排毒养颜胶囊的毒理学研究
【摘要】 目的 研究排毒养颜胶囊的急性毒性试验(MTD)和长期毒性试验，观察其毒性反应、中毒症状、毒作用靶器官，确定无毒反应剂量，为临床安全用药剂量提供科学依据。方法 排毒养颜胶囊以19.6g/kg体重经口给予小鼠灌胃，观察7天的急性毒性(MTD)试验及以1、2、4g/kg(折合生药2.73、5.45、10.9g/kg)体重对SD大鼠连续灌胃给药26周(每周6天)，停药恢复49天的长期毒性试验。结果 小鼠MTD为19.6g/kg。6个月的长期毒性试验显示:排毒养颜胶囊粉可导致高、中剂量组试验动物间歇性黄色稀便或软便，体重增长缓慢，其中以高剂量雄性动物最为明显，与对照组比较差异有非常显著性(P<0.01)，但进食量未减少。给药期和恢复期未出现中毒反应，一般状况良好，血液学及血清生化检测指标、各脏器病理组织学检查及胃肠组织AB、AB-PAS特殊染色观察均未发现由药物引起的异常改变。结论排毒养颜胶囊的小鼠MTD急性毒性试验未见中毒症状及死亡发生;连续灌胃给药26周对SD大鼠的无毒反应剂量为1g/kg(生药2.73g/kg)体重，相当于临床拟推荐上限用量的12.5倍，下限量的77倍。
, http://www.100md.com
关键词 排毒养颜胶囊 临床前毒理学评估
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)10-0865-09
Preclinical toxicological evaluation of health and
beauty innerpure capsules
Zhang Ling，Lu Ying，Yang Rong，et al.
Yunnan Pharmacological Laboratories of Natural Products，Kunming650031.
【Abstract】 Objective Oral toxicity of Health and Beauty Innerpure Capsules(HBIC)was evaluated in maxiˉmum tolerated doses(MTD)and chronic(18weeks)studies in Sprague-Dawley rats from both sexes.Methods The main aim is to identify the toxicity target organ/s and to estimate the safety margins of a Health andBeauty InnerˉPure Capsules in laboratory animals.Results The results showed that the data of MTD of HBIC in mice was19.6g/kg body and in chronic toxicity study HBIC promoted and softened the defecation of rats;the body weight of rats inˉcreased slowly(P<0.01);there was no affection induced by HBIC in the hematoloty，the biochemistry in serum and the pathology examination.Conclusion It was concluded that no adverse effect and fatal toxicity were observed after oral administration of MTD in mice and that HBIC dose of1g/kg body was recommended as a safe one.
, 百拇医药
Key words health and beauty innerpure capsules preclinical toxicological evaluation
排毒养颜胶囊作为通便、排毒、养颜的中成药已被批准为国药准字药品，其为西洋参、白术、大黄、小红参、青阳参、肉苁蓉、枳实、荷叶、芒硝等9味中药组成的复方制剂，其中大黄为主药之一。大黄基原为蓼科植物掌叶大黄(Rheum Palamatum L.)、唐古特大黄(Rheum tanguticum maxim，ex Reg.)或药用大黄(Rheum officinale Baill.)的根茎，其主要药理作用除泻下作用外，近代研究还发现其具有抗菌、抗肿瘤等作用。大黄的主要成份是几种葡萄糖苷和苷元，泻下作用较强的苷元主要是蒽醌衍生物，包括大黄酚、大黄素、大黄酸和大黄甲醚等 [1～3] 。近年来，随着现代研究的进展，大黄的众多生物活性不断被发现，但其毒副作用也引起关注，国内外有研究报道，如大鼠长期服用大黄素可引起体重下降，肾体比值增大，肾小管色素沉积;长期服用蒽醌类致泻剂可引起结肠膜黑病变等。排毒养颜胶囊作为大黄复方制剂，长期服用是否也会产生类似的毒副反应?为确保临床用药的安全性，本文对其进行了毒理学安全性的研究。
