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编号:10694431
http://www.100md.com 1996年7月15日 《世界华人消化杂志》 1996年第7期
     1解放军肝病研究所 北京市 100700 北京军区总医院2外一科 3检验科

    项目负责人 安萍,100700,北京市,解放军肝病研究所 收搞日期 1995-01-13 接收日期 1995-03-20

    The value PCR direct detection in HBsAg negative liver diseases

    Ping An, Shi-Yong Li,and Ling-Xia Han

    Chinese PLA institute of liver disease, Beijing 100700 China
, 百拇医药
    Abstract

    AIMS To study the HBV carriers in HBsAg negative patients with liver disease and natural people.

    METHODS HBV DNA were measured by DNA polymerase chain reaction serum direct assay(PCR) in 231 patients with liver pathology and 240 HBsAg negative natural people as controls.

    RESULTS The rates of positive of HBV DNA in patients and controls were 33.3%(78/231) and 11.5%(28/240), P<0.01. In simple ALT elevation persons it was the highest (66.7%, 10/15), and chronic hepatitis(CH), 41.9%(13/31), chronic persistent hepatitis(CPH), 38.4%(5/13), liver cirrhosis(LC), 30.7%(52/169) and acute 18.7%(3/16). There are significant difference between the simple ALT raised, LC and acute, P<0.01, in order.
, 百拇医药
    CONCLUSIONS There are HBV carriers in both HBsAg negative liver pathology patients and natural people.

    Subject headings polymerase chain reaction hepatitis B/diagnosis carrier state/diagnosis hepatitis B virus/genetics DNA, viral/analysis hepatitis B surface antigens/analysis

    An P, Li SY,Han LX.The value PCR direct detection in HBsAg negative liver diseases.Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1996；4(7)：385-386
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    摘要

    目的 研究HBsAg阴性肝病患者和自然人群中乙肝病毒(HBV)携带者.

    方法 采用DNA PCR直接法测定急、慢性肝炎，肝硬变和单项ALT增高者共231例HBsAg阴性患者中HBV DNA，240例HBV标志阴性的自然人群对照.

    结果 检出率在患者组和对照组分别为33.7%(78/231)和11.5%(28/240)，P<0.01. 单项ALT增高组最高，达66.7%(10/15)，其他依次为慢肝组(CH) 41.9%(13/31)、肝硬变组(LC)30.7%(52/169)和急肝组18.7%(3/10). 单项ALT增高组与LC、急肝组有显著差异(P<0.01).

    结论 在HBsAg阴性的肝病患者和自然人群中均有HBV携带者.
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    主题词 聚合酶链反应;肝炎，乙型/诊断;带病原状态/诊断;肝炎病毒，乙型/遗传学;DNA，病毒/分析;肝炎表面抗原，乙型/分析

    安萍,李世拥,韩玲霞PCR直接法检测HBsAg阴性肝病的价值.新消化病学杂志，1996；4(7)：385-386

    我国是HBV高感染区，多数HBsAg阴性肝病患者存在抗-HBs，e抗-HBe和抗-HBc状态.作者对固相放射免疫法(RIA)检测血清中HBsAg阴性的肝病患者和正常人，采用PCR技术，检测血清HBV DNA，报道如下.

    1 对象和方法

    1.1 标本 ①肝病组：系我院的血清标本.急性肝炎16例，单项ALT增高15例，慢性肝炎(CH)31例，肝硬变(LC)169例.诊断标准按1990年上海全国病毒性肝炎会议.②正常人组系体检的某单位职工共240例，其中男137人，女103人，年龄20-70岁，平均43岁.所有受试者血清ALT，心肺肾功能正常，无肝炎史.HBV相关标志检测，均阴性136例，单项抗-HBc阳性104例.
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    1.2 方法 PCR试剂盒由上海肿瘤研究所生产[1].HBV核心蛋白编码区的一组引物A及B(A：459-432；B：1039-1061)，按说明进行.HBsAg,抗HBs和抗HBc为RIA法，北京生化免疫试剂中心生产(920501).HBeAg，抗HBe为酶联免疫法，购自北医大肝炎试剂中心.操作按说明书进行.

