胎膜促肾上腺素皮质激素释放激素受体表达与社会因素剖宫产的相关性
【摘要】 目的 探讨胎膜促肾上腺素皮质激素释放激素受体(CRHR1)mRNA表达与社会因素剖宫产的相关性。方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测10例顺产、20例社会因素剖宫产产妇的胎膜上CRHR1mRNA的表达，分析其表达差异与社会因素剖宫产的相关性。结果 CRHR1mRNA在顺产产妇的胎膜中的表达显著高于社会因素剖宫产产妇的胎膜(P<0.05)。结论 社会因素剖宫产产妇胎膜中CRHR1mRNA表达较顺产者表达下调，提示CRHR1基因表达差异与社会因素剖宫产可能相关。
关键词 分娩方式 促肾上腺皮质激素释放激素受体 基因 聚合酶链反应 胎膜
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)11-0970-03
Expression of corticotropin-releasing hormone receptor subtype1mRNA in
fetal membrane and the correlation to term elective cesarean section
on psychological factors Sui Hongying，
Zhu Fufan，Tao Guangshi，et al.
Department of Obstetrics and Gynecology，The Second Affiliated Hospital of Xiang Ya Medical College of Central South University，Changsha410011.
【Abstract】 Objective To investigate the expression of corticotropin-releasing hormone receptor subtype1(CRHR1)mRNA in fetal membrane whether related to the term elective cesarean section on psychological factors.Methods We detected CRHR1mRNA in fetal membrane of10vaginal delivery，20elective cesarean section on psyˉchological factors in late pregnant women by semi-quantity reverse transcrip
tion-polymerase chain reaction(RT-PCR).Analyzed the relativity of CRHR1mRNA different expression and term elective cesarean section on psychologiˉcal factors .Results CRHR1mRNA expression in fetal membrane of vaginal delivery was higher than that of term elective cesarean section on psychological factors in late pregnant women(P<0.05).Conclusion Expression of CRHR1mRNA in fetal membrane of late pregnant women is evidently decreased in term elective cesarean section on psychological factors.It is suggested that CRHR1expression may relate to term elective cesarean section on psychologiˉcal factors.
Key words delivery mode corticotropin-releasing hormone receptor genes polymerase chain reaction fetal membrane
社会因素剖宫产(elective cesarean section on psychological factors [1] )指无任何剖宫产指征，严重受社会心理因素影响而选择手术的剖宫产 [2] ，是临床导致剖宫产率升高的十分重要的原因 [3] 。单纯用产妇主观的因素来解释此种现象显然是不全面的，因此有必要从病理生理学角度探索其相关原因。哺乳动物对环境应激产生生命自主节律、免疫学、行为学方面的应答时，促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)扮演重要角色。研究表明CRH是参与分娩生理的重要因子，在产程进展过程中可能起着重要的生理作用，其生理作用是通过其受体(CRHR1，CRHR2)介导的 [4] 。而且CRHR1在介导CRH对人类子宫肌层在分娩过程中的生理作用较CRH本身浓度及其他受体更重要。在妊娠晚期之后，除子宫下段肌层中CRHR1受体的表达随不同产程变化外，胎盘、胎膜和子宫体肌层中CRHR1受体的表达却不随产程发生变化 [5] 。有研究表明胎盘和子宫肌层中CRHR1受体的表达与产程进展及分娩方式有相关性，为了探讨产妇胎膜中CRHR1mRNA表达与社会因素剖宫产有无相关性，本研究用RT-PCR检测了顺产、社会因素剖宫产的产妇胎膜上CRHR1mRNA表达的差异，初步探讨了胎膜CRHR1mRNA表达与社会因素剖宫产的相关性。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2003年4月～2003年7月在本院产科分娩的孕妇30例，年龄23～30岁，平均26岁。均为初产妇，无内科疾患合并症，无病理妊娠。其中顺产10例，社会因素剖宫产20例(无任何剖宫产指征而要求剖宫产者)，两组年龄之间差异无显著性(P>0.05)。全部标本均在分娩时收集，产妇的胎盘离体后，取绒毛膜、羊膜均完整的胎膜在无菌条件下用灭菌剪刀剪成1.5cm见方的小块，15min内置于液氮中速冻存，备用。