, http://www.100md.com
1 材料
1.1 供试药品 排毒养颜胶囊(Heath and Beaty InnerPure Capsules)为黄棕色至棕褐色粉末，0.4g/粒(折合生药1.09g)。临床用量为2～12粒/日。由云南盘龙云海药业有限公司提供，批号为B011077。
1.2 动物 健康未交配的ICR小鼠20只，雌雄各半，体重18～22g。由本室动物室提供，合格证号:滇实动证2001034。健康未交配6周龄SD大鼠298只(雌149只，雄149只)，雌鼠(111.28±12.28)g，雄鼠(120.52±13.81)g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，合格证号:沪动合证字152号。实验前在动物观察室饲养观察1周。室内温度(20±6)℃，室内相对湿度50%～70%，自由饮水，自然光照。
1.3 主要仪器及试剂来源
1.3.1 主要仪器 蓝宝石TMS-1024全自动生化分析仪(JAPAN)、Abbott公司(USA)的CEU-DYN-1600型血球分析仪、SHIMADZU公司(JAPAN)的LIBROR AEG-220电子分析天平、SHIMADZU公司(JAPAN)的LIBROR EB-3200D电子分析天平、OLYMPUS公司(JAPAN)的BH-2系统生物显微镜、LEICA RM2145轮转式石蜡切片机(德国)、真彩色病理显微图像分析系统(北京天地电子科技公司)。
, 百拇医药
1.3.2 试剂来源 上海长征公司，北京中生公司。
2 实验方法 [4～8]
2.1 急性毒性试验(最大给药量测定，MTD) 18～22g ICR小鼠，雌雄各半，按19.6g·40ml -1 ·kg -1 灌胃给药，观察7天。
2.2 长期毒性试验 SD大鼠经适应性饲养1周后，进入正式试验。将298只(雌雄各半)动物雌雄分开，按体重随机分为4组，低、中、高剂量组分别为1、2、4g/kg(折合生药2.73、5.45、10.9g/kg)体重，对照组为纯净水。除高剂量按1.2ml/100g灌胃给药外，其余各组按1.0ml/100g灌胃给药。每周灌胃给药6天，连续灌胃26周，停药恢复7周。每周称量动物体重及进食量一次，根据体重变化调整给药容量。于给药9、18、26周分别随机抽取约1/4动物进行检查，余1/4停药7周作为恢复期观察。各期均由股动脉放血处死动物，采集血样标本进行血液学及血清生化指标检测;解剖动物肉眼观察各脏器有无病变，称量动物心、肝、脾、肺、肾、脑、脑垂体、肾上腺、胸腺、前列腺、子宫及卵巢、睾丸重量并计算脏器系数，并取胃、肠(十二脂肠、结肠、回肠)、甲状腺、附睾、胸腺、淋巴结、眼球、胰腺及膀胱用10%福尔马林液固定，对照组和高剂量组动物进行病理切片，光镜下作24个项目检查，并对胃肠进行AB、AB-PAS特殊染色观察，如发现异常再对低剂量组及中剂量组进行切片观察。
, 百拇医药
2.3 统计学方法 用SPSS统计软件对试验数据进行方差分析，方差不齐时用秩和检验进行统计学分析处理。
3 结果
3.1 急性毒性试验 20只小鼠全部存活，精神良好，活动正常，其MTD为19.6g/kg体重。
3.2 长期毒性试验
3.2.1 动物一般状况 试验期间，给药组动物出现间歇性稀便，尤以高剂量组明显，同时高剂量组雄性动物体重增长明显低于其余各组，差异有显著性(P<0.05，P<0.01)。进食量给药组高于对照组(P<0.05，P<0.01)，但停药恢复期各组间比较差异并无显著性(P>0.05)。(见图1～4)3.2.2 血液学检测与结果 由表1～4可见，给药中期Hb和Ret、给药末期RBC和PLT，高、中剂量组高于对照组，有统计学意义(P<0.05，P<0.01);恢复期各剂量组之间差异无显著性(P>0.05)。
, http://www.100md.com
3.2.3 血清生化学检测与结果 由表5～8可见，给药中期ALT、BUN、ALB，给药末期BUN和TBIL组间有统计学意义
图1 排毒养颜胶囊雌性大鼠体重生长曲线
图2 排毒养颜胶囊雄性大鼠生长曲线
图3 排毒养颜胶囊雌性大鼠耗食量
图4 排毒养颜胶囊雄性大鼠耗食量(P<0.05，P<0.01);恢复期各剂量组之间差异无显著性(P>0.05)。
3.2.4 系统尸体解剖和病理组织学检查
3.2.4.1 动物系统尸体解剖观察 动物尸体解剖各主要脏器、器官表面光滑，色泽正常，未见充血、粘连等异常改变。
3.2.4.2 脏器重量及脏器系数 由表9～16可见，给药中期、末期和恢复期观察，给药组动物心、肺、肝、肾、垂体、肾上腺等脏器系数均大于对照组，而且差异有显著性(P<0.05，P<0.01);主要脏器如心、肝、脾、肾绝对重量虽然组间差异有显著性(P<0.05，P<0.01)，但无剂量-反应关系。
