LAK细胞治疗对肝癌患者免疫功能影响的研究
项目负责人:王小众, 350001, 福建医学院附属协和医院消化内科
摘要目的：研究LAK细胞治疗前后免疫功能的改变。
方法：应用人胚胎脾脏及胸腺制备同种异体LAK细胞治疗晚期肝癌30例。在治疗前及治疗10d后检测末梢血T细胞亚群、mIL-2R表达(间接免疫荧光法)、NK细胞活性(125I-UdR释放法)及血清sIL-2R水平(ELISA法)。
结果：治疗后患者末梢血CD4/CD8比值增加(1.11±0.24→1.31±0.25,P<0.01)、NK细胞活性提高(36.4%±24.3%→47.6%±25.1%,P<0.01)、mIL-2R表达阳性率增高(33.3%±7.2%→39.5%±8.4%,P<0.05)、而血清中sIL-2R含量降低[280.8±96.5→248.4±89.4(×103U/L)]。
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结论：LAK细胞治疗可增强肝癌患者的免疫功能。
主题词 淋巴因子激活杀伤细胞;肝癌;T细胞亚群;自然杀伤细胞活性;白细胞介素 Ⅱ 受体
王小众, 郑祥雄, 林谷珍, 陈道纯, 卢贤立.LAK细胞治疗对肝癌患者免疫功能影响的研究.新消化病学杂志,1994;2(4):221-222
AIM The changes of immunologic function were studied by using LAK cells.
METHODS The LAK cells were prepared from the spleen and thymus gland of the fetus. Before and after 10 days of treatment, the T cell subsets, NK cell activity, the expression of mIL-2R in peripheral blood and the level of serum sIL-2R in 30 patients with advanced liver cancer were detected. The T cell subsets and the expression of mIL-2R were detected by indirect immunofl uorescence technique. The NK cell activity was determined by 125I-UdR release assay and the serum level of sIL-2R was studied by ELISA.
, 百拇医药
RESULTS After the treatment of LAK cells, the CD4/CD8 rat io was increased (1.11±0.24→1.31±0.25, P<0.01), the NK cell activity was increased (36.4%±24.3%→47.6%±25.1%,P<0.01), the expression of the mIL-2R was increased (33.3%±7.2%→39.5%±8.4%,P<0.05) and the level of serum sIL-2R was decreased 〔280.8±96.5→248.4±89.4 (×103U/L),P<0.05〕 in those liver cancer patients.
CONCLUSION The treatment with LAK cells can improve the immunol ogic function of the patients with liver cancer.
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Keywords lymphokine-activated killer cells;liver cancer;T cell subsets;natural killer cell activity;interleukin-2 receptor
Wang XZ, Zheng XX, Lin GZ, Chen DC, Lu XL. Effects of LAK cell treatment on immunologic function in patients with liver cancer. Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1994;2(4):221-222
1982年Rosenberg等发现淋巴因子激活杀伤细胞(LAK细胞)以来，LAK细胞治疗实体癌的作用己得到肯定，成为目前肿瘤过继性免疫治疗的一个新的有效方法。我们应用人胚胎脾脏及胸腺制备同种异体LAK细胞治疗晚期肝癌患者，以探讨LAK细胞对肝癌患者体内免疫功能改善的作用，现报道如下。
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1 对象和方法
1.1 对象 原发性肝癌住院患者30例,男26例，女4例；平均年龄49.6岁。所有患者均经病史、体检、生化及影象学检查确诊为晚期肝癌。
1.2 LAK细胞的诱导 取4～7月龄水囊引产胎儿的脾脏与胸腺，剪碎后经胶原酶消化制成细胞悬液，用淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，生理盐水洗涤2次后置含1000U/mL，IL-2，10ng/mL抗CD3单抗的PRMI-1640完全培养基中。37，5% CO2，饱和湿度条件下培养72h，洗涤3次后分装于200mL生理盐水中。每瓶细胞数为1×1010左右，活细胞数90%以上。LAK细胞杀伤活性为28.3%±12.2%。
1.3 治疗方法 应用LAK细胞之日起停止其他肿瘤治疗措施。患者每日静脉滴注LAK细胞悬液200mL，配合每日肌肉注射IL 2 5万U，10d为1个疗程。
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1.4 免疫功能检测 在LAK细胞疗程前后检测患者外周血T细胞亚群、NK细胞活性、膜表面白介素II受体(mIL-2R)表达及血清游离白介素II受体(sIL-2R)含量。外周血T细胞亚群及mIL-2R表达的检测采用间接免疫荧光法；外周血NK细胞活性的检测采用125I-UdR释放法[1]；sIL-2R含量的检测采用酶免疫测定法[2]。
2 结果
