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2004年8月15日
石胜军 夏照帆 2004-8-1 16:20:23 中国病理学网2000年第1期
高等真核生物的基因组一般具有80 000～100 000个基因，而每一个细胞大约只表达其中的15%[1]。基因在不同细胞间及不同生长阶段的选择性表达决定了生命活动的多样性，如发育与分化、衰老与死亡、内环境稳定、细胞周期调控等。比较细胞间基因表达的差异为我们揭示生命活动的规律提供了依据。
由于真核细胞 mRNA 3′端一般含有 poly( a)尾，因此现有的方法基本上都是利用共同引物将不同的 mRNA反转录成 cDNA，以 cDNA为对象研究基因表达的差异。1992年 Liang等[2]建立了一种差异显示反转录 pCR法( differential display reverse transcription PCR， dDRT-PCR)，为检测成批基因表达的差异开辟了新天地。迄今为止已出现了大量应用该技术的研究报道[3，4]。然而，尽管应用 dDRT-PCR方法已经取得了不少成果，而且该方法还在不断改进之中，但它仍然存在几个难以解决的问题：(1)重复率低，至少有20%的差异条带不能被准确重复[5]；(2)假阳性率可以高达90%[6]；(3)获得的差异表达序列极少包含编码信息。近年来 ......
高等真核生物的基因组一般具有80 000～100 000个基因，而每一个细胞大约只表达其中的15%[1]。基因在不同细胞间及不同生长阶段的选择性表达决定了生命活动的多样性，如发育与分化、衰老与死亡、内环境稳定、细胞周期调控等。比较细胞间基因表达的差异为我们揭示生命活动的规律提供了依据。
由于真核细胞 mRNA 3′端一般含有 poly( a)尾，因此现有的方法基本上都是利用共同引物将不同的 mRNA反转录成 cDNA，以 cDNA为对象研究基因表达的差异。1992年 Liang等[2]建立了一种差异显示反转录 pCR法( differential display reverse transcription PCR， dDRT-PCR)，为检测成批基因表达的差异开辟了新天地。迄今为止已出现了大量应用该技术的研究报道[3，4]。然而，尽管应用 dDRT-PCR方法已经取得了不少成果，而且该方法还在不断改进之中，但它仍然存在几个难以解决的问题：(1)重复率低，至少有20%的差异条带不能被准确重复[5]；(2)假阳性率可以高达90%[6]；(3)获得的差异表达序列极少包含编码信息。近年来 ......