PCR检测献血员乙肝感染状况
解放军457医院 湖北省武汉市 430012
项目负责人:欧阳鸿
收稿日期:1996-07-06
Investigation of HBV infection in blood donors with PCR
Yong-Hong Ou, Qi-Xiang Yao, An-Na Kang, Zhao-Hua Jiang and Yong Niu
457 Hospital of PLA, Wuhan 430012, Hubei Province, China
Abstract
, 百拇医药
AIM To investigate HBV infection in 290 blood donors with PCR.
METHODS HBV_DNA was detected 290 blood samples from 290 normal blood donors by the method of PCR.
RESULTS All 290 blood samples showed negative HBsAg and HBeAg in ELISA with normal serum ALT and icterus index. Among them 167 samples showed positive reaction of HBVM including 80 with positive anti_HBs, 50 positive anti_HBc, 19 positive a anti_HBs and anti_HBc, 12 positive anti_HBe and anti_HBc and 6 positive anti_HBs, anti_HBe and anti_HBc. The positive rate of HBV_DNA in each group was 8.8%(7/80), 26%(13/50). 10.5%(2/19), 75.0%(9/12) and 33.3%(2/6)， respectively. Apart from HBV_DNA was positive in 123 blood samples with negative HBVM. The positive rate of HBV_DNA in this group was 1.6% (2/123). And the total positivity rate of HBV DNA in all 290 blood samples was 12.1%(35/290) with PCR examination.
, 百拇医药
CONCLUSION HBV infection can not be excluced in legal blood d onors.
Subject headings Blood donors;Hepatitis B/diagnosis;Hepatitis B virus/genetics;DNA, viral/analysis
Ou YH, Yao QX, Kang AN, Jiang ZH,Niu Y.Investigation of HBV infection in blood donors with PCR.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi, 1997；5(2)：108-109
摘要
, 百拇医药
目的 对部分献血员中乙型肝炎感染状况进行调查.
方法 用PCR法对检查合格的290份献血血样进行HBV_DNA检测.
结果 本组290份血样中HBsAg，HBeAg全部呈阴性.167例HBVM阳性；其中80例单项抗HBs阳性，50例单项抗HBc阳性，19例抗HBs和HBc两项阳性，12例抗HBe和抗HBc两项阳性；6例抗HBs，抗HBe和抗HBc三项阳性，而HBV-DNA的阳性率在各组中分别为88%(7/80)，26.0%(13/50)，10.5%(2/19)，75.0%(9/12)，33.3%(2/6).123例HBVM阴性，HBV-DNA的阳性率为1.6%(2/123).290例中HBV-DNA的总检出率为12.1%(35/290).
结论 合法献血员中存在着乙肝病毒感染者.
, 百拇医药
主题词 供血者;肝炎，乙型/诊断;肝炎病毒，乙型/遗传学;DNA，病毒/分析
欧阳鸿,姚启攵湘,亢安娜,姜昭华,牛勇.PCR检测献血员乙肝感染状况.新消化病学杂志,1997；5(2)：108-109
我国是乙型病毒性肝炎的高发区.乙型肝炎的主要传播途径之一是经血液及血液制品传播. 虽然目前已采用了许多防范措施，输血后肝炎的发生仍屡见不鲜，最近几年迅速发展起来的聚合酶链反应(PCR)技术，有着极高的灵敏性和特异性，可检出血中1fg水平的HBV-DNA，接近病毒感染的最低血清感染水平.作者用PCR法对检查合格献血员290例的乙肝病毒感染状况进行了初步分析.
1 对象和方法
1.1 对象 按《中国生物制品规程》一部，1990年版，中华人民共和国卫生部所规定的献血员体检及化验标准.检查合格的献血员，随机抽样290例，其中男172例，女118例；年龄21岁～45岁，平均33岁.取该批献血员当天献血的血样为标本，检测血清ALT及黄疸指数.全部标本经ELISA检测HBsAg，抗HBs，HBeAg,抗HBe和抗HBc(试剂盒由华美公司提供).
, 百拇医药
1.2 方法 全部标本经PCR法检测HBV-DNA(试剂盒由北京医科大学人民医院肝研所提供)，操作按说明书要求进行.取扩增产物10μl在含0.5μg/ml溴化乙啶(EB)的2%琼脂糖中电泳20min，在紫外线检测仪下观察泳动区带，以Hae PGEM作分子量标志，以190bp处出现的区带为HBV_DNA阳性.为防止污染，每次试验前严格消毒所用器械，试剂均为新鲜配制；所用试管、吸嘴、反应管均为一次性使用，每一步骤更换一次.每批试验均设阳性，阴性，空白对照并行操作.