30例肝癌患者LAK细胞治疗前后免疫功能检测结果经统计学处理示：患者治疗前后外周血CD4/CD8比值增加，NK细胞活性增强，mIL-2R表达阳性率增高及血清sIL-2R含量降低，均具显著性差异(表1)。表明机体免疫功能得到明显提高，同时患者的临床症状及体征亦出现一定程度的改善。
表1 肝癌患者LAK细胞治疗前后免疫功能状况
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* P<0.05,**P<0.01, vs 治疗前后。
3 讨论
毛宁 et al[3]研究表明LAK细胞具有广谱杀瘤活性，对体外培养的人肝癌细胞系、肺癌细胞系及红白血病细胞系均有明显杀伤作用，而对正常细胞无细胞毒性。临床研究亦表明其对体内多种实体瘤具有明显治疗效果[4]。因而LAK细胞是目前肿瘤患者过继性免疫治疗的主要措施之一。有研究表明LAK细胞广谱杀瘤的作用系因肿瘤表面存在一种可被LAK细胞识别的分子，LAK细胞通过与肿瘤细胞结合产生杀伤作用[5]。肝癌患者机体免疫功能低下已有报道[1，2]。本研究应用LAK细胞治疗30例原发性肝癌，结果表明应用LAK细胞治疗患者后其外周血CD4/CD8比值增加(P<0.01)、NK细胞活性明显提高(P<0.01)、mIL-2R表达阳性率增高(P<0.05)及血清sIL-2R含量降低(P<0.05)，说明治疗后患者机体免疫功能得到明显提高，亦提示LAK细胞对肝癌患者临床免疫治疗具有积极的意义。
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4 参考文献1 王小众，林谷珍，卢贤立，等. 肝癌患者外周血T细胞亚群NK活性及IL-2R表达的研究. 新消化病学杂志，1993；1(2)：77-78
2 王小众，黄淑玉，林谷珍. 肝癌与肝硬变患者血清sIL-2R含量的研究. 新消化病学杂志，1993；1(4)：201-202
3 毛宁，周生，董燕，等. LAK细胞广谱杀瘤活性的观察. 中国微生物学和免疫学杂志，1993；13(2)：112-114
4 Rosenberg SA. Observation on the systemic administration of autologousLAK cells and IL-2 to patients
with metastases. J Exp Med,1985；313(23)：1485-1491
5 Rayner AA. Lymphokine-activated killer (LAK) cell phenomenon. IV. Lysisby LAK cell clones of fresh
human tumor cells from autologous and multipleallogeneic tumors. J Natl Cancer Inst, 1985；75(1)：67-83, 百拇医药(王小众,郑祥雄,林谷珍,陈道纯,卢贤立)
摘要目的：研究LAK细胞治疗前后免疫功能的改变。
方法：应用人胚胎脾脏及胸腺制备同种异体LAK细胞治疗晚期肝癌30例。在治疗前及治疗10d后检测末梢血T细胞亚群、mIL-2R表达(间接免疫荧光法)、NK细胞活性(125I-UdR释放法)及血清sIL-2R水平(ELISA法)。
结果：治疗后患者末梢血CD4/CD8比值增加(1.11±0.24→1.31±0.25,P<0.01)、NK细胞活性提高(36.4%±24.3%→47.6%±25.1%,P<0.01)、mIL-2R表达阳性率增高(33.3%±7.2%→39.5%±8.4%,P<0.05)、而血清中sIL-2R含量降低[280.8±96.5→248.4±89.4(×103U/L)]。
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结论：LAK细胞治疗可增强肝癌患者的免疫功能。
主题词 淋巴因子激活杀伤细胞;肝癌;T细胞亚群;自然杀伤细胞活性;白细胞介素 Ⅱ 受体
王小众, 郑祥雄, 林谷珍, 陈道纯, 卢贤立.LAK细胞治疗对肝癌患者免疫功能影响的研究.新消化病学杂志,1994;2(4):221-222
AIM The changes of immunologic function were studied by using LAK cells.
METHODS The LAK cells were prepared from the spleen and thymus gland of the fetus. Before and after 10 days of treatment, the T cell subsets, NK cell activity, the expression of mIL-2R in peripheral blood and the level of serum sIL-2R in 30 patients with advanced liver cancer were detected. The T cell subsets and the expression of mIL-2R were detected by indirect immunofl uorescence technique. The NK cell activity was determined by 125I-UdR release assay and the serum level of sIL-2R was studied by ELISA.
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RESULTS After the treatment of LAK cells, the CD4/CD8 rat io was increased (1.11±0.24→1.31±0.25, P<0.01), the NK cell activity was increased (36.4%±24.3%→47.6%±25.1%,P<0.01), the expression of the mIL-2R was increased (33.3%±7.2%→39.5%±8.4%,P<0.05) and the level of serum sIL-2R was decreased 〔280.8±96.5→248.4±89.4 (×103U/L),P<0.05〕 in those liver cancer patients.
CONCLUSION The treatment with LAK cells can improve the immunol ogic function of the patients with liver cancer.