1.2 试剂 总RNA抽提试剂盒系上海Sangon生物工程有限公司;AMV逆转录酶、oligo(dT) 15 \dNTPs、RNase抑制剂、TaqDNA聚合酶购自美国Promega公司。
1.3 胎膜CRHR1mRNA表达检测 采用反转录聚合酶链 反应(RT-PCR)检测，根据GENEBANK CRHR1的编码序列，采用DNASTAR软件设计CRHR1mRNA RT-PCR引物，以β-actin作内参照。所用引物序列，均由上海Sangon公司合成，各基因扩增引物的详细信息见表1。
表1 基因扩增引物核酸序列略
3.1 总RNA提取 所用器皿均预先用DEPC水处理或160℃高温烘烤4h，用碾钵在液氮中将胎膜组织碾磨成粉末，按试剂操作说明提取总RNA。测定OD 260/280 值均>1.80，示RNA样品的纯度高，并估计RNA样品的浓度;所得RNA产品进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定抽提RNA的完整性和DNA污染情况。
1.3.2 逆转录反应 按Promega公司AMV逆转录产品说明书操作。合成的cDNA产品保存于-20℃备用。
1.3.3 聚合酶链反应 反应体系为20μl:Taq酶4μl(0.5U/μl)，10×缓冲液2μl，dNTP2μl，cDNA产品4μl，CRHR1和β-actin正义链及反义链引物(10μM)各1μl，加水至20μl。将反应体系置于热循环仪Gene Amp PCR System2400中，设定参数，95℃预变性5min，然后执行反应:94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，35个循环，最后72℃延伸10min。
1.3.4 电泳 取每对样品的PCR产物10μl，1.2%琼脂糖凝胶电泳，用Gel Doc200影像分析仪拍摄。
1.4 统计学方法 电泳图像经扫描后用Quantity One—4.0.3软件进行灰度分析。以内参照β-actin的灰度值作为分母，目的基因CRHR1的灰度值作为分子，对对照组和研究组CRHR1基因的表达量加以校正。对校正后的各CRHR1表达量以SPSS10.0进行统计检验，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 胎膜中总RNA的电泳鉴定结果 见图1。
2.2 顺产组和社会因素剖宫产组胎膜CRHR1mRNA表达 社会因素剖宫产组与顺产组胎膜组织中均有CRHR1mRNA表达，前者胎膜上CRHR1mRNA表达较后者明显低调，其灰度校正值与后者比较差异具有显著性(P<0.01)。见表2，图2，图3。
表2 CRHR1mRNA基因片段在两组胎膜组织中表达的校正值略
图1 略
图2 略
3 讨论
作为产科临床中一种普遍的现象，社会因素剖宫产的原因是复杂的。孕妇产前选择剖宫产与其在妊娠期间和对即将到来的分娩产生心理上的应激应答有关 [6] 。CRH具有垂体促肾上腺激素释放的作用，它与分布在中枢神经系统的受体结合，在调节对环境产生应激应答中发挥重要作用。孕妇外周血CRH水平显著升高，分娩后24h很快下降到正常水平 [7] 。在CRH这一峰值出现时，分布在中枢神经系统和生殖系统的CRHR均与CRH结合，分别介导应激行为、分娩发动以及产程进展等生理病理反应。1997年，Karˉteris对子宫内组织CRH受体进行了系列研究，用反义RNA探针(CRHR1α和CRHR1с)检测，发现其以混合形式在合体滋养层细胞的水平升高差异具有显著性，在绒毛膜绒毛中散在的细胞滋养层细胞并未发现。与其在同一研究中用图3 顺产与社会因素剖宫产胎膜上CRHR1RT-PCR电泳图;1:PCR marker;2，4，7，10:顺产产妇的胎膜CRHR1与β-actin表达;3，5，6，8，9:社会因素剖宫产产妇胎膜CRHR1与β-actin表达 125 I标记的CRH检测发现只特异性地与纯化的合体滋养细胞结合结果相吻合 [8] 。
1999年，Karteris用 125 I标记的CRH确定在胎盘和胎膜上存在特有的、高亲和力的饱和位点，发现位于胎盘和胎膜上的是CRHR1α和CRHR1с，而非CRHR2α [9]。Stevens [5] 研究发现正常分娩前和分娩时胎膜CRHR1mRNA表达差异无显著性，提示使研究不同分娩方式孕妇胎膜CRHR1mRNA表达差别成为可能。本研究结果表明与正常阴道分娩产妇的胎膜组织中CRHR1mRNA表达比较，社会因素剖宫产产妇的胎膜组织中CRHR1mRˉNA表达明显下调，二者存在显著相关性。其可能的原因是分布在中枢神经系统和生殖系统的CRHR的表达受血CRH峰值影响，两处受体与CRH结合可能存在相互竞争性和依赖性。在没有剖宫产指征的情况下，选择剖宫产终止妊娠的孕妇，由于各种社会心理因素:包括急切盼儿以及因患者现代观念改变，害怕阴道分娩及分娩后的体态改变、注重新生儿的生活质量，大多在妊娠中对即将到来的分娩产生抑郁和焦虑心理。临床研究发现中枢神经系统CRH循环在抑郁病人中会处于过度活跃状态，CRHR1在中枢的过度表达可以解释抑郁症的许多特征性的临床表现和体征[10] 。此时，中枢神经系统之外的子宫内组织(子宫肌层、胎盘、胎膜)CRHR所能结合的CRH相对不足，有可能反馈性的抑制CRHR1mRNA的表达。孕妇长期处于对妊娠和分娩的忧虑中，中枢神经系统CRH循环中枢过度活跃，血浆CRH水平相对升高，也影响子宫内组织CRHR1mRNA表达水平。Pozzoli [11] 已在体外培养的子宫肌细胞中证实，长期的CRH刺激以一种时间和剂量依赖的方式降调节CRHR1mRNA水平。子宫内组织CRHR1mRNA表达通过引起胎膜一系列的非感染性炎症反应 [12] ，对内源性催产素、前列腺素等的分泌有调节作用，并影响靶器官(子宫颈、子宫肌层、胎盘、胎膜)对催产素、前列腺素等的敏感性，从多方面影响分娩发动和产程进展 [5] 。
但其在产妇对分娩方式的选择中的意义仍然是有待探索的问题。本研究发现的社会因素剖宫产 孕妇胎膜上CRHR mRNA表达水平变化，在这类孕妇中的病理生理学价值还有待进一步研究。
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作者单位:410011湖南长沙中南大学湘雅二医院妇产科
(编辑 守中)