PCR法检测血清胃癌相关抗原
解放军222医院 1消化内科 2检验科 吉林省吉林市 132011任彩文，女，1950-01-15生，吉林省吉林市，汉族.1977年哈尔滨医科大学毕业，消化内科主治医师，副主任，沈阳军区军事医学科技消化专业委员，吉林市医学会消化内镜委员，秘书，1993年沈阳军区评为优秀中青年人才，并获奖励基金，发表论文16篇.
项目负责人 任彩文, 132011, 吉林省吉林市, 市越山路47号， 解放军222医院消化内科.
Tel: 043- 2018335收搞日期 1995-05-20
Detection of serum gastric cancer associated antigen by using PCR
, http://www.100md.com
Cai-Wen Ren, Li-Rong You, Fu-Mei Wang, Si-Feng Yang and BoLiu
Department of Gastroenterology and Laboratory, Chinese PLA 222 Hospital, Jiling 132011 China
Abstract
AIMS To detect the serum gastric cancer associated antigen by using polymerase chain reaction(PCR).
METHODS Thirty-six endoscopically and pathologically proved gastric cancer patients (age 46-76 averaging 62.5 ±5.3 years; males 24, females 12) and 30 non-gastric cancer associated antigen was detected by using PCR with 9 operational procedures, altogether 30 circules, each including degeneration of DNA, annealing of primer and extension of chain.
, http://www.100md.com
RESULTS Serum gastric cancer associated antigen was positive in 29 out of 36 patients with gastric cancer (80.5%), and only in 2(6.0%) out of 30 controls. The difference was very significant (P<0.01).
CONCLUSIONS PCR method in serologic diagnosis of gastric cancer is till now a useful one with great spead, strong specificity and high sensitivity, because tumour genes or DNA can be amplifed more than millionfold.
, http://www.100md.com
Keywords stomach neoplasms tumor antigens immunoenzyme technics
Ren CW, You LR, Wang FM, Yang SF, Liu B. Detection of serum gastric cancer associated antigen by using PCR.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi, 1996；4(2)：76-77
摘要
目的 应用聚合酶链反应(PCR)检测胃癌血清中的肿瘤相关抗原.
方法 常规操作9个步骤共30个循环，每一循环包括DNA变性，引物退火及链的延伸.
, http://www.100md.com
结果 36例胃癌血清呈阳性者29例(80.5%)，30例对照组血清呈阳性者2例(6%)，两者对比差异显著(P<0.01).
结论 PCR技术在胃癌血清学诊断的应用是迄今速度快，特异性强，敏感性高的检测方法.
关键词 免疫酶技术; 胃肿瘤; 肿瘤抗原
任彩文, 游丽容, 王福美, 杨思凤, 刘波.PCR法检测血清胃癌相关抗原.新消化病学杂志，1996；4(2)：76-77
目前胃癌的病因学研究尚无重大突破，故早期诊断对提高其生存率有重要作用，而早期肿瘤癌灶小，其排入血清中的肿瘤抗原含量极微，应用常规检测手段很难检出早期肿瘤.现应用聚合酶链反应(PCR)技术，可使肿瘤的基因或DNA在数小时内扩增达百万倍以上，敏感性较免疫放射法高1000倍.为迄今最敏感的检测方法.我院于1994年10月-1995年3月应用PCR扩增技术检测胃癌患者血清36例，结果报告如下.
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 抽取经内镜检查病理或手术后证实为胃癌的患者血清36例，其中男24例，女12例，年龄46-76岁，平均62.5±5.3岁.另抽取对照组血清30例，其中慢性胃炎25例，食管平滑肌瘤1例，肺癌1例，膀胱癌1例，胰头癌1例，肝癌1例.
1.2 主要设备 PCR扩增仪，紫外反射透射仪，高速离心机，旋涡混合器，电泳仪，电泳槽.微量加样器等.免疫PCR血清诊断试剂盒由第四军医大学提供，试剂盒由胃癌单抗-基因嵌合体，PCR扩增引物，四种脱氧三磷酸核苷，DNA聚合酶，PCR扩增缓冲系统，ELISA反应板条等组成.试剂盒放-20℃冰柜保存.
