雌雄大鼠心脏雌激素受体表达的比较
【摘要】 目的 比较雄性和雌性大鼠心脏中雌激素受体的表达情况并探讨其与冠心病发病率的关系与意义。方法 用放射配体结合分析法检测雌性和雄性大鼠(各10只)心脏中雌激素受体的含量。结果 雌性大鼠心脏雌激素受体为(2.21±0.13)fmol·mg -1 ·pro -1，雄性大鼠心脏雌激素受体为(2.03±0.11)fmol·mg -1 ·pro -1 ，两者比较差异无显著性(P>0.05)。结论 雌、雄大鼠心脏中雌激素受体含量差异无显著性，两性冠心病发病率存在差异的原因可能与两性存在不同的雄性激素受体后，信号转导途径有关。
关键词 放射配体结合分析法 雌激素受体 心脏
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)10-0885-02
The comparison study of the cardiac estrogen receptor expression of male and female rat
, http://www.100md.com
Shi Mingjuan，Wang Longsheng，Zhao Xuan
Medical College，Xian Jiaotong University，Shanxi710061.
【Abstract】 Objective To compare cardiac estrogen receptor expression of male and female rat，and explore the relationship among the incidence of coronary artery disease and its significance.Methods Using the radioligand integration method to detect the amount of CER of bisexual rat(10each group).Results The amount of CER in infeˉmale rat is(2.21±0.13)fmol·mg -1 ·pro -1 ，in male ratheart is(2.03±0.11)fmol·mg -1 ·pro -1 ，there were no obˉvious difference(P>0.05).Conclusion There were no significant differences of CER amount between male and feˉmale rat.The bisexual different incidence of the coronary artery disease，probable the presence different androgen reˉceptor on bisexual animal，the signal route were transconducted.
, 百拇医药
Key words radioligand integration analysis estrogen receptor heart
流行病学研究表明，绝经前女性冠心病的发病率显著低于同龄男性 [1～3] ，绝经后女性的冠心病发病率迅速上升，接近甚至超过男性;绝经后接受雌激素替代治疗的女性心血管疾病的死亡率较不接受雌激素替代治疗低30%～50%，而雌激素制剂用于男性却不能产生该作用。目前，雌激素对女性心血管保护作用已为大量的临床基础研究所证实，而雌激素对男性心血管无保护作用，原因尚不清楚。本研究比较了雌性和雄性成年大鼠心脏中雌激素受体的含量，从雌激素受体角度分析和探讨了造成上述这种情况的原因。
1 材料与方法
1.1 试剂与设备 (2，4，6，7) 3 H—雌二醇(放射比活性60Ci/mmol为NEN产品);17β—雌二醇和葡聚糖T 70 为Sigma产品;低温超速离心机;BeckmanLS～6500液体闪烁技术仪;胎牛血清及无酚红的1640培养基为Sigma产品。
, http://www.100md.com
1.2 取材 取雌性和雄性成年大鼠(月龄6±1个月)各10只，断头处死后，摘取心脏，用生理盐水洗净血液后立即置于液氮中，置-40℃低温冰箱中保存，1个月内检测ER。