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Keywords lymphokine-activated killer cells;liver cancer;T cell subsets;natural killer cell activity;interleukin-2 receptor
Wang XZ, Zheng XX, Lin GZ, Chen DC, Lu XL. Effects of LAK cell treatment on immunologic function in patients with liver cancer. Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1994;2(4):221-222
1982年Rosenberg等发现淋巴因子激活杀伤细胞(LAK细胞)以来，LAK细胞治疗实体癌的作用己得到肯定，成为目前肿瘤过继性免疫治疗的一个新的有效方法。我们应用人胚胎脾脏及胸腺制备同种异体LAK细胞治疗晚期肝癌患者，以探讨LAK细胞对肝癌患者体内免疫功能改善的作用，现报道如下。
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1 对象和方法
1.1 对象 原发性肝癌住院患者30例,男26例，女4例；平均年龄49.6岁。所有患者均经病史、体检、生化及影象学检查确诊为晚期肝癌。
1.2 LAK细胞的诱导 取4～7月龄水囊引产胎儿的脾脏与胸腺，剪碎后经胶原酶消化制成细胞悬液，用淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，生理盐水洗涤2次后置含1000U/mL，IL-2，10ng/mL抗CD3单抗的PRMI-1640完全培养基中。37，5% CO2，饱和湿度条件下培养72h，洗涤3次后分装于200mL生理盐水中。每瓶细胞数为1×1010左右，活细胞数90%以上。LAK细胞杀伤活性为28.3%±12.2%。
1.3 治疗方法 应用LAK细胞之日起停止其他肿瘤治疗措施。患者每日静脉滴注LAK细胞悬液200mL，配合每日肌肉注射IL 2 5万U，10d为1个疗程。
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1.4 免疫功能检测 在LAK细胞疗程前后检测患者外周血T细胞亚群、NK细胞活性、膜表面白介素II受体(mIL-2R)表达及血清游离白介素II受体(sIL-2R)含量。外周血T细胞亚群及mIL-2R表达的检测采用间接免疫荧光法；外周血NK细胞活性的检测采用125I-UdR释放法[1]；sIL-2R含量的检测采用酶免疫测定法[2]。
2 结果
30例肝癌患者LAK细胞治疗前后免疫功能检测结果经统计学处理示：患者治疗前后外周血CD4/CD8比值增加，NK细胞活性增强，mIL-2R表达阳性率增高及血清sIL-2R含量降低，均具显著性差异(表1)。表明机体免疫功能得到明显提高，同时患者的临床症状及体征亦出现一定程度的改善。
表1 肝癌患者LAK细胞治疗前后免疫功能状况
| 免疫指标 | 治疗前 | 治疗后 |
| CD3 (%) | 61.4±8.2 | 62.7±9.1 |
| CD4 (%) | 42.2±8.5 | 43.6±8.7 |
| CD8 (%) | 38.4±5.7 | 33.2±5.3* |
| CD4/CD8 | 1.11±0.24 | 1.31±0.25** |
| NK细胞活性 (%) | 36.4±24.3 | 47.6±25.1** |
| mIL-2R (%) | 33.3±7.2 | 39.5±8.4* |
| sIL-2R | 280.8±96.5 | 248.4±89.4* |
| (×103U/L) |
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* P<0.05,**P<0.01, vs 治疗前后。
3 讨论
毛宁 et al[3]研究表明LAK细胞具有广谱杀瘤活性，对体外培养的人肝癌细胞系、肺癌细胞系及红白血病细胞系均有明显杀伤作用，而对正常细胞无细胞毒性。临床研究亦表明其对体内多种实体瘤具有明显治疗效果[4]。因而LAK细胞是目前肿瘤患者过继性免疫治疗的主要措施之一。有研究表明LAK细胞广谱杀瘤的作用系因肿瘤表面存在一种可被LAK细胞识别的分子，LAK细胞通过与肿瘤细胞结合产生杀伤作用[5]。肝癌患者机体免疫功能低下已有报道[1，2]。本研究应用LAK细胞治疗30例原发性肝癌，结果表明应用LAK细胞治疗患者后其外周血CD4/CD8比值增加(P<0.01)、NK细胞活性明显提高(P<0.01)、mIL-2R表达阳性率增高(P<0.05)及血清sIL-2R含量降低(P<0.05)，说明治疗后患者机体免疫功能得到明显提高，亦提示LAK细胞对肝癌患者临床免疫治疗具有积极的意义。
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4 参考文献1 王小众，林谷珍，卢贤立，等. 肝癌患者外周血T细胞亚群NK活性及IL-2R表达的研究. 新消化病学杂志，1993；1(2)：77-78
2 王小众，黄淑玉，林谷珍. 肝癌与肝硬变患者血清sIL-2R含量的研究. 新消化病学杂志，1993；1(4)：201-202
3 毛宁，周生，董燕，等. LAK细胞广谱杀瘤活性的观察. 中国微生物学和免疫学杂志，1993；13(2)：112-114
4 Rosenberg SA. Observation on the systemic administration of autologousLAK cells and IL-2 to patients
with metastases. J Exp Med,1985；313(23)：1485-1491
5 Rayner AA. Lymphokine-activated killer (LAK) cell phenomenon. IV. Lysisby LAK cell clones of fresh
human tumor cells from autologous and multipleallogeneic tumors. J Natl Cancer Inst, 1985；75(1)：67-83, 百拇医药(王小众,郑祥雄,林谷珍,陈道纯,卢贤立)