刺五加皂甙对肿瘤细胞有显著的抑制作用，其浓度与抑制剂呈正相关。浓度为0.1mg/ml，抑制率为14.8%，0.5mg/ml为21.4%，1mg/ml为59.8%，提示刺五加皂甙对肿瘤细胞有明显抑制作用。
3 讨论
目前，刺五加皂甙在临床上主要被作为免疫增强剂来应用，我们用体外实验的方法证实其为人类白血病细胞的 直接抑制作用，结果表明继代培养法增殖状态中的肿瘤细胞总数明显减少，具有自我复制作用的肿瘤细胞在刺五加皂甙刺激下集落形成受抑制，噻唑蓝法实验结果提示DNA合成受阻。刺五加皂甙这种抗癌作用可能是比较复杂和多方面的，提示这种直接作用的协调与综合效应在体内起较强的抗癌作用，此作用的机制及抗癌效应在细胞的力学中的作用有待进一步研究探讨。
作者单位:130062吉林省长春市第二医院
130012吉林省人民医院
(收稿日期:2003-12-06)
(编辑李 木), 百拇医药