2 结果
本组290例献血员ALT及黄疸指数均为正常水平；HBsAg，HBeAg全部阴性.其中123例(42.4%)乙肝病毒标志五项全部呈阴性结果；80例(27.6%)单项抗HBs阳性；50例(172%)单项抗HBc阳性；19例(6.6%)抗HBs与抗HBc两项阳性；12例(4.1%)抗HBe和抗HBc两项阳性；6例(2.1%)抗HBs，抗HBe与抗HBc三项阳性. 经PCR法检测HBV_DNA阳性者在单项抗HBs(+)中为7/80(8.8%)，单项抗HBc(+)中为13/50(26.0%)，抗HBs与抗HBc二项阳性中为2/19(10.5%)，抗HBe与抗HBc二项阳性中为9/12(750%)，抗HBs，抗HBe与抗HBc三项阳性中为2/6(33.0%)，HBV标志五项全部阴性者中为2/123(1.6%)，290例中HBV_DNA的总检出率为35/290(12.1%)，表1.
, 百拇医药
表1 乙肝病毒五项标志与HBV_DNA的关系
, 百拇医药
3 讨论
据WHO收集世界各国的资料表明，输血后乙肝的发病率为3.7%，这与筛选献血员的方法及方法的灵敏度有很大关系.HBV_DNA是HBV感染性的基础，仅有HBV_DNA就可以引起HBV感染[1].目前一般采用ELISA等方法检测血清中HBsAg阳性与否来做为筛选献血员的主要依据.近年来随着PCR技术的迅速发展，对HBV的认识也越来越深入，仅以血清HBsAg阳性与否做为判断献血员能否献血，是远远不够的. 本组290例献血员按前述《规程》指定方法检查，HBsAg全部阴性，ALT全部正常，属献血合格标准.但经乙肝病毒五项标志检查后发现有30%(87/290)的献血员存在着乙肝病毒感染指标阳性.其中抗HBe与抗HBc二项阳性者为4.1%(12/290)，这12例中HBV_DNA(+)占75%(9/12).不少学者近来相继报道，HBeAg(-)，抗HBe(+)并不意味着病毒复制已经停止，而是因为HBV前C区基因序列1896位的核苷酸变异，出现终止密码，导致HBcAg不能表达，但病毒本身的复制却仍在持续[2-3]，此时血液仍具有传染性.王爱莲等[4]指出，在HBeAg(-)/抗HBe(+)的急慢性肝炎，LC等患者中约有78%～85%的人存在着前C区基因变异.本组抗HBe，抗HBc两项阳性者中HBV_DNA(+)高达75%，与文献报道相近，因此我们认为这部分人很可能患有慢性肝炎.HBsAg阴性的原因可能是含量较低，用常规方法不易测出，而造成这部分人漏检. 流行病学调查证实[5]，输入单项抗HBc(+)的血液亦可引发乙型肝炎.血清中检出单项抗HBc,其意义有两种可能性，既可能表示既往感染；也可能表示为HBsAg(-)的阳性无症状HBV携带或慢性肝炎[6-7].利用PCR技术，在后者血清中检出低水平的HBV-DNA，从而证实了单项抗HBc(+)的血清存在着血行传播HBV的危险性.我国是乙型肝炎的高发区，单一抗HBc(+)的人群检出率近10%，而PCR可检出其中HBV-DNA约30%[6].本文单项抗HBc(+)为17.29%(50/290)，HBV_DNA(+)占26.0%(13/50)，有相当的比例.因此我们认为单项抗HBc(+)的献血员也不宜献血. 作者发现约有8.8%(7/80)的抗HBs(+)者检出HBV_DNA，而抗HBs，抗HBe和抗HBc三项抗体阳性者，HBV_DNA的检出率达33.3%.国内外均有学者指出[8，9]，在HBV感染的恢复期，抗HBs(+)者中HBV_DNA的检出率为32.2%～50.0%，但因含量较低，仅PCR法方能检出.因本文没有对这部分抗HBs(+)的献血员做动态观察及深入研究，其HBV_DNA(+)的意义尚不很明确，究竟是其乙肝感染恢复期抑或是反复不愈的慢性肝炎还需进一步观察，但这提示在筛选献血员时应谨慎对待抗HBs(+)者.