, http://www.100md.com
3.2.4.3 病理组织学检测 对照组及高剂量组动物脑、视神经、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、胃、肠(十二脂肠、空肠、回肠、结肠)、甲状腺、睾丸、附睾、前列腺、子宫、卵巢、脑垂体、胸腺、淋巴结、胰腺及膀胱共22个脏器进行病理组织学检查，HE染色镜下未发现由药物引起的病理组织学改变。同时对胃肠组织增加AB染色，可见各肠段腺体分布正常，粘膜基本完整。AB-PAS染色可见肠段层次清楚，血管及肠腺体基底膜完整，腺体结构及分布正常。
表1 排毒养颜给药2个月大鼠血液学指标检测结果
表2 排毒养颜给药4个月大鼠血液学指标检测结果
表3 排毒养颜给药末期大鼠血液学指标检测结果
表4排毒养颜恢复期大鼠血液学指标检测结果
注:各组间比较差异无显著性(P>0.05)
, http://www.100md.com
表5 排毒养颜给药2个月大鼠血液生化指标检测结果
注: ① 与对照组比较差异有显著性(P<0.05); ⑤⑥ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表6 排毒养颜给药4个月大鼠血液生化指标检测结果
注: ①② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③④ 与低剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表7 排毒养颜给药末期大鼠血液生化指标检测结果
注: ① 与对照组比较差异有显著性(P<0.05); ③ 与中剂量组比较差异有显著性(P<0.05)
表8 排毒养颜恢复期大鼠血液生化指标检测结果
, http://www.100md.com
注:各组间比较差异无显著性(P>0.05)
表9 给药2个月雄性大鼠脏器重量
注: ①/② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③/④ 与低剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ⑤/⑥ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表10 给药4个月雄性大鼠脏器重量(g)及其系数(%)测定结果
表11 给药末期雄性大鼠脏器重量
注: ①/② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③/④ 与中剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ⑤/⑥ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
, http://www.100md.com 表12 恢复期雄性大鼠脏器重量
注: ①② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③④ 与低剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ⑤⑥ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表13 给药2个月雌性大鼠脏器重量
注: ①/② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表14 给药4个月雌性大鼠脏器重量
注: ①② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③ 与低剂量组比较差异有显著性(P<0.05)
表15 给药末期雌性大鼠脏器重量
, 百拇医药 注: ①/② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③ 与中剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ⑥ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表16恢复期雌性大鼠脏器重量(g)及其系数(%)测定结果
注: ① 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ⑤ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
4 讨论