    2 结果

    肝病组和正常人组的HBV DNA检出率分别为33.7%(78/231)和11.5%(28/240)，二者间有显著差异(P<0.01，表1).单项ALT增高的患者检出率最高，达66.7%(10/15)，以后依次为CH组41.9%，LC组30.7%和急性肝炎组18.7%；单项ALT增高组与LC组和急性肝炎组比有显著差异(P<0.01).提示，不明原因的单项ALT增高者乙型肝炎的可能性很大，但他们处于不同的免疫状态，用常规免疫学方法很难检出.根据HBV相关抗体：抗-HBs，抗-HBe和抗-HBc 3种抗体不同的组合，其HBV DNA的检出率也不尽相同.在肝病组单项抗HBc组检出率最高，达53.8%(28/52)
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    3项抗体均阴性组检出率为26.3%，单项抗HBs组检出率最低为14.7%.而在正常人组单项抗HBc组检出率仅7.6%(8/104)，3项抗体全阴组为14.7%.经统计学处理，在肝病组，单项抗-HBc阳性组与抗-HBc阴性组(5，6，7组)有显著性差异(P<0.01).肝病组和正常组中单项抗-HBc的HBV DNA也有非常显著差异(P<0.01,表2).

    表1 HBV DNA在不同HBsAg阴性人群中检出率
组别nHBV DNA阳性%
正常2402811.5
肝病2317833.7d
ALT↑151066.7
CH311341.9
LC1695230.7b
急性肝炎16318.7b

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    bP<0.01，与ALT↑组比；χ2=7.9；dP<0.01，与正常组比.

    表2 HBV DNA在不同HBV相关抗体中检出率
分组抗-HBs抗-HBe抗-HBcnHBV DNA
n%
1＇--+522853.8
1--+10487.6*
2-++311135.4
3+-+321031.2
4+++20945.0
5++-5120.0b
6+--34414.7b
7---571526.3b
7＇---1362014.7b

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    bP<0.01； χ2=14.46,与1组比；1＇，7＇代表正常人组.

    3 讨论

    PCR技术敏感性高，特异性强，操作简便.应用这一技术，已发现原来经斑点杂交实验检测为HBV DNA阴性的血清标本，经PCR技术检测为阳性.他们含有很微量的HBV DNA分子，包括抗HBe阳性及个别抗HBs阳性的病例[2].我们的结果表明，在HBsAg阴性的肝炎患者是单项ALT增高者检出率最高，达66.7%，以后依次为CH和LC和急性肝炎，检出率分别为41.9%，30.7%和18.7%.在正常人群中尚有11.5%的HBV DNA阳性率.本组病例中，肝病组中单项抗HBc者HBV DNA阳性率高达53%，正常人组仅为7.6%的结果恰恰说明，有肝病的单项抗HBc阳性者有50%以上是乙肝病毒携带者；而在正常人群中绝大多数单项抗HBc者是乙肝既往感染的免疫反应残留.正常人群中单项抗HBc阳性者经乙肝血源疫苗注射后，抗HBs阳转率(86.5%)和平均抗体滴度(76.62±34.33)均高于HBV标志全阴组(76.5%，68.50±37.37)，这应考虑为单项抗-HBc阳性者大多可产生活跃的回忆免疫应答[3,4].骆抗先等[5]曾对正常人群中单一抗-HBc阳性HBV DNA阳性者进行了1-4年随访，血清HBV DNA阳性和单一抗HBc阳性大多继续存在.表明他们是未检出的HBsAg慢性无症状HBV携带者，继续保持HBV的低水平复制.
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    4 参考文献

    1 陈渊卿，严根宝，蒲瑞莲，等.DNA聚合酶链反应血清直接法测定HBV DNA.中华传染病杂志，1990；8(1)：6-8

    2 Zhang YY, Hansson BG, Kuo LS, et al. Hepatitis B virus DNA in serum and liver is commonly found in Chinese patients with chronic

    liver disease despite the presence of antibodies to HBsAg. Hepatology, 1992;17(6):538-544

    3 安萍.单项抗HBc阳性者对血源乙肝疫苗的应答.世界华人肝病学术研讨会论文集.黄山.北京四环科技印刷厂，1994：96-97

    4 骆抗先，梁炽森.乙型肝炎病毒标志物.不典型的血清学表现的分析.临床肝胆病杂志，1993；9(4)：186-188

    5 骆抗先.单一抗HBc阳性个例的血清传染性和随访.肝脏病杂志，1994；1(1)：5-7, 百拇医药