, 百拇医药
4 参考文献1 闻玉梅.乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸的研究进展及其临床意义.中华传染病杂志，1983；1(4)：247-250
2 Carman WF, Jacyna MR, Hadziyannis S, et al. Mutation preventive formation of hepatitis B e
antigen in patients with chronic hepatitis B infection.Lancet, 1989;2(8663):588-590
3 王宇，陶其敏.乙型肝炎病毒前C区基因点突变阻止分泌型e抗原产生.中华微生物学和免疫学杂志，1991；11(2)：73-76
4 王爱莲，周永兴，姚志强.乙型肝炎病毒前C区基因变异的研究.中华医学杂志，1994；74(3)：144-146
, 百拇医药
5 Hoofnagle JH, Seeff LB, Bales ZB, et al. Type B hepatitis after transfusion with blood
containing antibody to hepatitis β coreantigen. N Eng J Med,1978;298(5):1379-1381
6 骆抗先，何超，周荣，等.聚合酶链反应对单一抗HBc阳性的乙型肝炎病毒携带者的检测.
中华医学杂志，1992；72(1)：11-13
7 骆抗先，周荣，陈伟，等.聚合酶链反应检出慢性乙型肝炎活动时病毒低复制状态.
中华实验和临床病毒学杂志，1992；6(1)：7-9
8 张永新，杜绍财，陈草，等.肝炎恢复期乙型肝炎表面抗体阳性者血清中的乙型肝炎病毒DNA.
中华内科杂志，1992；31(10)：629-632
9 Thiers V, Nakajian E, Kremsdorf D, et al. Transmission of hepatitis B from hepatitis
B seronegative subjects. Lancet, 1988;2(8623):1273-1275, http://www.100md.com
项目负责人:欧阳鸿
收稿日期:1996-07-06
Investigation of HBV infection in blood donors with PCR
Yong-Hong Ou, Qi-Xiang Yao, An-Na Kang, Zhao-Hua Jiang and Yong Niu
457 Hospital of PLA, Wuhan 430012, Hubei Province, China
Abstract
, 百拇医药
AIM To investigate HBV infection in 290 blood donors with PCR.
METHODS HBV_DNA was detected 290 blood samples from 290 normal blood donors by the method of PCR.
RESULTS All 290 blood samples showed negative HBsAg and HBeAg in ELISA with normal serum ALT and icterus index. Among them 167 samples showed positive reaction of HBVM including 80 with positive anti_HBs, 50 positive anti_HBc, 19 positive a anti_HBs and anti_HBc, 12 positive anti_HBe and anti_HBc and 6 positive anti_HBs, anti_HBe and anti_HBc. The positive rate of HBV_DNA in each group was 8.8%(7/80), 26%(13/50). 10.5%(2/19), 75.0%(9/12) and 33.3%(2/6)， respectively. Apart from HBV_DNA was positive in 123 blood samples with negative HBVM. The positive rate of HBV_DNA in this group was 1.6% (2/123). And the total positivity rate of HBV DNA in all 290 blood samples was 12.1%(35/290) with PCR examination.
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CONCLUSION HBV infection can not be excluced in legal blood d onors.
Subject headings Blood donors;Hepatitis B/diagnosis;Hepatitis B virus/genetics;DNA, viral/analysis
Ou YH, Yao QX, Kang AN, Jiang ZH,Niu Y.Investigation of HBV infection in blood donors with PCR.
Xin Xiaohuabingxue Zazhi, 1997；5(2)：108-109
摘要
, 百拇医药
目的 对部分献血员中乙型肝炎感染状况进行调查.
方法 用PCR法对检查合格的290份献血血样进行HBV_DNA检测.
结果 本组290份血样中HBsAg，HBeAg全部呈阴性.167例HBVM阳性；其中80例单项抗HBs阳性，50例单项抗HBc阳性，19例抗HBs和HBc两项阳性，12例抗HBe和抗HBc两项阳性；6例抗HBs，抗HBe和抗HBc三项阳性，而HBV-DNA的阳性率在各组中分别为88%(7/80)，26.0%(13/50)，10.5%(2/19)，75.0%(9/12)，33.3%(2/6).123例HBVM阴性，HBV-DNA的阳性率为1.6%(2/123).290例中HBV-DNA的总检出率为12.1%(35/290).
