中药复方慎柔养真汤中血管活性肠肽的探讨
南京医科大学第一附属医院中医教研室 江苏省南京市 210029
*国家自然科学基金资助项目(No.3917002).
项目负责人 顾宇春, 南京医科大学第一附属医院中医教研室 江苏省南京市 210029收搞日期 1996-01-28 接收日期 1996-07-25
Exploration of VIP Immunoreactivity in traditional Chinese medicine -Shenrouyangzhentang
Gu Yu-Chun and Chen De-Zhen
Department of Traditional Chinese Medicine, The First Affiliated Hos pital of Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China
, http://www.100md.com
AbstractAIM To study VIP immunoreactivity in the Chinese medicine Sh enrouyangzhentang and its therapeutic mechanism.
METHODS By using RIA method, the VIP immunoreactivity was detec ted in Chinese medicine Shenrouyangzhentang and in the plasma from 20 normal peo ple and 20 patients with Piyinxu.
RESULTS Maximum binding rate B0/T was 53.29%; Non-specific binding rate N0/T1 170%; the VIP standard curve: Y=0.81983+0.44319 X-0.28927 X2, R2=0.990. The VIP content in Chinese medicine: (106.6ng/L±20ng/L) normal human plasma (90.16ng/L±15ng/L) and the plasma of patients with Pixinxu: (63.25ng/L±11ng/L) with obvious difference among them (P<0.05).
, 百拇医药
CONCLUSION The Chinese medicine contains VIP*like immunoreact ivity equal to VIP in normal plasma. The VIP content in patients' plasam is lower than that in normal people (P<0.05).
Subject headings Qi_reinforcing agents/analysis;Radix paeoniae alba/analysis;Pseudostellaria hetero phyllaphylla/analysis;Poria cocos/analysis\ \ Vasoactive intestinal peptide/analysis;Composite (TCD)
Gu YC,Chen DZ.Exploration of VIP Immunoreactivity in traditional Chinese medicine Shenrouyangzhentang.Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997；5(3)：158-159
, 百拇医药
摘 要目的 中药复方慎柔养真汤中是否含有血管活性肠肽(VIP)，以探索该 药治疗消化系统疾病的作用机理.
方法 用放射免疫分析药盒，对中药复方慎柔养真汤煎剂，20例正常人和20例脾阴虚证患者血浆中VIP的含量进行检测.
结果 最大结合率B0/T=53.290%;非特异性结合率N/T=1.170%；拟合曲线方程Y=0.81983+0.44319 X0.28927 X2,拟合度R2=0.990;中药中VIP=106.6ng/L±20ng/L,与正常人相比较无显著性差异，但有升高趋势；正常人血浆中VIP=90.16ng/L±15ng/L；脾阴虚患者血浆中VIP=63.25ng/L±11ng/L，与正常人相比较有显著性差异(P<0.05).
, 百拇医药
结论 中药复方慎柔养真汤煎剂中有VIP或VIP前体复合物，其VIP水平略高于正常人血浆，而脾阴虚患者血浆中VIP水平低于正常人.
主题词 补气汤剂/分析;茯苓/分析;白芍/分析;血管活性肠肽/分析;孩儿参/分析;复方(中药)
顾宇春,陈德珍.中药复方 慎柔养真汤 中血管活性肠肽的探讨.新消化病学杂志, 1997；5(3)：158-159
中药治疗消化系统疾病颇具成效和特色，但由于中药取材于天然动植物，其成分复杂，给中 医治疗客观化和明确药物的作用机理带来困难.我们从治疗脾阴虚证的方剂慎柔养真汤入手 ，用VIP放免分析药盒，检测中药煎剂中的VIP含量，并同时做了20位正常人、20位脾阴虚证患者血浆中VIP含量的测定，以探索中药的作用机理.
1 材料和方法1.1 材料
, 百拇医药
1.1.1 中药方剂 慎柔养真汤《慎柔五书》药物组成：白芍20g，太子参15g，茯苓10g，扁豆10g，莲 肉10g，麦冬10g，白术10g，五味子3g，甘草3g，3剂.
1.1.2 正常人血浆 受检对象20例(男9例，女11例)，平均年龄48岁，体检正常无任何器质性病变.
1.1.3 脾阴虚证患者血浆 受检对象20例，男8例，女12例；平均年龄46岁，均符合脾阴虚证诊断标准.