本文对排毒养颜胶囊粉进行的小鼠急性毒性试验，未见动物死亡，其MTD为19.6g·40ml -1 ·kg -1 。虽然长期毒性试验观察到给药期间动物出现间歇性黄色稀便或软便，同时动物体重增长缓慢，尤其是雄性高剂量组动物与对照低、中剂量组比较差异有非常显著性(P<0.01)，但动物一般状态良好，活动自如，毛皮光泽，进食量并未减少，这可能与大黄的药理作用———通便、降脂作用有一定关系。有关文献报道:给予肥胖大鼠灌服40mg/100g复方大黄制剂，30天后体重明显减轻，Lee’s指数明显降低;免疫组化ABC法及Western-Blotting检测瘦素表达水平，发现脂肪细胞瘦素表达明显减弱;定量RT-PCR结果发现，肥胖大鼠脂肪细胞中C/EBPαmRNA表达水平较正常大鼠高;在40mg/100g复方大黄制剂灌服1个月后，随着肥胖大鼠体重的减轻，脂肪细胞中C/EBPαmRNA水平也随之降低，与瘦素水平降低程度呈显著正相关(r=0.98，P<0.01) [9] 。周俊 [10] 等对中药降脂方剂进行统计分析时，发现不少方剂中都使用了大黄，这就提示大黄等中药与降血脂的相关性。
, 百拇医药
本试验血液学检测中，在给药中期Hb和Ret，给药末期RBC和PLT，高、中剂量组高于对照组，差异有显著性(P<0.05，P<0.01);但所测数据均在参考值和本室历史背景值范围内 [6，11] ，且恢复期各剂量组之间差异无显著性(P>0.05)，这可能与动物稀、软便增多有关;而血清生化学检测发现，给药中期ALT、BUN、ALB，给药末期BUN和TBIL，组 间差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，但无剂量-反应关系，所测数据也在参考值和本室历史背景值范围内 [6，11] ;且恢复期各剂量组之间差异无显著性(P>0.05)，故无生物学及毒理学意义。
近年来有文献报道，大黄具有肾毒性及引起结肠粘膜黑变病的毒性。如2001年6月，美国毒理学项目组(Nationˉal Toxicology Program NTP)有关大黄素毒性的进一步研究试验报道称，通过持续2年试验，发现大黄素可使试验动物雌雄F334/N大鼠体重下降，大小鼠肾体比值增大，均出现肾小管色素沉积，肾小管上皮细胞玻璃样变。其中给F334/N大鼠分别喂以2808302500ppm的大黄素，雌性大鼠个别动物出现Zymbal’s腺瘤;给B6C3F1小鼠分别以3126251250ppm的大黄素，雄性个别小鼠出现肾小管癌或肾小管腺瘤 [12] 。Walker [13] 等研究发现，蒽醌类物质可引起结肠粘膜黑变病。国外也曾报道1例长期服用蒽醌类泻药，会导致结肠膨胀;手术切除结肠标本可见变黑，肌层神经元消失，平滑肌萎缩 [3] 。美国PORTLAND传统药物研究所所长Dhamananda博士的研究指出，在应用蒽醌类致泻剂9～12个月后，会发生大肠的假黑变病(即在大肠上色素沉着)，但停用数周后即可恢复正常 [14] 。然而，本研究中肾体比值虽然增大，而且差异有显著性(P<0.05，P<0.01)，但病理组织学检查，镜下未见肾脏有组织病理学改变，这可能与给药组动物体重较对照组轻有一定相关性;此外，AB和AB-PAS特殊染色显示各肠段粘膜完整，腺体、血管结构及分布正常，未观察到大鼠肠系膜淋巴结、结肠粘膜固有层有色素沉积。综上所述，在该试验条件下，排毒养颜胶囊粉1.0g/kg(折合原药材2.72g/kg)体重，相当于临床拟用药(0.08～0.013g/kg体重)的12.5～77.0倍为基本无毒性反应剂量。
, http://www.100md.com
参考文献
1 The Rhubarb Compendium.http://www.rhubarbinfo.com.
2 阎文玫.实用中药彩色图谱.北京:人民卫生出版社，1998，7.
3 中国中药数据库.大黄.http://www.cintcm.com/lanmu/shujuku/jianjie/zhongyao_l2.htm.
4 中华人民共和国卫生部药政局，管理局.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)，1993.
5 王治乔，袁伯俊.新药临床前安全性评价与实践.北京:军事医学科学出版社，1997，11.
6 中国科技部生命科学技术发展中心、国家药品非临床研究质量管理专家委员会.药品非临床安全性研究质量管理规范培训教
, 百拇医药
材，1999，5. 7 王北婴.中药新药研制与申报.北京:中国中医药出版社，1995，1.
8 徐叔云.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社，1982，8.
9 陈愉，曲晓义，金惠铭，等.复方大黄制剂对肥胖大鼠脂肪细胞瘦素及C/EBPα的影响.中国中医基础医学杂志，2003，9:27-31.
10 周俊，郑俊华.大黄等含蒽醌类成分中药的降脂作用.北京医科大学学报，1998，30.
11 郝光荣.实验动物学.上海:第二军医大学出版社，1999，1.
