胎肝细胞质液对急性肝功能衰竭大鼠红细胞免疫粘附功能的影响
1济南军区总医院 山东省济南市 250031
2上海长海医院 上海市
孙自勤，男，35岁. 现任消化内科主治医师，硕士学位. 主要从事肝病研究.
项目负责人：孙自勤，250031，山东省济南市师范路98号，济南军区总医院.
收稿日期 1992-12-20
摘 要作者观察了胎肝细胞质液(FLC)对D-氨基半乳糖(D-Gal)诱发的急性肝功能衰竭大鼠红细胞免疫粘附功能(RBCIA)、肝及血清脂质过氧化物(LPO)的影响. 结果发现，急性肝功能衰竭时RBCIA明显受抑，随肝功能改善而逐渐回升；肝及血清LPO明显增加，随肝功改善而逐渐降低. FLC治疗可以使RBCIA回升及体内LPO清除速度加快. 本文对FLC增强RBClA的可能机制进行了探讨.
, 百拇医药
主题词 肝功能衰竭，急性/治疗；红细胞/免疫学；胎肝细胞质液
Subject headings liver failure, acute/therapy; erythrocytes/immunology; fetal liver cells
孙自勤,郭灵芝,汪伟业,何建文,郭峰.胎肝细胞质液对急性肝功能衰竭大鼠红细胞免疫粘附功能的影响.
新消化病学杂志,1993;1(2):74-76
0 引言
近年来，红细胞免疫粘附功能与疾病的关系引起了国内外学者的关注. 各种肝病时红细胞免疫粘附功能明显受抑[1，2]. 但目前治疗红细胞免疫功能低下的办法不多. 我们采用FLC治疗大鼠急性肝功能衰竭，发现FLC可促使受抑的RBCIA恢复. 报告如下.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 动物模型 按800mg/kg体重给SD大鼠(♂，体重170g～220g，由第二军医大学提供)腹腔内注射D-氨基半乳糖(D-Gal,重庆医科大学提供，批号890404，临用前以生理盐水配成5%溶液).24h后抽样检查表明肝组织病理学及血清学均符合急性肝衰竭表现.
1.2 FLC制备 水囊引产4mo～6mo龄胎儿肝脏，洗净残血并去包膜后按4∶1(v/w)用生理盐水制成匀浆，先经3000rpm离心15min，弃去沉渣，再于20000g离心(4℃，1h)，其上清液即为FLC.
1.3 分组及处理 注射D-Gal后24h，随机分为2组，治疗组(n=57)每只大鼠腹腔注射FLC 5mL(蛋白质含量17.4mg/mL)，对照组(n=30)腹腔注射等量生理盐水.
1.4 观测指标 各组于上述处理后24h，48h,72h及5d，7d分批处死动物，取血及肝组织测定红细胞C-3b受体花环形成率(RBCC-3bRR郭峰法[3])、血清及肝组织内LPO的代谢产物丙二醛(MDA，硫代巴比妥酸荧光分光法[4])，血清丙氨酸转氨酶(ALT)的含量.
, 百拇医药
1.5 数据处理 两组间RBCC-3bRR，MDA及ALT的显著性用t检验.
2 结果
2.1 FLC对红细胞免疫粘附功能的影响 治疗后24h，RBCC-3bRR较对照组明显升高(P<0.01),此后各组RBCC-3bRR均逐渐回升，但治疗组较对照组回升快且明显，见表1.
2.2 FLC治疗后肝组织及血清LPO的变化 肝衰竭后肝组织内MDA大量堆积，以后逐渐降低. FLC治疗可使之很快被清除. 血清MDA的变化与肝MDA相似，见表2.
表1 FLC对红细胞免疫粘附功能的影响(x-±s,%)
注：括号内数字为动物数，*,* *分别代表治疗组与对照组相比P<0.05和P<0.01.