1.1.4 主要试剂及仪器 血管活性肠肽(VIP)放射免疫分析药盒购自北京海科锐生物技术中心，由北京协和医院内科消化组任技术顾问并监制；r_I163计数器(北京212厂)；空气压缩机(南京压缩机厂)；低温离心机(匈牙利)；低温冰箱(原苏联).
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 中药处理方法 取2500ml大烧杯一只，将3剂中药全部倒入烧杯，加水刚好于药面上2cm，静止 20min，待药物浸透，再加水至药面上15cm，中火煎煮30min.得药液250ml粗过滤，去掉大的药渣，取滤液150ml，加入1000ml小口瓶，加入1mol/L 盐酸30ml，放于45℃水浴24h，取出，用新华滤纸过滤，过滤3次.取滤液1.5ml/管，30管.按放免 分析药盒说明中标本处理方法，于每管缓慢加入4℃预冷丙酮2ml混合均匀，低温离心1500g×15min，将上清液倾倒入另一试管中，将盛有上清液的各管置于40℃恒温水浴，经特制的多头吹干器用压缩空气 吹干.于吹干的各管中加入HCl 0.01mol/L 1.60ml，旋转混合使之溶解，加入 缓冲液0.5ml(由放免分析药盒提供)再旋转混合.
1.2.2 血浆的处理方法 按放免分析药盒说明书抽取受检者晨空腹静脉血2ml，置于冰壶预冷的试管内，每个 试管含10% EDTA 40μl及抑制蛋白酶合剂15μl，低温离心1500g×15 min，分离血浆，分装血浆1ml/管，-20℃储存备测(可储存3个月)，1个月内完成 所有分析检测.以下按说明书同中药放免分析处理一致.
, 百拇医药
1.2.3 VIP的测定 按VIP放免分析药盒严格操作[1].
2 结果最大结合率53.290%；非特异结合率1.170%；回收率81.315%，以各标准管B/B0与各标准管浓度的对数，利用Excle 5.0和cricket graph软件做曲线拟合，拟合曲线Y^=0.81983+0.44319 X-0.28927 X2，拟合度R2=0.990.利用拟合曲线求得各管VIP含量.(x-±s)中药VIP含量：106.6ng/L±20ng/L；正常人血浆中VIP含量：90.16 ng/L±15ng/L；脾阴虚证患者血浆中VIP含量：63.25ng/L±11ng/L.用统计学单因素方差分析Scheffe法作两两比较，中药组与正常人组无显著性差异，但有升高 趋势，而脾阴虚组与正常人组有显著性差异(P<0.05).
, 百拇医药
3 讨论本结果可见，中药复方慎柔养真汤中有VIP或VIP的前体复合物，并且其含量与正常人血浆中VIP含量比较无显著性差异，而脾阴虚证患者血浆中VIP含量低于正常人(P<0.05). 放免分析前中药的处理是按普通中药煎煮，再模拟胃部的一些条件，如酸、正常人(胃酸浓 度在125mmol/L～165mmol/L)，体温37℃，因胃肠部有酶和其他一些生物因素，无法模拟，故考虑处理时稍微提高温浴温度，延长温浴时间.而且在放免分 析中，中药的处理完全和血浆一致.因此，中药经过普通方法，在胃肠部解离出VIP是完全可 能的. 血管活性肠肽(Vasoactive intestinal polypeptide, VIP)是1972年由Said和Mutt发现的. 它是一个直链28肽，Mr 3326，被认为与促胰液素、胰高血糖素，抑胃多肽属于同一 类的肽.并被公认为非肾上腺素非胆碱能(NAN-C)抑制系统的神经介质.VIP在体内的分布很广 泛，其中以神经系统和胃肠道浓度最高，在神经系统内，大量存在于下丘脑，边缘皮层和新 皮层的神经细胞体，以及外周神经系统和胃肠道壁内神经系统中.在胃肠道，VIP存在于胃肠 道所有区域；此外VIP还存在于泌尿生殖器官和肺等组织.因此VIP的作用范围是很广的，而且作用是多层次的.其生理作用包括：①在中枢和外周神经系统起神经递质作用，②松弛胃肠道平滑肌，对胃肠运动具有明显的抑制作用，③增加胃、肠、胰的液体和电解质的分泌，④促进胰岛、胃、胰和下丘脑激素释放，⑤增加cAMP浓度.VIP是一种调节肽，调节着消化道从分泌到运动和各种功能.而中药煎剂中含有VIP或VIP前体复合物，通过患者饮用，中药进入胃肠道，经过胃酸和多种酶的作用，VIP解离出来，作用于胃肠壁的VIP受体或促胰液素受体[2]，通过第1信使或直接激活胃、小肠粘膜腺苷酸环化酶，提高cAMP，进而一方面可直接引起胃肠肌条舒张.因此能减轻患者胃嘈杂，腹痛等症状.另一方面，通过cAMP这一环节引起一系列酶促反应，继而可产生以下效应：抑制胃酸的分泌，减少由食物刺激引起的胃酸分泌，增加肠液分泌，降低人体内水和钠的吸收，增加氯的分泌，增加直肠肠液的分泌，因此能改善患者嘈杂、大便干结等症状.另外，如果胃肠道内的VIP能吸收入血，则不仅可以加强以上作用，而且还可以通过血运，发挥远距离调节作用：降低下食管括约肌压力，增强胰腺对促胰液素以及胆囊收缩素的反应，增加胰HCO-3和水分分泌， 增强胰酶分泌，促进胰岛素、胰高血糖素、生长抑素的释放[3]并在外周神经细胞体和终末起神经递质作用.在更广范围和更多层次对机体发生调节作用[4-6].以上分析结果提示我们是否能用胃肠道直接给于VIP等胃肠肽的方法，来治疗某些消化系 统和其他系统疾病.但到底成效如何，临床如何控制，还有待于进一步的研究.