12 NTP.Toxicology and carcinogenesis studies of EMODIN(CAS NO.518-82-1)feed studies in F344/N rats and B6C3F1mice.Natl toxicol program.Tech Rep Ser，2001，493:1-278.
, 百拇医药
13 Walker NI，Bennett RE，Axelsen RA.Melanosis coli.Melanosis coli.A consequence of anthraquinone-induced apoptosis of colonic epithelial cells.Am J Pathol，1988，131(3):465-476.
14 杜上鉴.大黄的减肥降脂与排毒作用.http://www.jskintop.comˉpub_tox@hotmail.com.
作者单位:650031云南昆明医学院省级天然药物药理重点实验室
(编辑海 涛), 百拇医药
, http://www.100md.com
关键词 排毒养颜胶囊 临床前毒理学评估
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)10-0865-09
Preclinical toxicological evaluation of health and
beauty innerpure capsules
Zhang Ling，Lu Ying，Yang Rong，et al.
Yunnan Pharmacological Laboratories of Natural Products，Kunming650031.
【Abstract】 Objective Oral toxicity of Health and Beauty Innerpure Capsules(HBIC)was evaluated in maxiˉmum tolerated doses(MTD)and chronic(18weeks)studies in Sprague-Dawley rats from both sexes.Methods The main aim is to identify the toxicity target organ/s and to estimate the safety margins of a Health andBeauty InnerˉPure Capsules in laboratory animals.Results The results showed that the data of MTD of HBIC in mice was19.6g/kg body and in chronic toxicity study HBIC promoted and softened the defecation of rats;the body weight of rats inˉcreased slowly(P<0.01);there was no affection induced by HBIC in the hematoloty，the biochemistry in serum and the pathology examination.Conclusion It was concluded that no adverse effect and fatal toxicity were observed after oral administration of MTD in mice and that HBIC dose of1g/kg body was recommended as a safe one.
, 百拇医药
Key words health and beauty innerpure capsules preclinical toxicological evaluation
排毒养颜胶囊作为通便、排毒、养颜的中成药已被批准为国药准字药品，其为西洋参、白术、大黄、小红参、青阳参、肉苁蓉、枳实、荷叶、芒硝等9味中药组成的复方制剂，其中大黄为主药之一。大黄基原为蓼科植物掌叶大黄(Rheum Palamatum L.)、唐古特大黄(Rheum tanguticum maxim，ex Reg.)或药用大黄(Rheum officinale Baill.)的根茎，其主要药理作用除泻下作用外，近代研究还发现其具有抗菌、抗肿瘤等作用。大黄的主要成份是几种葡萄糖苷和苷元，泻下作用较强的苷元主要是蒽醌衍生物，包括大黄酚、大黄素、大黄酸和大黄甲醚等 [1～3] 。近年来，随着现代研究的进展，大黄的众多生物活性不断被发现，但其毒副作用也引起关注，国内外有研究报道，如大鼠长期服用大黄素可引起体重下降，肾体比值增大，肾小管色素沉积;长期服用蒽醌类致泻剂可引起结肠膜黑病变等。排毒养颜胶囊作为大黄复方制剂，长期服用是否也会产生类似的毒副反应?为确保临床用药的安全性，本文对其进行了毒理学安全性的研究。
, http://www.100md.com
1 材料