结论 合法献血员中存在着乙肝病毒感染者.
, 百拇医药
主题词 供血者;肝炎，乙型/诊断;肝炎病毒，乙型/遗传学;DNA，病毒/分析
欧阳鸿,姚启攵湘,亢安娜,姜昭华,牛勇.PCR检测献血员乙肝感染状况.新消化病学杂志,1997；5(2)：108-109
我国是乙型病毒性肝炎的高发区.乙型肝炎的主要传播途径之一是经血液及血液制品传播. 虽然目前已采用了许多防范措施，输血后肝炎的发生仍屡见不鲜，最近几年迅速发展起来的聚合酶链反应(PCR)技术，有着极高的灵敏性和特异性，可检出血中1fg水平的HBV-DNA，接近病毒感染的最低血清感染水平.作者用PCR法对检查合格献血员290例的乙肝病毒感染状况进行了初步分析.
1 对象和方法
1.1 对象 按《中国生物制品规程》一部，1990年版，中华人民共和国卫生部所规定的献血员体检及化验标准.检查合格的献血员，随机抽样290例，其中男172例，女118例；年龄21岁～45岁，平均33岁.取该批献血员当天献血的血样为标本，检测血清ALT及黄疸指数.全部标本经ELISA检测HBsAg，抗HBs，HBeAg,抗HBe和抗HBc(试剂盒由华美公司提供).
, 百拇医药
1.2 方法 全部标本经PCR法检测HBV-DNA(试剂盒由北京医科大学人民医院肝研所提供)，操作按说明书要求进行.取扩增产物10μl在含0.5μg/ml溴化乙啶(EB)的2%琼脂糖中电泳20min，在紫外线检测仪下观察泳动区带，以Hae PGEM作分子量标志，以190bp处出现的区带为HBV_DNA阳性.为防止污染，每次试验前严格消毒所用器械，试剂均为新鲜配制；所用试管、吸嘴、反应管均为一次性使用，每一步骤更换一次.每批试验均设阳性，阴性，空白对照并行操作.
2 结果
本组290例献血员ALT及黄疸指数均为正常水平；HBsAg，HBeAg全部阴性.其中123例(42.4%)乙肝病毒标志五项全部呈阴性结果；80例(27.6%)单项抗HBs阳性；50例(172%)单项抗HBc阳性；19例(6.6%)抗HBs与抗HBc两项阳性；12例(4.1%)抗HBe和抗HBc两项阳性；6例(2.1%)抗HBs，抗HBe与抗HBc三项阳性. 经PCR法检测HBV_DNA阳性者在单项抗HBs(+)中为7/80(8.8%)，单项抗HBc(+)中为13/50(26.0%)，抗HBs与抗HBc二项阳性中为2/19(10.5%)，抗HBe与抗HBc二项阳性中为9/12(750%)，抗HBs，抗HBe与抗HBc三项阳性中为2/6(33.0%)，HBV标志五项全部阴性者中为2/123(1.6%)，290例中HBV_DNA的总检出率为35/290(12.1%)，表1.
