野菊花水提液体外抗流感病毒实验研究
【摘要】 目的 观察野菊花水提液体外抗流感病毒的效果。方法 采用细胞病变(CPE)抑制法，测定野菊花水提液对流感病毒所致细胞病变的抑制作用。结果 在药物对细菌的最大无毒浓度TDO以下，当野菊花水提液浓度≥490μg/ml时，随着药物浓度的增加，抑制细胞病变的作用不断增强，直至完全抑制。结论 野菊花水提液体外有抗流感病毒的作用。
关键词 体外抗病毒 野菊花水提液 流感病毒
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)11-0979-02
Study on antivirotic activity of flos chrysanthemum
indic by aqueous extract in vitro
Sheng Xiaorong，Wu Naxin，Wu Yilun
, 百拇医药
Department of Virus Research in Anhui Institute of Medical Sciences，Hefei230061.
【Abstract】 Objective To observe the antivirotic effect of flos chrysanthemum indic by aqueous extract in vitˉro.Methods To test the aqueous extractor restraining cell’s pathogenesis effect(CPE)by influenza virus.Results Under the highest concentration that is harmless to cells，when the concentration of extrac
tor≥490μg/ml，the more the effection of anti-CPE strengthens untill there are not any CPE.Conclusion The aqueous extractor has anti-flu-virotic activity in vitro.
, 百拇医药
Key words anti-virus in vitro flos chrysanthemum indic by aqueous extract in
fluenza virus
野菊花为菊科植物野菊，具有抗病毒、抗菌作用，临床上用于预防和治疗感冒及呼吸道炎症 [1] 。为探讨野菊花水提液对体外抗流感病毒的效果，我们进行了如下实验。
1 材料与方法
1.1 材料 MDCK细胞(狗肾细胞)，自北京引进，由本所传代保存。
1.2 病毒 流行性感冒病毒A3/汉防/359/95(H3N2)，引自国家流感中心。
1.3 RPMI 1640培养液，购自美国Gibco公司;新生牛血清，购自杭州四季青公司。
, 百拇医药
1.4 实验用药
1.4.1 野菊花水提液 由江苏中医药研究所提供，生药浓度为2g/ml，经100℃水浴30min灭活后保存备用。
1.4.2 利巴韦林注射液0.1g/ml，批号970702，上海禾丰制药有限公司生产。
2 实验方法
2.1 病毒毒力测定 MDCK细胞96孔板用含2μg/ml胰蛋白酶的RPMI1640液洗细胞一遍后，逐孔加入10倍系列稀释的病毒液(10 -1 ～10 -7 )，50μl/孔，每稀释度平行4孔，另设正常细胞对照，置37℃、5%CO 2 中吸附2h后弃去病毒液，换入RPMI1640液，继续孵育72h，观察CPE，测定该病毒半数感染量(TCID50)。
, 百拇医药 2.2 药物对细胞的毒性作用 用RPMI1640液分别将野菊花水提液及利巴韦林注射液作2倍系列稀释，加入96孔MDCK细胞板，100μl/孔，每稀释度平行4孔，另设不加药液的正常细胞对照，置37℃、5%CO 2 中培养72h，观察药物对细胞的毒性作用，测定药物不引起细胞病变的最高稀释度即药物的最大无毒浓度TDO，作为抗病毒实验药物的最高浓度。
2.3 药物对流感病毒在细胞内增殖的抑制作用 MDCK细胞96孔板，吸弃上清，用含2μg/ml胰蛋白酶的RPMI1640液洗细胞一遍，加入10TCID50病毒液，50μl/孔，置37℃、5%CO 2 温箱中吸附2h后，弃去病毒液，加入自最大无毒浓度以下2倍系列稀释各5个浓度，每一稀释度平行3孔，培养3天，观察CPE，测定实验药物对CPE的抑制，同时设药物对照、病毒对照、正常细胞对照，观察CPE情况。按以下标准记录:-表示无CPE，+～++++分别表示细胞0～25%、～50%、～75%、>75%发生CPE。
, http://www.100md.com
2.4 结果判定 根据病毒在MDCK细胞上引起CPE的程度，测定药物对CPE的抑制作用，以抑制50%CPE判作有效。
3 结果
3.1 病毒毒力测定结果 见表1。
表1 流感病毒A 3 毒力测定略
3.2药物对细胞毒性测定结果 见表2。
表2 药物对细胞毒性测定结果略
3.3抗病毒实验结果 见表3。
表3 药物对CPE的抑制测定药物 略
结果表明:野菊花水提液对TCID50流感病毒A 3 引起的细胞病变有抑制作用，具有较强的抗病毒活性。
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4 讨论
中药材野菊花 [2] 临床上功用为清热解毒，主治痈、肿、目赤、温热头痛等。对肝肾功能无明显影响，对心脏无毒性，临床不良反应较少见，慢性给药亦无蓄积中毒现象。虽其 [3] 抗病毒作用较强，但临床应用并不广泛，目前国内对野菊花的药用价值研究不多，抗流感病毒作用试验鲜见报道，所以对其抗病毒等功用的开发与应用值得进一步深入探讨。
参考文献
1 江苏新医学院编.中药大辞典(下册).上海:上海科学技术出版社，2000，2144-2145.