1.1 供试药品 排毒养颜胶囊(Heath and Beaty InnerPure Capsules)为黄棕色至棕褐色粉末，0.4g/粒(折合生药1.09g)。临床用量为2～12粒/日。由云南盘龙云海药业有限公司提供，批号为B011077。
1.2 动物 健康未交配的ICR小鼠20只，雌雄各半，体重18～22g。由本室动物室提供，合格证号:滇实动证2001034。健康未交配6周龄SD大鼠298只(雌149只，雄149只)，雌鼠(111.28±12.28)g，雄鼠(120.52±13.81)g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，合格证号:沪动合证字152号。实验前在动物观察室饲养观察1周。室内温度(20±6)℃，室内相对湿度50%～70%，自由饮水，自然光照。
1.3 主要仪器及试剂来源
1.3.1 主要仪器 蓝宝石TMS-1024全自动生化分析仪(JAPAN)、Abbott公司(USA)的CEU-DYN-1600型血球分析仪、SHIMADZU公司(JAPAN)的LIBROR AEG-220电子分析天平、SHIMADZU公司(JAPAN)的LIBROR EB-3200D电子分析天平、OLYMPUS公司(JAPAN)的BH-2系统生物显微镜、LEICA RM2145轮转式石蜡切片机(德国)、真彩色病理显微图像分析系统(北京天地电子科技公司)。
, 百拇医药
1.3.2 试剂来源 上海长征公司，北京中生公司。
2 实验方法 [4～8]
2.1 急性毒性试验(最大给药量测定，MTD) 18～22g ICR小鼠，雌雄各半，按19.6g·40ml -1 ·kg -1 灌胃给药，观察7天。
2.2 长期毒性试验 SD大鼠经适应性饲养1周后，进入正式试验。将298只(雌雄各半)动物雌雄分开，按体重随机分为4组，低、中、高剂量组分别为1、2、4g/kg(折合生药2.73、5.45、10.9g/kg)体重，对照组为纯净水。除高剂量按1.2ml/100g灌胃给药外，其余各组按1.0ml/100g灌胃给药。每周灌胃给药6天，连续灌胃26周，停药恢复7周。每周称量动物体重及进食量一次，根据体重变化调整给药容量。于给药9、18、26周分别随机抽取约1/4动物进行检查，余1/4停药7周作为恢复期观察。各期均由股动脉放血处死动物，采集血样标本进行血液学及血清生化指标检测;解剖动物肉眼观察各脏器有无病变，称量动物心、肝、脾、肺、肾、脑、脑垂体、肾上腺、胸腺、前列腺、子宫及卵巢、睾丸重量并计算脏器系数，并取胃、肠(十二脂肠、结肠、回肠)、甲状腺、附睾、胸腺、淋巴结、眼球、胰腺及膀胱用10%福尔马林液固定，对照组和高剂量组动物进行病理切片，光镜下作24个项目检查，并对胃肠进行AB、AB-PAS特殊染色观察，如发现异常再对低剂量组及中剂量组进行切片观察。
, 百拇医药
2.3 统计学方法 用SPSS统计软件对试验数据进行方差分析，方差不齐时用秩和检验进行统计学分析处理。
3 结果
3.1 急性毒性试验 20只小鼠全部存活，精神良好，活动正常，其MTD为19.6g/kg体重。
3.2 长期毒性试验
3.2.1 动物一般状况 试验期间，给药组动物出现间歇性稀便，尤以高剂量组明显，同时高剂量组雄性动物体重增长明显低于其余各组，差异有显著性(P<0.05，P<0.01)。进食量给药组高于对照组(P<0.05，P<0.01)，但停药恢复期各组间比较差异并无显著性(P>0.05)。(见图1～4)3.2.2 血液学检测与结果 由表1～4可见，给药中期Hb和Ret、给药末期RBC和PLT，高、中剂量组高于对照组，有统计学意义(P<0.05，P<0.01);恢复期各剂量组之间差异无显著性(P>0.05)。
, http://www.100md.com
3.2.3 血清生化学检测与结果 由表5～8可见，给药中期ALT、BUN、ALB，给药末期BUN和TBIL组间有统计学意义
图1 排毒养颜胶囊雌性大鼠体重生长曲线
图2 排毒养颜胶囊雄性大鼠生长曲线
图3 排毒养颜胶囊雌性大鼠耗食量
图4 排毒养颜胶囊雄性大鼠耗食量(P<0.05，P<0.01);恢复期各剂量组之间差异无显著性(P>0.05)。
3.2.4 系统尸体解剖和病理组织学检查
3.2.4.1 动物系统尸体解剖观察 动物尸体解剖各主要脏器、器官表面光滑，色泽正常，未见充血、粘连等异常改变。
3.2.4.2 脏器重量及脏器系数 由表9～16可见，给药中期、末期和恢复期观察，给药组动物心、肺、肝、肾、垂体、肾上腺等脏器系数均大于对照组，而且差异有显著性(P<0.05，P<0.01);主要脏器如心、肝、脾、肾绝对重量虽然组间差异有显著性(P<0.05，P<0.01)，但无剂量-反应关系。
, http://www.100md.com
3.2.4.3 病理组织学检测 对照组及高剂量组动物脑、视神经、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、胃、肠(十二脂肠、空肠、回肠、结肠)、甲状腺、睾丸、附睾、前列腺、子宫、卵巢、脑垂体、胸腺、淋巴结、胰腺及膀胱共22个脏器进行病理组织学检查，HE染色镜下未发现由药物引起的病理组织学改变。同时对胃肠组织增加AB染色，可见各肠段腺体分布正常，粘膜基本完整。AB-PAS染色可见肠段层次清楚，血管及肠腺体基底膜完整，腺体结构及分布正常。