, 百拇医药
表1 乙肝病毒五项标志与HBV_DNA的关系
| 组别 | n | ELISA法 | PCR法 HBV_DNA阳性(%) | ||||
| HBsAg | HBeAg | 抗HBs | 抗HBe | 抗HBc | |||
| 1 | 80 | - | - | + | - | - | 7(8.8) |
| 2 | 50 | - | - | - | - | + | 13(26.0) |
| 3 | 19 | - | - | + | - | + | 2(10.5) |
| 4 | 12 | - | - | - | + | + | 9(75.0) |
| 5 | 6 | - | - | + | + | + | 2(33.0) |
| 6 | 123 | - | - | - | - | - | 2(1.6) |
| 合计 | 290 | 0 | 0 | 105 | 18 | 87 | 35(12.1) |
, 百拇医药
3 讨论
据WHO收集世界各国的资料表明，输血后乙肝的发病率为3.7%，这与筛选献血员的方法及方法的灵敏度有很大关系.HBV_DNA是HBV感染性的基础，仅有HBV_DNA就可以引起HBV感染[1].目前一般采用ELISA等方法检测血清中HBsAg阳性与否来做为筛选献血员的主要依据.近年来随着PCR技术的迅速发展，对HBV的认识也越来越深入，仅以血清HBsAg阳性与否做为判断献血员能否献血，是远远不够的. 本组290例献血员按前述《规程》指定方法检查，HBsAg全部阴性，ALT全部正常，属献血合格标准.但经乙肝病毒五项标志检查后发现有30%(87/290)的献血员存在着乙肝病毒感染指标阳性.其中抗HBe与抗HBc二项阳性者为4.1%(12/290)，这12例中HBV_DNA(+)占75%(9/12).不少学者近来相继报道，HBeAg(-)，抗HBe(+)并不意味着病毒复制已经停止，而是因为HBV前C区基因序列1896位的核苷酸变异，出现终止密码，导致HBcAg不能表达，但病毒本身的复制却仍在持续[2-3]，此时血液仍具有传染性.王爱莲等[4]指出，在HBeAg(-)/抗HBe(+)的急慢性肝炎，LC等患者中约有78%～85%的人存在着前C区基因变异.本组抗HBe，抗HBc两项阳性者中HBV_DNA(+)高达75%，与文献报道相近，因此我们认为这部分人很可能患有慢性肝炎.HBsAg阴性的原因可能是含量较低，用常规方法不易测出，而造成这部分人漏检. 流行病学调查证实[5]，输入单项抗HBc(+)的血液亦可引发乙型肝炎.血清中检出单项抗HBc,其意义有两种可能性，既可能表示既往感染；也可能表示为HBsAg(-)的阳性无症状HBV携带或慢性肝炎[6-7].利用PCR技术，在后者血清中检出低水平的HBV-DNA，从而证实了单项抗HBc(+)的血清存在着血行传播HBV的危险性.我国是乙型肝炎的高发区，单一抗HBc(+)的人群检出率近10%，而PCR可检出其中HBV-DNA约30%[6].本文单项抗HBc(+)为17.29%(50/290)，HBV_DNA(+)占26.0%(13/50)，有相当的比例.因此我们认为单项抗HBc(+)的献血员也不宜献血. 作者发现约有8.8%(7/80)的抗HBs(+)者检出HBV_DNA，而抗HBs，抗HBe和抗HBc三项抗体阳性者，HBV_DNA的检出率达33.3%.国内外均有学者指出[8，9]，在HBV感染的恢复期，抗HBs(+)者中HBV_DNA的检出率为32.2%～50.0%，但因含量较低，仅PCR法方能检出.因本文没有对这部分抗HBs(+)的献血员做动态观察及深入研究，其HBV_DNA(+)的意义尚不很明确，究竟是其乙肝感染恢复期抑或是反复不愈的慢性肝炎还需进一步观察，但这提示在筛选献血员时应谨慎对待抗HBs(+)者.
, 百拇医药
4 参考文献1 闻玉梅.乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸的研究进展及其临床意义.中华传染病杂志，1983；1(4)：247-250
2 Carman WF, Jacyna MR, Hadziyannis S, et al. Mutation preventive formation of hepatitis B e
antigen in patients with chronic hepatitis B infection.Lancet, 1989;2(8663):588-590
3 王宇，陶其敏.乙型肝炎病毒前C区基因点突变阻止分泌型e抗原产生.中华微生物学和免疫学杂志，1991；11(2)：73-76
4 王爱莲，周永兴，姚志强.乙型肝炎病毒前C区基因变异的研究.中华医学杂志，1994；74(3)：144-146
, 百拇医药
5 Hoofnagle JH, Seeff LB, Bales ZB, et al. Type B hepatitis after transfusion with blood
containing antibody to hepatitis β coreantigen. N Eng J Med,1978;298(5):1379-1381
6 骆抗先，何超，周荣，等.聚合酶链反应对单一抗HBc阳性的乙型肝炎病毒携带者的检测.
中华医学杂志，1992；72(1)：11-13
7 骆抗先，周荣，陈伟，等.聚合酶链反应检出慢性乙型肝炎活动时病毒低复制状态.
中华实验和临床病毒学杂志，1992；6(1)：7-9
8 张永新，杜绍财，陈草，等.肝炎恢复期乙型肝炎表面抗体阳性者血清中的乙型肝炎病毒DNA.
中华内科杂志，1992；31(10)：629-632
9 Thiers V, Nakajian E, Kremsdorf D, et al. Transmission of hepatitis B from hepatitis
B seronegative subjects. Lancet, 1988;2(8623):1273-1275, http://www.100md.com