1.3 放射配体结合技术定量检测 采用单点法测ER，每组设3～4个重复管。心脏中ER的检测:液氮环境下将心脏置于磁乳钵研成粉末，加入2倍体积的TEGM缓冲液，用超声破碎细胞膜后高速、初速离心8000r/min离心1h，上清液含待测胞浆液，用考马斯亮蓝测定蛋白质浓度，总结合管(TB)、非特异结合管(NSB)均加入30nmol/L 3 H-E 2 10μl，NSB再加入6μmol/L17β-雌二醇10μl，TB用D-Hank’s液补至等体积。然后加入100μl胞浆液，4℃保温16h，再加入200μl葡聚糖包被的活性炭液(含质量分数为0.5%的葡聚糖T 70 )，4℃振荡下(10r/min)，保温30min，1500r/min离心15min，上清液中加入Geady Safe TM (适用于水溶性与非水溶性样本)闪烁液测放射性计数，总结合数减非特异结合数为特异结合数，上述过程严格保持反应体系温度0～4℃。
, 百拇医药
1.4 统计学方法 数据用ˉx±s表示，应用SPSS软件包进行方差分析。
2 结果
见表1。可见，雌性大鼠心脏中雌激素受体含量为(2.21±0.13)fmol·mg -1 ·pro -1 ，雄性大鼠心脏中雌激素受体含量为(2.03±0.11)fmol·mg -1 ·pro -1 ，雌、雄两性成年大鼠心脏中雌激素受体数目差异无显著性(P>0.05)。
表1 雄、雌两性成年大鼠心脏中雌激素受体数目
注:两组相比较，P>0.05
3 讨论
雌激素与冠心病的关系争论了半个多世纪。直到80年代，大规模的临床观察和流行病学研究相继证实了雌激素浓度变化与女性冠心病发生率的关系，雌激素对女性的心血管的保护作用才重新引起重视，关于其机制的研究成为十年来该领域的热点并作为防治女性冠心病的突破口。本试验用放射配体结合分析法测定大鼠心壁雌激素受体，结果显示，无论是雌性大鼠，还是雄性大鼠，其心脏组织均存在ER并且无性别差异，这说明心血管疾病发病中出现的性别差异，并非是因为雄性不存在雌激素受体，或者雄鼠的雌激素受体数量远远低于雌鼠，而很可能与雄性和雌性的ER活性不同或活性雄性低于雌性有关。在正常生理条件下，由于受各种生理因素及基因表达的限制，雄性ER的功能可能不能完全发挥，以致出现性别差异。曾经有学者运用短暂转染技术证实 [4，5] ，心肌细胞给予10 -8 M17β-雌二醇处理24h后，受体活性的改变存在明显的性别差异(雌性受体活性增加49.1±1.10倍，而雄性仅为13±1.66倍)，而且给予雌激素后，用Western blot可以检测到Cx43的蛋白表达增加也同样存在差异，雌性明显高于雄性(雌性增加24.8倍，雄性仅为6.2倍)，这说明培养心肌细胞的雌激素受体是有功能的，且受体的活性存在性别差异。还有学者在对主动脉壁ER的研究发现，注射17β-雌二醇5天(10μg/天) [6] ，正常雄性大鼠PR基本没有改变，而雄性去势大鼠PR的表达明显增加2倍，并且与雌性去势大鼠PR表达增强的幅度相近，认为可能是正常雄性大鼠主动脉壁虽 然存在受体，但受体功能可能受抑制。此外，有学者用放射自显影技术对心血管的雄激素受体进行研究，发现心脏及心血管壁也存在雄激素受体，同样也没有性别差异，这与我们的试验有相近之处。尽管大量的临床及动物实验资料已观察到心血管疾病发病的性别差异，雌激素对心血管的各种保护作用以及改善血脂、血糖代谢等间接作用，但其具体机制仍然不详。
, 百拇医药
参考文献
1 Mcgill JH，Starn MP.Sex and atherosclerosis.Atheroscle Rev，1979，4:157.
2 Marcus R，Krause L，Weder AB，et al.Sex-specific determinants of inˉcreased left ventricular mass in the Tecumseh Blood Pressure Study.Cirˉculation，1994，90，928.
3 Grardin JM，Wagenknecht LE，Flack J，et al.Relationship of cardiovasˉcular risk factors to echocardiographic left ventricular mass in healthy young blackand white adult men and woman.Circulation，1995，92:380.
, http://www.100md.com
4 Grohe C，Kahlert S，Lobbert K，et al.Cardiac myocytes and fibroblasts contain functional estrogen receptors.FEBS Letters，1997，416:107.