表1 排毒养颜给药2个月大鼠血液学指标检测结果
表2 排毒养颜给药4个月大鼠血液学指标检测结果
表3 排毒养颜给药末期大鼠血液学指标检测结果
表4排毒养颜恢复期大鼠血液学指标检测结果
注:各组间比较差异无显著性(P>0.05)
, http://www.100md.com
表5 排毒养颜给药2个月大鼠血液生化指标检测结果
注: ① 与对照组比较差异有显著性(P<0.05); ⑤⑥ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表6 排毒养颜给药4个月大鼠血液生化指标检测结果
注: ①② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③④ 与低剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表7 排毒养颜给药末期大鼠血液生化指标检测结果
注: ① 与对照组比较差异有显著性(P<0.05); ③ 与中剂量组比较差异有显著性(P<0.05)
表8 排毒养颜恢复期大鼠血液生化指标检测结果
, http://www.100md.com
注:各组间比较差异无显著性(P>0.05)
表9 给药2个月雄性大鼠脏器重量
注: ①/② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③/④ 与低剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ⑤/⑥ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表10 给药4个月雄性大鼠脏器重量(g)及其系数(%)测定结果
表11 给药末期雄性大鼠脏器重量
注: ①/② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③/④ 与中剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ⑤/⑥ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
, http://www.100md.com 表12 恢复期雄性大鼠脏器重量
注: ①② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③④ 与低剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ⑤⑥ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表13 给药2个月雌性大鼠脏器重量
注: ①/② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表14 给药4个月雌性大鼠脏器重量
注: ①② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③ 与低剂量组比较差异有显著性(P<0.05)
表15 给药末期雌性大鼠脏器重量
, 百拇医药 注: ①/② 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ③ 与中剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ⑥ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
表16恢复期雌性大鼠脏器重量(g)及其系数(%)测定结果
注: ① 与对照组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01); ⑤ 与高剂量组比较差异有显著性(P<0.05，P<0.01)
4 讨论
本文对排毒养颜胶囊粉进行的小鼠急性毒性试验，未见动物死亡，其MTD为19.6g·40ml -1 ·kg -1 。虽然长期毒性试验观察到给药期间动物出现间歇性黄色稀便或软便，同时动物体重增长缓慢，尤其是雄性高剂量组动物与对照低、中剂量组比较差异有非常显著性(P<0.01)，但动物一般状态良好，活动自如，毛皮光泽，进食量并未减少，这可能与大黄的药理作用———通便、降脂作用有一定关系。有关文献报道:给予肥胖大鼠灌服40mg/100g复方大黄制剂，30天后体重明显减轻，Lee’s指数明显降低;免疫组化ABC法及Western-Blotting检测瘦素表达水平，发现脂肪细胞瘦素表达明显减弱;定量RT-PCR结果发现，肥胖大鼠脂肪细胞中C/EBPαmRNA表达水平较正常大鼠高;在40mg/100g复方大黄制剂灌服1个月后，随着肥胖大鼠体重的减轻，脂肪细胞中C/EBPαmRNA水平也随之降低，与瘦素水平降低程度呈显著正相关(r=0.98，P<0.01) [9] 。周俊 [10] 等对中药降脂方剂进行统计分析时，发现不少方剂中都使用了大黄，这就提示大黄等中药与降血脂的相关性。