, 百拇医药
表2 FLC对肝及血清LPO的影响
2.3 FLC治疗后血清ALT较对照组下降早而明显 见表3.
表3 FLC对血清ALT的影响(x-±s,U/L)
3 讨论胎肝、幼年动物肝及成年动物再生肝细胞质液对于急性肝衰竭的疗效已得到证实[5-7]. 根据研究，其中的有效成分为一种被称为肝生长刺激物质的小分子多肽，该物质具有脏器特异性而无种属特异性[6]. 其生物学活性为促进肝细胞DNA合成和细胞再生[6]. 我们在以前的研究中发现，给SD大鼠用D-Gal诱发急性肝衰竭后，RBCIA功能明显减退. 本研究进一步发现，用FLC治疗后24h，RBCC-3bRR即开始回升，1wk内基本恢复正常，明显快于对照组，其作用机制不十分清楚，有以下几种可能：①LPO能破坏细胞膜的稳定性，并可使红细胞C-3b受体失活[8]. 我们的实验结果显示，急性肝衰时，体内LPO大量堆积，用FLC治疗后逐渐恢复正常，与郝飞[7]报告的结果一致. 且MDA的降低与RBCIA功能的恢复在时间上是吻合的. 由此推断，FLC对RBCIA的增强作用与体内脂质过氧化物含量降低有关；②另一种可能为经FLC治疗后，肝功能及吞噬细胞功能的恢复，加速了血清内毒素的清除[7]，从而解除了内毒素对红细胞和其他组织细胞的毒性作用，有助于这些细胞功能的恢复；③FLC中可能还存在着某些对造血系统有直接或间接影响的物质.红细胞免疫粘附功能增强后，对促进肝衰竭的康复可能又起了重要作用. 已经知道，红细胞C-3b受体可与体内免疫复合物结合，加速其清除[9]，以防由此而引起的肝细胞及其他细胞的进一步损伤；并且红细胞还可增强T淋巴细胞的功能[9]，从而增强细胞免疫功能. 通过上述多种作用，加速了肝脏功能的进一步恢复. 总之，FLC对于肝衰竭时RBCIA功能的促进作用及后者对受损肝脏的改善作用可能是多方面的，其具体机制有待于进一步研究.
, http://www.100md.com
4 参考文献1 王玉龙，杨翼峰，吴文漪，等.乙型肝炎患者红细胞免疫粘附功能的动态研究.上海免疫学杂志，1988；8(1)：27
2 朴煦绪，等.慢性肝炎、肝硬化及肝癌患者红细胞补体受体活性的初步探讨.中国免疫学杂志，1986；2：252
3 郭峰，虞紫茜，赵中平，等.红细胞免疫功能初步研究.中华医学杂志，1982；62(12)：715
4 李建武，吴中立.硫代巴比妥酸荧光法测定血清和组织脂质过氧化物.第二军医大学学报，1987；8：371
5 LaBrecque DR,Bachur NR.Hepatic stimulator substance:physicochemicalcharacteristics and specificity.
, 百拇医药
Am J Physiol,1982;242:G281
6 LaBrecque DR, Resch LA. Preparation and partial characterization of hepatic regenerative stimulator
substance(ss) from rat liver.J PhysiolLondon, 1975;248:273
7 郝飞，向正居.人胎肝胞质液治疗急性肝衰竭实验研究.第三军医大学学报，1989；11：266
8 潘华珍，冯立明，许彩民，等. 丙二醛对红细胞的作用.生物化学与生物物理学进展，1984；2：34
9 Siegel I, et al. The red cell immune system.Lancet,1981;Ⅱ(8246)：556, 百拇医药
2上海长海医院 上海市
孙自勤，男，35岁. 现任消化内科主治医师，硕士学位. 主要从事肝病研究.
项目负责人：孙自勤，250031，山东省济南市师范路98号，济南军区总医院.
收稿日期 1992-12-20
摘 要作者观察了胎肝细胞质液(FLC)对D-氨基半乳糖(D-Gal)诱发的急性肝功能衰竭大鼠红细胞免疫粘附功能(RBCIA)、肝及血清脂质过氧化物(LPO)的影响. 结果发现，急性肝功能衰竭时RBCIA明显受抑，随肝功能改善而逐渐回升；肝及血清LPO明显增加，随肝功改善而逐渐降低. FLC治疗可以使RBCIA回升及体内LPO清除速度加快. 本文对FLC增强RBClA的可能机制进行了探讨.