5 Stumpf WE，Sar M，Aumuller G.The heart:a target organ for estradiol.Science，1997，196，319.
6 Mcgill JH，Sheridan P.Nuclear uptake of sex steroid hormones in the cardiovascular system of the baboon.Cir Res，1981，48:234.
作者单位:710061陕西西安交通大学医学院
710061陕西医学高等专科学校
(编辑秋 实), 百拇医药
关键词 放射配体结合分析法 雌激素受体 心脏
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)10-0885-02
The comparison study of the cardiac estrogen receptor expression of male and female rat
, http://www.100md.com
Shi Mingjuan，Wang Longsheng，Zhao Xuan
Medical College，Xian Jiaotong University，Shanxi710061.
【Abstract】 Objective To compare cardiac estrogen receptor expression of male and female rat，and explore the relationship among the incidence of coronary artery disease and its significance.Methods Using the radioligand integration method to detect the amount of CER of bisexual rat(10each group).Results The amount of CER in infeˉmale rat is(2.21±0.13)fmol·mg -1 ·pro -1 ，in male ratheart is(2.03±0.11)fmol·mg -1 ·pro -1 ，there were no obˉvious difference(P>0.05).Conclusion There were no significant differences of CER amount between male and feˉmale rat.The bisexual different incidence of the coronary artery disease，probable the presence different androgen reˉceptor on bisexual animal，the signal route were transconducted.
, 百拇医药
Key words radioligand integration analysis estrogen receptor heart
流行病学研究表明，绝经前女性冠心病的发病率显著低于同龄男性 [1～3] ，绝经后女性的冠心病发病率迅速上升，接近甚至超过男性;绝经后接受雌激素替代治疗的女性心血管疾病的死亡率较不接受雌激素替代治疗低30%～50%，而雌激素制剂用于男性却不能产生该作用。目前，雌激素对女性心血管保护作用已为大量的临床基础研究所证实，而雌激素对男性心血管无保护作用，原因尚不清楚。本研究比较了雌性和雄性成年大鼠心脏中雌激素受体的含量，从雌激素受体角度分析和探讨了造成上述这种情况的原因。
1 材料与方法
1.1 试剂与设备 (2，4，6，7) 3 H—雌二醇(放射比活性60Ci/mmol为NEN产品);17β—雌二醇和葡聚糖T 70 为Sigma产品;低温超速离心机;BeckmanLS～6500液体闪烁技术仪;胎牛血清及无酚红的1640培养基为Sigma产品。
, http://www.100md.com
1.2 取材 取雌性和雄性成年大鼠(月龄6±1个月)各10只，断头处死后，摘取心脏，用生理盐水洗净血液后立即置于液氮中，置-40℃低温冰箱中保存，1个月内检测ER。
1.3 放射配体结合技术定量检测 采用单点法测ER，每组设3～4个重复管。心脏中ER的检测:液氮环境下将心脏置于磁乳钵研成粉末，加入2倍体积的TEGM缓冲液，用超声破碎细胞膜后高速、初速离心8000r/min离心1h，上清液含待测胞浆液，用考马斯亮蓝测定蛋白质浓度，总结合管(TB)、非特异结合管(NSB)均加入30nmol/L 3 H-E 2 10μl，NSB再加入6μmol/L17β-雌二醇10μl，TB用D-Hank’s液补至等体积。然后加入100μl胞浆液，4℃保温16h，再加入200μl葡聚糖包被的活性炭液(含质量分数为0.5%的葡聚糖T 70 )，4℃振荡下(10r/min)，保温30min，1500r/min离心15min，上清液中加入Geady Safe TM (适用于水溶性与非水溶性样本)闪烁液测放射性计数，总结合数减非特异结合数为特异结合数，上述过程严格保持反应体系温度0～4℃。