2 张捷，谭生建，姜韧，等.野菊花的研究进展.中国新医药，2004，3(1):8-10.
3 华海清.野菊花临床应用研究概况.湖南中医药导报，1994，1(1):36-38.
(编辑 李木), 百拇医药
关键词 体外抗病毒 野菊花水提液 流感病毒
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)11-0979-02
Study on antivirotic activity of flos chrysanthemum
indic by aqueous extract in vitro
Sheng Xiaorong，Wu Naxin，Wu Yilun
, 百拇医药
Department of Virus Research in Anhui Institute of Medical Sciences，Hefei230061.
【Abstract】 Objective To observe the antivirotic effect of flos chrysanthemum indic by aqueous extract in vitˉro.Methods To test the aqueous extractor restraining cell’s pathogenesis effect(CPE)by influenza virus.Results Under the highest concentration that is harmless to cells，when the concentration of extrac
tor≥490μg/ml，the more the effection of anti-CPE strengthens untill there are not any CPE.Conclusion The aqueous extractor has anti-flu-virotic activity in vitro.
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Key words anti-virus in vitro flos chrysanthemum indic by aqueous extract in
fluenza virus
野菊花为菊科植物野菊，具有抗病毒、抗菌作用，临床上用于预防和治疗感冒及呼吸道炎症 [1] 。为探讨野菊花水提液对体外抗流感病毒的效果，我们进行了如下实验。
1 材料与方法
1.1 材料 MDCK细胞(狗肾细胞)，自北京引进，由本所传代保存。
1.2 病毒 流行性感冒病毒A3/汉防/359/95(H3N2)，引自国家流感中心。
1.3 RPMI 1640培养液，购自美国Gibco公司;新生牛血清，购自杭州四季青公司。
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1.4 实验用药
1.4.1 野菊花水提液 由江苏中医药研究所提供，生药浓度为2g/ml，经100℃水浴30min灭活后保存备用。
1.4.2 利巴韦林注射液0.1g/ml，批号970702，上海禾丰制药有限公司生产。
2 实验方法
2.1 病毒毒力测定 MDCK细胞96孔板用含2μg/ml胰蛋白酶的RPMI1640液洗细胞一遍后，逐孔加入10倍系列稀释的病毒液(10 -1 ～10 -7 )，50μl/孔，每稀释度平行4孔，另设正常细胞对照，置37℃、5%CO 2 中吸附2h后弃去病毒液，换入RPMI1640液，继续孵育72h，观察CPE，测定该病毒半数感染量(TCID50)。
, 百拇医药 2.2 药物对细胞的毒性作用 用RPMI1640液分别将野菊花水提液及利巴韦林注射液作2倍系列稀释，加入96孔MDCK细胞板，100μl/孔，每稀释度平行4孔，另设不加药液的正常细胞对照，置37℃、5%CO 2 中培养72h，观察药物对细胞的毒性作用，测定药物不引起细胞病变的最高稀释度即药物的最大无毒浓度TDO，作为抗病毒实验药物的最高浓度。
2.3 药物对流感病毒在细胞内增殖的抑制作用 MDCK细胞96孔板，吸弃上清，用含2μg/ml胰蛋白酶的RPMI1640液洗细胞一遍，加入10TCID50病毒液，50μl/孔，置37℃、5%CO 2 温箱中吸附2h后，弃去病毒液，加入自最大无毒浓度以下2倍系列稀释各5个浓度，每一稀释度平行3孔，培养3天，观察CPE，测定实验药物对CPE的抑制，同时设药物对照、病毒对照、正常细胞对照，观察CPE情况。按以下标准记录:-表示无CPE，+～++++分别表示细胞0～25%、～50%、～75%、>75%发生CPE。
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2.4 结果判定 根据病毒在MDCK细胞上引起CPE的程度，测定药物对CPE的抑制作用，以抑制50%CPE判作有效。
3 结果
3.1 病毒毒力测定结果 见表1。
表1 流感病毒A 3 毒力测定略
3.2药物对细胞毒性测定结果 见表2。
表2 药物对细胞毒性测定结果略
3.3抗病毒实验结果 见表3。
表3 药物对CPE的抑制测定药物 略
结果表明:野菊花水提液对TCID50流感病毒A 3 引起的细胞病变有抑制作用，具有较强的抗病毒活性。
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4 讨论
中药材野菊花 [2] 临床上功用为清热解毒，主治痈、肿、目赤、温热头痛等。对肝肾功能无明显影响，对心脏无毒性，临床不良反应较少见，慢性给药亦无蓄积中毒现象。虽其 [3] 抗病毒作用较强，但临床应用并不广泛，目前国内对野菊花的药用价值研究不多，抗流感病毒作用试验鲜见报道，所以对其抗病毒等功用的开发与应用值得进一步深入探讨。
参考文献
1 江苏新医学院编.中药大辞典(下册).上海:上海科学技术出版社，2000，2144-2145.
2 张捷，谭生建，姜韧，等.野菊花的研究进展.中国新医药，2004，3(1):8-10.
3 华海清.野菊花临床应用研究概况.湖南中医药导报，1994，1(1):36-38.
(编辑 李木), 百拇医药