1.3 方法 抽取胃癌及对照组患者全血每例3ml，分离的血清吸入新购1.5ml离心管贮存，-20℃保留，集中检测.PCR技术根据待扩增序列两端所设计引物使一段顺序的DNA进行扩增.操作按9个步骤进行，每一循环包括DNA变性，引物退火及链的延伸.热变性通常在95℃几分钟，当模板DNA成为单链时，反应物温度降至45-55℃ 30s-3min使得引物与模板两端DNA序列配对随后温度升至72℃，在Taq酶存在下，在下一个30s-3min时DNA链开始延伸.最终在95℃，30s-2min时使双链DNA解成单链，进而进入下一个循环，扩增挎贝数目呈指数增长，30个循环后，靶序列DNA扩增230(约为10亿).PCR产物通常用琼脂糖凝胶电泳经溴化乙绽染色，紫外灯下观察记录.判断标准：出现约400 bpDNA红带即为阳性(20%琼脂DNA电泳时紧靠指示剂后的DNA带约为330-350bp)，未见DNA带为阴性.
, http://www.100md.com
2 结果
经PCR技术扩增后，36例胃癌血清呈阳性29例(80.5%)，其中5例胃癌伴转移者呈强阳性，7例贲门癌均为阴性.非胃癌血清对照组30例中28例呈阴性，其中2例(1例膀胱癌肝转移，1例食管平滑肌瘤，呈弱阳性，占6%.
3 讨论
从以上检测结果推测：胃癌伴转移者血清呈现强阳性，分析这些患者血清中存在肿瘤相关抗原数量比未转移者多，而7例贲门癌均呈阴性，提示可能贲门癌血清肿瘤抗原对本法检测不敏感.非胃癌对照组中，1例膀胱癌和1例食管平滑肌瘤呈弱阳性，可能为PCR污染原因，也可能膀胱癌伴转移后血清中存在胃癌相关抗原，待进一步随访检测.本文检测的胃癌组血清阳性率达80.5%，对照组阳性率6%，二者差异显著，说明PCR技术的敏感性对临床有诊断价值.四军医大曾分别应用免疫-PCR和ELISA法检测胃印戒细胞癌株KATOⅢ上肿瘤相关抗原，结果表明免疫-PCR技术可检测到20个KATOⅢ细胞，而ELISA法呈阳性结果时所需KATOⅢ细胞为2×105/ml，即免疫-PCR技术较ELISA敏感性高104倍.此外，实验表明免疫-PCR技术其敏感性、诊断应用性优于CEA测定，综上所述：PCR技术在胃癌血清诊断的应用是迄今敏感性高，特异性强，速度快(溴化乙锭法：6-12h；印迹/杂交法：24-48h)的检测方法，对胃癌高发区人群的普查很有实际意义.PCR的不足之处，有时出现PCR污染，故在抽取血清操作过程注意加样枪头不要引起交叉污染，以确保检测的准确性., http://www.100md.com(任彩文1, 游丽容2,王福美2, 杨思凤1, 刘波1)
项目负责人 任彩文, 132011, 吉林省吉林市, 市越山路47号， 解放军222医院消化内科.
Tel: 043- 2018335收搞日期 1995-05-20
Detection of serum gastric cancer associated antigen by using PCR
, http://www.100md.com
Cai-Wen Ren, Li-Rong You, Fu-Mei Wang, Si-Feng Yang and BoLiu
Department of Gastroenterology and Laboratory, Chinese PLA 222 Hospital, Jiling 132011 China
Abstract
AIMS To detect the serum gastric cancer associated antigen by using polymerase chain reaction(PCR).
METHODS Thirty-six endoscopically and pathologically proved gastric cancer patients (age 46-76 averaging 62.5 ±5.3 years; males 24, females 12) and 30 non-gastric cancer associated antigen was detected by using PCR with 9 operational procedures, altogether 30 circules, each including degeneration of DNA, annealing of primer and extension of chain.
, http://www.100md.com
RESULTS Serum gastric cancer associated antigen was positive in 29 out of 36 patients with gastric cancer (80.5%), and only in 2(6.0%) out of 30 controls. The difference was very significant (P<0.01).
CONCLUSIONS PCR method in serologic diagnosis of gastric cancer is till now a useful one with great spead, strong specificity and high sensitivity, because tumour genes or DNA can be amplifed more than millionfold.
, http://www.100md.com
Keywords stomach neoplasms tumor antigens immunoenzyme technics
Ren CW, You LR, Wang FM, Yang SF, Liu B. Detection of serum gastric cancer associated antigen by using PCR.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi, 1996；4(2)：76-77
摘要
目的 应用聚合酶链反应(PCR)检测胃癌血清中的肿瘤相关抗原.
方法 常规操作9个步骤共30个循环，每一循环包括DNA变性，引物退火及链的延伸.
, http://www.100md.com
结果 36例胃癌血清呈阳性者29例(80.5%)，30例对照组血清呈阳性者2例(6%)，两者对比差异显著(P<0.01).
结论 PCR技术在胃癌血清学诊断的应用是迄今速度快，特异性强，敏感性高的检测方法.