, 百拇医药
1.4 统计学方法 数据用ˉx±s表示，应用SPSS软件包进行方差分析。
2 结果
见表1。可见，雌性大鼠心脏中雌激素受体含量为(2.21±0.13)fmol·mg -1 ·pro -1 ，雄性大鼠心脏中雌激素受体含量为(2.03±0.11)fmol·mg -1 ·pro -1 ，雌、雄两性成年大鼠心脏中雌激素受体数目差异无显著性(P>0.05)。
表1 雄、雌两性成年大鼠心脏中雌激素受体数目
注:两组相比较，P>0.05
3 讨论
雌激素与冠心病的关系争论了半个多世纪。直到80年代，大规模的临床观察和流行病学研究相继证实了雌激素浓度变化与女性冠心病发生率的关系，雌激素对女性的心血管的保护作用才重新引起重视，关于其机制的研究成为十年来该领域的热点并作为防治女性冠心病的突破口。本试验用放射配体结合分析法测定大鼠心壁雌激素受体，结果显示，无论是雌性大鼠，还是雄性大鼠，其心脏组织均存在ER并且无性别差异，这说明心血管疾病发病中出现的性别差异，并非是因为雄性不存在雌激素受体，或者雄鼠的雌激素受体数量远远低于雌鼠，而很可能与雄性和雌性的ER活性不同或活性雄性低于雌性有关。在正常生理条件下，由于受各种生理因素及基因表达的限制，雄性ER的功能可能不能完全发挥，以致出现性别差异。曾经有学者运用短暂转染技术证实 [4，5] ，心肌细胞给予10 -8 M17β-雌二醇处理24h后，受体活性的改变存在明显的性别差异(雌性受体活性增加49.1±1.10倍，而雄性仅为13±1.66倍)，而且给予雌激素后，用Western blot可以检测到Cx43的蛋白表达增加也同样存在差异，雌性明显高于雄性(雌性增加24.8倍，雄性仅为6.2倍)，这说明培养心肌细胞的雌激素受体是有功能的，且受体的活性存在性别差异。还有学者在对主动脉壁ER的研究发现，注射17β-雌二醇5天(10μg/天) [6] ，正常雄性大鼠PR基本没有改变，而雄性去势大鼠PR的表达明显增加2倍，并且与雌性去势大鼠PR表达增强的幅度相近，认为可能是正常雄性大鼠主动脉壁虽 然存在受体，但受体功能可能受抑制。此外，有学者用放射自显影技术对心血管的雄激素受体进行研究，发现心脏及心血管壁也存在雄激素受体，同样也没有性别差异，这与我们的试验有相近之处。尽管大量的临床及动物实验资料已观察到心血管疾病发病的性别差异，雌激素对心血管的各种保护作用以及改善血脂、血糖代谢等间接作用，但其具体机制仍然不详。
, 百拇医药
参考文献
1 Mcgill JH，Starn MP.Sex and atherosclerosis.Atheroscle Rev，1979，4:157.
2 Marcus R，Krause L，Weder AB，et al.Sex-specific determinants of inˉcreased left ventricular mass in the Tecumseh Blood Pressure Study.Cirˉculation，1994，90，928.
3 Grardin JM，Wagenknecht LE，Flack J，et al.Relationship of cardiovasˉcular risk factors to echocardiographic left ventricular mass in healthy young blackand white adult men and woman.Circulation，1995，92:380.
, http://www.100md.com
4 Grohe C，Kahlert S，Lobbert K，et al.Cardiac myocytes and fibroblasts contain functional estrogen receptors.FEBS Letters，1997，416:107.
5 Stumpf WE，Sar M，Aumuller G.The heart:a target organ for estradiol.Science，1997，196，319.
6 Mcgill JH，Sheridan P.Nuclear uptake of sex steroid hormones in the cardiovascular system of the baboon.Cir Res，1981，48:234.
作者单位:710061陕西西安交通大学医学院
710061陕西医学高等专科学校
(编辑秋 实), 百拇医药