, http://www.100md.com
4 参考文献1 陈元方.血管活性肠肽的放射免疫分析.中华核医学杂志，1986；6(1)：18-20
2 周吕.胃肠生理学基础与临床.北京：科学出版社，1990：139
3 王宗党.胃肠激素对胃运动和排空的调节作用.国外医学消化疾病分册，1995；15(2)：77-80
4 缪家培.血管活性肠肽与乙酰胆碱在自主神经内共存问题的探讨.中国应用生理学杂志，1991；7(1)：90-94
5 张忠兵.脾虚泄泻患者肠粘膜中SP和VIP的初步探讨.中西医结合杂志，1991；11(3)：144-146
6 Waschek JA. Vasoactive intestinal peptied: an important trophic factor and d evelopmental regulator? Dev Neurosci, 1995;17(1):1-7, http://www.100md.com(顾宇春 陈德珍)
*国家自然科学基金资助项目(No.3917002).
项目负责人 顾宇春, 南京医科大学第一附属医院中医教研室 江苏省南京市 210029收搞日期 1996-01-28 接收日期 1996-07-25
Exploration of VIP Immunoreactivity in traditional Chinese medicine -Shenrouyangzhentang
Gu Yu-Chun and Chen De-Zhen
Department of Traditional Chinese Medicine, The First Affiliated Hos pital of Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China
, http://www.100md.com
AbstractAIM To study VIP immunoreactivity in the Chinese medicine Sh enrouyangzhentang and its therapeutic mechanism.
METHODS By using RIA method, the VIP immunoreactivity was detec ted in Chinese medicine Shenrouyangzhentang and in the plasma from 20 normal peo ple and 20 patients with Piyinxu.
RESULTS Maximum binding rate B0/T was 53.29%; Non-specific binding rate N0/T1 170%; the VIP standard curve: Y=0.81983+0.44319 X-0.28927 X2, R2=0.990. The VIP content in Chinese medicine: (106.6ng/L±20ng/L) normal human plasma (90.16ng/L±15ng/L) and the plasma of patients with Pixinxu: (63.25ng/L±11ng/L) with obvious difference among them (P<0.05).
, 百拇医药
CONCLUSION The Chinese medicine contains VIP*like immunoreact ivity equal to VIP in normal plasma. The VIP content in patients' plasam is lower than that in normal people (P<0.05).
Subject headings Qi_reinforcing agents/analysis;Radix paeoniae alba/analysis;Pseudostellaria hetero phyllaphylla/analysis;Poria cocos/analysis\ \ Vasoactive intestinal peptide/analysis;Composite (TCD)
Gu YC,Chen DZ.Exploration of VIP Immunoreactivity in traditional Chinese medicine Shenrouyangzhentang.Xin Xiaohuabingxue Zazhi,1997；5(3)：158-159
, 百拇医药
摘 要目的 中药复方慎柔养真汤中是否含有血管活性肠肽(VIP)，以探索该 药治疗消化系统疾病的作用机理.