关键词 免疫酶技术; 胃肿瘤; 肿瘤抗原
任彩文, 游丽容, 王福美, 杨思凤, 刘波.PCR法检测血清胃癌相关抗原.新消化病学杂志，1996；4(2)：76-77
目前胃癌的病因学研究尚无重大突破，故早期诊断对提高其生存率有重要作用，而早期肿瘤癌灶小，其排入血清中的肿瘤抗原含量极微，应用常规检测手段很难检出早期肿瘤.现应用聚合酶链反应(PCR)技术，可使肿瘤的基因或DNA在数小时内扩增达百万倍以上，敏感性较免疫放射法高1000倍.为迄今最敏感的检测方法.我院于1994年10月-1995年3月应用PCR扩增技术检测胃癌患者血清36例，结果报告如下.
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 抽取经内镜检查病理或手术后证实为胃癌的患者血清36例，其中男24例，女12例，年龄46-76岁，平均62.5±5.3岁.另抽取对照组血清30例，其中慢性胃炎25例，食管平滑肌瘤1例，肺癌1例，膀胱癌1例，胰头癌1例，肝癌1例.
1.2 主要设备 PCR扩增仪，紫外反射透射仪，高速离心机，旋涡混合器，电泳仪，电泳槽.微量加样器等.免疫PCR血清诊断试剂盒由第四军医大学提供，试剂盒由胃癌单抗-基因嵌合体，PCR扩增引物，四种脱氧三磷酸核苷，DNA聚合酶，PCR扩增缓冲系统，ELISA反应板条等组成.试剂盒放-20℃冰柜保存.
1.3 方法 抽取胃癌及对照组患者全血每例3ml，分离的血清吸入新购1.5ml离心管贮存，-20℃保留，集中检测.PCR技术根据待扩增序列两端所设计引物使一段顺序的DNA进行扩增.操作按9个步骤进行，每一循环包括DNA变性，引物退火及链的延伸.热变性通常在95℃几分钟，当模板DNA成为单链时，反应物温度降至45-55℃ 30s-3min使得引物与模板两端DNA序列配对随后温度升至72℃，在Taq酶存在下，在下一个30s-3min时DNA链开始延伸.最终在95℃，30s-2min时使双链DNA解成单链，进而进入下一个循环，扩增挎贝数目呈指数增长，30个循环后，靶序列DNA扩增230(约为10亿).PCR产物通常用琼脂糖凝胶电泳经溴化乙绽染色，紫外灯下观察记录.判断标准：出现约400 bpDNA红带即为阳性(20%琼脂DNA电泳时紧靠指示剂后的DNA带约为330-350bp)，未见DNA带为阴性.
, http://www.100md.com
2 结果
经PCR技术扩增后，36例胃癌血清呈阳性29例(80.5%)，其中5例胃癌伴转移者呈强阳性，7例贲门癌均为阴性.非胃癌血清对照组30例中28例呈阴性，其中2例(1例膀胱癌肝转移，1例食管平滑肌瘤，呈弱阳性，占6%.
3 讨论
从以上检测结果推测：胃癌伴转移者血清呈现强阳性，分析这些患者血清中存在肿瘤相关抗原数量比未转移者多，而7例贲门癌均呈阴性，提示可能贲门癌血清肿瘤抗原对本法检测不敏感.非胃癌对照组中，1例膀胱癌和1例食管平滑肌瘤呈弱阳性，可能为PCR污染原因，也可能膀胱癌伴转移后血清中存在胃癌相关抗原，待进一步随访检测.本文检测的胃癌组血清阳性率达80.5%，对照组阳性率6%，二者差异显著，说明PCR技术的敏感性对临床有诊断价值.四军医大曾分别应用免疫-PCR和ELISA法检测胃印戒细胞癌株KATOⅢ上肿瘤相关抗原，结果表明免疫-PCR技术可检测到20个KATOⅢ细胞，而ELISA法呈阳性结果时所需KATOⅢ细胞为2×105/ml，即免疫-PCR技术较ELISA敏感性高104倍.此外，实验表明免疫-PCR技术其敏感性、诊断应用性优于CEA测定，综上所述：PCR技术在胃癌血清诊断的应用是迄今敏感性高，特异性强，速度快(溴化乙锭法：6-12h；印迹/杂交法：24-48h)的检测方法，对胃癌高发区人群的普查很有实际意义.PCR的不足之处，有时出现PCR污染，故在抽取血清操作过程注意加样枪头不要引起交叉污染，以确保检测的准确性., http://www.100md.com(任彩文1, 游丽容2,王福美2, 杨思凤1, 刘波1)