, 百拇医药
本试验血液学检测中，在给药中期Hb和Ret，给药末期RBC和PLT，高、中剂量组高于对照组，差异有显著性(P<0.05，P<0.01);但所测数据均在参考值和本室历史背景值范围内 [6，11] ，且恢复期各剂量组之间差异无显著性(P>0.05)，这可能与动物稀、软便增多有关;而血清生化学检测发现，给药中期ALT、BUN、ALB，给药末期BUN和TBIL，组 间差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，但无剂量-反应关系，所测数据也在参考值和本室历史背景值范围内 [6，11] ;且恢复期各剂量组之间差异无显著性(P>0.05)，故无生物学及毒理学意义。
近年来有文献报道，大黄具有肾毒性及引起结肠粘膜黑变病的毒性。如2001年6月，美国毒理学项目组(Nationˉal Toxicology Program NTP)有关大黄素毒性的进一步研究试验报道称，通过持续2年试验，发现大黄素可使试验动物雌雄F334/N大鼠体重下降，大小鼠肾体比值增大，均出现肾小管色素沉积，肾小管上皮细胞玻璃样变。其中给F334/N大鼠分别喂以2808302500ppm的大黄素，雌性大鼠个别动物出现Zymbal’s腺瘤;给B6C3F1小鼠分别以3126251250ppm的大黄素，雄性个别小鼠出现肾小管癌或肾小管腺瘤 [12] 。Walker [13] 等研究发现，蒽醌类物质可引起结肠粘膜黑变病。国外也曾报道1例长期服用蒽醌类泻药，会导致结肠膨胀;手术切除结肠标本可见变黑，肌层神经元消失，平滑肌萎缩 [3] 。美国PORTLAND传统药物研究所所长Dhamananda博士的研究指出，在应用蒽醌类致泻剂9～12个月后，会发生大肠的假黑变病(即在大肠上色素沉着)，但停用数周后即可恢复正常 [14] 。然而，本研究中肾体比值虽然增大，而且差异有显著性(P<0.05，P<0.01)，但病理组织学检查，镜下未见肾脏有组织病理学改变，这可能与给药组动物体重较对照组轻有一定相关性;此外，AB和AB-PAS特殊染色显示各肠段粘膜完整，腺体、血管结构及分布正常，未观察到大鼠肠系膜淋巴结、结肠粘膜固有层有色素沉积。综上所述，在该试验条件下，排毒养颜胶囊粉1.0g/kg(折合原药材2.72g/kg)体重，相当于临床拟用药(0.08～0.013g/kg体重)的12.5～77.0倍为基本无毒性反应剂量。
, http://www.100md.com
参考文献
1 The Rhubarb Compendium.http://www.rhubarbinfo.com.
2 阎文玫.实用中药彩色图谱.北京:人民卫生出版社，1998，7.
3 中国中药数据库.大黄.http://www.cintcm.com/lanmu/shujuku/jianjie/zhongyao_l2.htm.
4 中华人民共和国卫生部药政局，管理局.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)，1993.
5 王治乔，袁伯俊.新药临床前安全性评价与实践.北京:军事医学科学出版社，1997，11.
6 中国科技部生命科学技术发展中心、国家药品非临床研究质量管理专家委员会.药品非临床安全性研究质量管理规范培训教
, 百拇医药
材，1999，5. 7 王北婴.中药新药研制与申报.北京:中国中医药出版社，1995，1.
8 徐叔云.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社，1982，8.
9 陈愉，曲晓义，金惠铭，等.复方大黄制剂对肥胖大鼠脂肪细胞瘦素及C/EBPα的影响.中国中医基础医学杂志，2003，9:27-31.
10 周俊，郑俊华.大黄等含蒽醌类成分中药的降脂作用.北京医科大学学报，1998，30.
11 郝光荣.实验动物学.上海:第二军医大学出版社，1999，1.
12 NTP.Toxicology and carcinogenesis studies of EMODIN(CAS NO.518-82-1)feed studies in F344/N rats and B6C3F1mice.Natl toxicol program.Tech Rep Ser，2001，493:1-278.
, 百拇医药
13 Walker NI，Bennett RE，Axelsen RA.Melanosis coli.Melanosis coli.A consequence of anthraquinone-induced apoptosis of colonic epithelial cells.Am J Pathol，1988，131(3):465-476.
14 杜上鉴.大黄的减肥降脂与排毒作用.http://www.jskintop.comˉpub_tox@hotmail.com.
作者单位:650031云南昆明医学院省级天然药物药理重点实验室
(编辑海 涛), 百拇医药