, 百拇医药
主题词 肝功能衰竭，急性/治疗；红细胞/免疫学；胎肝细胞质液
Subject headings liver failure, acute/therapy; erythrocytes/immunology; fetal liver cells
孙自勤,郭灵芝,汪伟业,何建文,郭峰.胎肝细胞质液对急性肝功能衰竭大鼠红细胞免疫粘附功能的影响.
新消化病学杂志,1993;1(2):74-76
0 引言
近年来，红细胞免疫粘附功能与疾病的关系引起了国内外学者的关注. 各种肝病时红细胞免疫粘附功能明显受抑[1，2]. 但目前治疗红细胞免疫功能低下的办法不多. 我们采用FLC治疗大鼠急性肝功能衰竭，发现FLC可促使受抑的RBCIA恢复. 报告如下.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 动物模型 按800mg/kg体重给SD大鼠(♂，体重170g～220g，由第二军医大学提供)腹腔内注射D-氨基半乳糖(D-Gal,重庆医科大学提供，批号890404，临用前以生理盐水配成5%溶液).24h后抽样检查表明肝组织病理学及血清学均符合急性肝衰竭表现.
1.2 FLC制备 水囊引产4mo～6mo龄胎儿肝脏，洗净残血并去包膜后按4∶1(v/w)用生理盐水制成匀浆，先经3000rpm离心15min，弃去沉渣，再于20000g离心(4℃，1h)，其上清液即为FLC.
1.3 分组及处理 注射D-Gal后24h，随机分为2组，治疗组(n=57)每只大鼠腹腔注射FLC 5mL(蛋白质含量17.4mg/mL)，对照组(n=30)腹腔注射等量生理盐水.
1.4 观测指标 各组于上述处理后24h，48h,72h及5d，7d分批处死动物，取血及肝组织测定红细胞C-3b受体花环形成率(RBCC-3bRR郭峰法[3])、血清及肝组织内LPO的代谢产物丙二醛(MDA，硫代巴比妥酸荧光分光法[4])，血清丙氨酸转氨酶(ALT)的含量.
, 百拇医药
1.5 数据处理 两组间RBCC-3bRR，MDA及ALT的显著性用t检验.
2 结果
2.1 FLC对红细胞免疫粘附功能的影响 治疗后24h，RBCC-3bRR较对照组明显升高(P<0.01),此后各组RBCC-3bRR均逐渐回升，但治疗组较对照组回升快且明显，见表1.
2.2 FLC治疗后肝组织及血清LPO的变化 肝衰竭后肝组织内MDA大量堆积，以后逐渐降低. FLC治疗可使之很快被清除. 血清MDA的变化与肝MDA相似，见表2.
表1 FLC对红细胞免疫粘附功能的影响(x-±s,%)
, 百拇医药 处理后时间 | 对照组 | 治疗组 |
24h | (6)8.33±3.20 | (12)15.00±3.91** |
48h | (6)9.83±2.23 | (12)13.20±3.43* |
72h | , 百拇医药 (6)10.83±4.83 | (12)18.17±2.79** |
5d | (6)12.00±4.53 | (10)18.60±3.86* |
7d | (6)16.20±4.15 | (10)19.10±2.91 |
注：括号内数字为动物数，*,* *分别代表治疗组与对照组相比P<0.05和P<0.01.
, 百拇医药
表2 FLC对肝及血清LPO的影响
处理后时间 | 肝MDA(nmol/g肝) | 血清MDA(nmol/L) | ||
对照组 | 治疗组 | 对照组 | 治疗组 | |
, 百拇医药 24h | (6)1716.4±271.2 | (12)1060.5±308.2** | (5)7.23±1.25 | (11)4.82±1.04** |
48h | (6)1611.8±297.7 | (12)867.4±240.1** | (5)5.86±1.11 | , http://www.100md.com (10)3.72±0.85** |