方法 用放射免疫分析药盒，对中药复方慎柔养真汤煎剂，20例正常人和20例脾阴虚证患者血浆中VIP的含量进行检测.
结果 最大结合率B0/T=53.290%;非特异性结合率N/T=1.170%；拟合曲线方程Y=0.81983+0.44319 X0.28927 X2,拟合度R2=0.990;中药中VIP=106.6ng/L±20ng/L,与正常人相比较无显著性差异，但有升高趋势；正常人血浆中VIP=90.16ng/L±15ng/L；脾阴虚患者血浆中VIP=63.25ng/L±11ng/L，与正常人相比较有显著性差异(P<0.05).
, 百拇医药
结论 中药复方慎柔养真汤煎剂中有VIP或VIP前体复合物，其VIP水平略高于正常人血浆，而脾阴虚患者血浆中VIP水平低于正常人.
主题词 补气汤剂/分析;茯苓/分析;白芍/分析;血管活性肠肽/分析;孩儿参/分析;复方(中药)
顾宇春,陈德珍.中药复方 慎柔养真汤 中血管活性肠肽的探讨.新消化病学杂志, 1997；5(3)：158-159
中药治疗消化系统疾病颇具成效和特色，但由于中药取材于天然动植物，其成分复杂，给中 医治疗客观化和明确药物的作用机理带来困难.我们从治疗脾阴虚证的方剂慎柔养真汤入手 ，用VIP放免分析药盒，检测中药煎剂中的VIP含量，并同时做了20位正常人、20位脾阴虚证患者血浆中VIP含量的测定，以探索中药的作用机理.
1 材料和方法1.1 材料
, 百拇医药
1.1.1 中药方剂 慎柔养真汤《慎柔五书》药物组成：白芍20g，太子参15g，茯苓10g，扁豆10g，莲 肉10g，麦冬10g，白术10g，五味子3g，甘草3g，3剂.
1.1.2 正常人血浆 受检对象20例(男9例，女11例)，平均年龄48岁，体检正常无任何器质性病变.
1.1.3 脾阴虚证患者血浆 受检对象20例，男8例，女12例；平均年龄46岁，均符合脾阴虚证诊断标准.
1.1.4 主要试剂及仪器 血管活性肠肽(VIP)放射免疫分析药盒购自北京海科锐生物技术中心，由北京协和医院内科消化组任技术顾问并监制；r_I163计数器(北京212厂)；空气压缩机(南京压缩机厂)；低温离心机(匈牙利)；低温冰箱(原苏联).
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 中药处理方法 取2500ml大烧杯一只，将3剂中药全部倒入烧杯，加水刚好于药面上2cm，静止 20min，待药物浸透，再加水至药面上15cm，中火煎煮30min.得药液250ml粗过滤，去掉大的药渣，取滤液150ml，加入1000ml小口瓶，加入1mol/L 盐酸30ml，放于45℃水浴24h，取出，用新华滤纸过滤，过滤3次.取滤液1.5ml/管，30管.按放免 分析药盒说明中标本处理方法，于每管缓慢加入4℃预冷丙酮2ml混合均匀，低温离心1500g×15min，将上清液倾倒入另一试管中，将盛有上清液的各管置于40℃恒温水浴，经特制的多头吹干器用压缩空气 吹干.于吹干的各管中加入HCl 0.01mol/L 1.60ml，旋转混合使之溶解，加入 缓冲液0.5ml(由放免分析药盒提供)再旋转混合.
1.2.2 血浆的处理方法 按放免分析药盒说明书抽取受检者晨空腹静脉血2ml，置于冰壶预冷的试管内，每个 试管含10% EDTA 40μl及抑制蛋白酶合剂15μl，低温离心1500g×15 min，分离血浆，分装血浆1ml/管，-20℃储存备测(可储存3个月)，1个月内完成 所有分析检测.以下按说明书同中药放免分析处理一致.
, 百拇医药
1.2.3 VIP的测定 按VIP放免分析药盒严格操作[1].
2 结果最大结合率53.290%；非特异结合率1.170%；回收率81.315%，以各标准管B/B0与各标准管浓度的对数，利用Excle 5.0和cricket graph软件做曲线拟合，拟合曲线Y^=0.81983+0.44319 X-0.28927 X2，拟合度R2=0.990.利用拟合曲线求得各管VIP含量.(x-±s)中药VIP含量：106.6ng/L±20ng/L；正常人血浆中VIP含量：90.16 ng/L±15ng/L；脾阴虚证患者血浆中VIP含量：63.25ng/L±11ng/L.用统计学单因素方差分析Scheffe法作两两比较，中药组与正常人组无显著性差异，但有升高 趋势，而脾阴虚组与正常人组有显著性差异(P<0.05).
, 百拇医药
3 讨论本结果可见，中药复方慎柔养真汤中有VIP或VIP的前体复合物，并且其含量与正常人血浆中VIP含量比较无显著性差异，而脾阴虚证患者血浆中VIP含量低于正常人(P<0.05). 放免分析前中药的处理是按普通中药煎煮，再模拟胃部的一些条件，如酸、正常人(胃酸浓 度在125mmol/L～165mmol/L)，体温37℃，因胃肠部有酶和其他一些生物因素，无法模拟，故考虑处理时稍微提高温浴温度，延长温浴时间.而且在放免分 析中，中药的处理完全和血浆一致.因此，中药经过普通方法，在胃肠部解离出VIP是完全可 能的. 血管活性肠肽(Vasoactive intestinal polypeptide, VIP)是1972年由Said和Mutt发现的. 它是一个直链28肽，Mr 3326，被认为与促胰液素、胰高血糖素，抑胃多肽属于同一 类的肽.并被公认为非肾上腺素非胆碱能(NAN-C)抑制系统的神经介质.VIP在体内的分布很广 泛，其中以神经系统和胃肠道浓度最高，在神经系统内，大量存在于下丘脑，边缘皮层和新 皮层的神经细胞体，以及外周神经系统和胃肠道壁内神经系统中.在胃肠道，VIP存在于胃肠 道所有区域；此外VIP还存在于泌尿生殖器官和肺等组织.因此VIP的作用范围是很广的，而且作用是多层次的.其生理作用包括：①在中枢和外周神经系统起神经递质作用，②松弛胃肠道平滑肌，对胃肠运动具有明显的抑制作用，③增加胃、肠、胰的液体和电解质的分泌，④促进胰岛、胃、胰和下丘脑激素释放，⑤增加cAMP浓度.VIP是一种调节肽，调节着消化道从分泌到运动和各种功能.而中药煎剂中含有VIP或VIP前体复合物，通过患者饮用，中药进入胃肠道，经过胃酸和多种酶的作用，VIP解离出来，作用于胃肠壁的VIP受体或促胰液素受体[2]，通过第1信使或直接激活胃、小肠粘膜腺苷酸环化酶，提高cAMP，进而一方面可直接引起胃肠肌条舒张.因此能减轻患者胃嘈杂，腹痛等症状.另一方面，通过cAMP这一环节引起一系列酶促反应，继而可产生以下效应：抑制胃酸的分泌，减少由食物刺激引起的胃酸分泌，增加肠液分泌，降低人体内水和钠的吸收，增加氯的分泌，增加直肠肠液的分泌，因此能改善患者嘈杂、大便干结等症状.另外，如果胃肠道内的VIP能吸收入血，则不仅可以加强以上作用，而且还可以通过血运，发挥远距离调节作用：降低下食管括约肌压力，增强胰腺对促胰液素以及胆囊收缩素的反应，增加胰HCO-3和水分分泌， 增强胰酶分泌，促进胰岛素、胰高血糖素、生长抑素的释放[3]并在外周神经细胞体和终末起神经递质作用.在更广范围和更多层次对机体发生调节作用[4-6].以上分析结果提示我们是否能用胃肠道直接给于VIP等胃肠肽的方法，来治疗某些消化系 统和其他系统疾病.但到底成效如何，临床如何控制，还有待于进一步的研究.
, http://www.100md.com
4 参考文献1 陈元方.血管活性肠肽的放射免疫分析.中华核医学杂志，1986；6(1)：18-20
2 周吕.胃肠生理学基础与临床.北京：科学出版社，1990：139
3 王宗党.胃肠激素对胃运动和排空的调节作用.国外医学消化疾病分册，1995；15(2)：77-80
4 缪家培.血管活性肠肽与乙酰胆碱在自主神经内共存问题的探讨.中国应用生理学杂志，1991；7(1)：90-94
5 张忠兵.脾虚泄泻患者肠粘膜中SP和VIP的初步探讨.中西医结合杂志，1991；11(3)：144-146
6 Waschek JA. Vasoactive intestinal peptied: an important trophic factor and d evelopmental regulator? Dev Neurosci, 1995;17(1):1-7, http://www.100md.com(顾宇春 陈德珍)