72h | (6)597.7±313.8 | (12)258.9±94.9** | (5)5.18±1.26 | (10)3.55±0.55** |
5d | (4)295.5±112.0 | (9)205.8±75.4 | , 百拇医药 (5)4.16±1.18 | (10)3.11±0.72 |
7d | (6)206.6±101.0 | (12)119.5±105.5 | (4)3.53±0.55 | (8)3.47±0.58 |
2.3 FLC治疗后血清ALT较对照组下降早而明显 见表3.
表3 FLC对血清ALT的影响(x-±s,U/L)
, http://www.100md.com 处理后时间 | 对照组 | 治疗组 |
24h | (6)848.7±234.1 | (12)527.1±306.6** |
48h | (6)665.3±242.4 | (12)199.8±133.5** |
72h | , 百拇医药 (6)220.8±76.7 | (12)85.5±54.1** |
5d | (5)68.8±40.4 | (10)39.0±8.5* |
7d | (4)35.8±1.3 | (8)37.3±4.8 |
3 讨论胎肝、幼年动物肝及成年动物再生肝细胞质液对于急性肝衰竭的疗效已得到证实[5-7]. 根据研究，其中的有效成分为一种被称为肝生长刺激物质的小分子多肽，该物质具有脏器特异性而无种属特异性[6]. 其生物学活性为促进肝细胞DNA合成和细胞再生[6]. 我们在以前的研究中发现，给SD大鼠用D-Gal诱发急性肝衰竭后，RBCIA功能明显减退. 本研究进一步发现，用FLC治疗后24h，RBCC-3bRR即开始回升，1wk内基本恢复正常，明显快于对照组，其作用机制不十分清楚，有以下几种可能：①LPO能破坏细胞膜的稳定性，并可使红细胞C-3b受体失活[8]. 我们的实验结果显示，急性肝衰时，体内LPO大量堆积，用FLC治疗后逐渐恢复正常，与郝飞[7]报告的结果一致. 且MDA的降低与RBCIA功能的恢复在时间上是吻合的. 由此推断，FLC对RBCIA的增强作用与体内脂质过氧化物含量降低有关；②另一种可能为经FLC治疗后，肝功能及吞噬细胞功能的恢复，加速了血清内毒素的清除[7]，从而解除了内毒素对红细胞和其他组织细胞的毒性作用，有助于这些细胞功能的恢复；③FLC中可能还存在着某些对造血系统有直接或间接影响的物质.红细胞免疫粘附功能增强后，对促进肝衰竭的康复可能又起了重要作用. 已经知道，红细胞C-3b受体可与体内免疫复合物结合，加速其清除[9]，以防由此而引起的肝细胞及其他细胞的进一步损伤；并且红细胞还可增强T淋巴细胞的功能[9]，从而增强细胞免疫功能. 通过上述多种作用，加速了肝脏功能的进一步恢复. 总之，FLC对于肝衰竭时RBCIA功能的促进作用及后者对受损肝脏的改善作用可能是多方面的，其具体机制有待于进一步研究.
, http://www.100md.com
4 参考文献1 王玉龙，杨翼峰，吴文漪，等.乙型肝炎患者红细胞免疫粘附功能的动态研究.上海免疫学杂志，1988；8(1)：27
2 朴煦绪，等.慢性肝炎、肝硬化及肝癌患者红细胞补体受体活性的初步探讨.中国免疫学杂志，1986；2：252
3 郭峰，虞紫茜，赵中平，等.红细胞免疫功能初步研究.中华医学杂志，1982；62(12)：715
4 李建武，吴中立.硫代巴比妥酸荧光法测定血清和组织脂质过氧化物.第二军医大学学报，1987；8：371
5 LaBrecque DR,Bachur NR.Hepatic stimulator substance:physicochemicalcharacteristics and specificity.
, 百拇医药
Am J Physiol,1982;242:G281
6 LaBrecque DR, Resch LA. Preparation and partial characterization of hepatic regenerative stimulator
substance(ss) from rat liver.J PhysiolLondon, 1975;248:273
7 郝飞，向正居.人胎肝胞质液治疗急性肝衰竭实验研究.第三军医大学学报，1989；11：266
8 潘华珍，冯立明，许彩民，等. 丙二醛对红细胞的作用.生物化学与生物物理学进展，1984；2：34
9 Siegel I, et al. The red cell immune system.Lancet,1981;Ⅱ(8246)：556, 百拇医药