唾液HBV_DNA检测病毒性乙型肝炎87例
广东省潮州市中心医院传染科 521021
项目负责人 林树强,广东省潮州市中心医院传染科 521021收搞日期 1997-02-18 接受日期 1997-04-07
Subject headings hepatitis B/diagnosis; DNA,viral/analysis; hepatitis B virus
主题词 肝炎，乙型/诊断；DNA，病毒/分析；乙型肝炎病毒
林树强,陈伟钊,沈观钦,章金灿,黄桂生,魏添河.唾液HBV_DNA检测病毒性乙型肝炎87例.新消化病学杂志,1997;5(9):566
, http://www.100md.com
1 对象和方法1.1 对象 依据1990年第六次全国(上海)病毒性肝炎会议制订的诊断标准，收集1995年7月～1996年8月本科住院的乙肝患者87例，其中男63例，女24例，平均年龄37.6岁，急性肝炎35例，慢性肝炎46例，肝炎后肝硬变6例. 另外以在本科住院的肺结核、肝癌、甲型肝炎等非乙肝患者30例作随机对照，平均年龄32.4岁.
1.2 方法 ①标本来源：对所有住院乙肝患者和非乙肝患者行“乙肝二对半”和血HBV_DNA(PCR)检查，同时取早晨清水口腔漱洗后的唾液装于无菌杯中密封送检.②仪器及试剂：PCR扩增仪为美国MJ公司生产的PTC_100_60型，试剂由洛阳华美生物工程有限公司提供. ③引物：寡核苷酸引物选自C基因区最保守的序列. ④样品处理：患者唾液中加入等体积无菌生理盐水，充分摇匀，取3ml混匀液于无菌专用试管中，低速离心5min，取上清液经15000rpm离心10min，充除上清液，用40μl裂解液悬浮沉淀，煮沸15min，14000rpm离心5min，取上清液2μl做反应模板. ⑤PCR扩增：用28μl反应液+2μl模板+Taq酶1μ，94℃ 5min，按94℃ 45s→55 ℃ 45s→72℃ 45s进行35循环，最后置72℃ 5min，取扩增物10μl～15μl于2% 的琼脂糖凝胶上进行电泳后，在紫外灯下观察到270bp的DNA片段，即为阳性. ⑥“乙肝二对半”测定：HBsAg，抗_HBs,HBeAg，抗_HBe，抗_HBc测定均用ELISA法，试剂由上海科华生物公司提供.
, 百拇医药
2 结果87例患者乙肝标志物血清学检测HBsAg阳性，抗-HBs全部阴性，抗_HBc全部阳性，HBeAg阳性46例，抗_HBe阳性41例，血HBV_DNA(PCR)阳性70例(80%)，唾液HBV_DNA阳性29例(33.3%). 其中“大三阳”(HBsAg\,HBeAg\,抗_HBc阳性)46例中，血中HBV_DNA全部阳性(100%)，唾液HBV_DNA阳性22例(47.8%)；而“小三阳”(HBsAg\,抗_HBe\,抗_HBc阳性)41例中，血HBV_DNA阳性24例(58.5%)，唾液HBV-DNA阳性7例(17%)，提示“大三阳”与“小三阳”两者唾液HBV-DNA阳性率有显著性差异(P<0.05). 其它30例非乙肝患者的血清乙肝标志物，HBV_DNA均阴性，检测其唾液HBV_DNA也均阴性.
3 讨论乙型肝炎患者中唾液的传播途径越来越受到人们闹厥樱孀臥CR技术应用于临床， 血、唾液HBV_DNA检查与乙肝感染性及病毒复制有密切关系. HBeAg阳性表示HBV活动复制具有较强的传染性，现认为血HBV_DNA阳性更能反映HBV复制及传染性. 在本组资料中，“大三阳”46例，血HBV_DNA均阳性(100%)，唾液HBV-DNA阳性22例(47.8%)；而“小三阳”41例中，血HBV-DNA阳性24例(58.5%)，唾液HBV-DNA阳性7例(17%)，虽然“大三阳”和“小三阳”中血、唾液HBV_DNA阳性率有显著性差异(P<0.05)，但“小三阳”患者是仍有部分患者表现血、唾液HBV_DNA阳性，意味着病毒复制，说明仍具有高度传染性.本组结果显示唾液HBV_DNA检测与血HBV_DNA阳性呈平行关系，即血HBV_DNA阳性或HBeAg阳性时，患者体内的HBV-DNA随唾液排出机会较多，其唾液传染性增强，然而部分“小三阳”患者仍有传染性，故对这些患者的分泌物亦需要进行消毒处理.
致谢：本文承第一军医大学南方医院李福山教授指导., 百拇医药
项目负责人 林树强,广东省潮州市中心医院传染科 521021收搞日期 1997-02-18 接受日期 1997-04-07
Subject headings hepatitis B/diagnosis; DNA,viral/analysis; hepatitis B virus
主题词 肝炎，乙型/诊断；DNA，病毒/分析；乙型肝炎病毒
林树强,陈伟钊,沈观钦,章金灿,黄桂生,魏添河.唾液HBV_DNA检测病毒性乙型肝炎87例.新消化病学杂志,1997;5(9):566
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1 对象和方法1.1 对象 依据1990年第六次全国(上海)病毒性肝炎会议制订的诊断标准，收集1995年7月～1996年8月本科住院的乙肝患者87例，其中男63例，女24例，平均年龄37.6岁，急性肝炎35例，慢性肝炎46例，肝炎后肝硬变6例. 另外以在本科住院的肺结核、肝癌、甲型肝炎等非乙肝患者30例作随机对照，平均年龄32.4岁.
1.2 方法 ①标本来源：对所有住院乙肝患者和非乙肝患者行“乙肝二对半”和血HBV_DNA(PCR)检查，同时取早晨清水口腔漱洗后的唾液装于无菌杯中密封送检.②仪器及试剂：PCR扩增仪为美国MJ公司生产的PTC_100_60型，试剂由洛阳华美生物工程有限公司提供. ③引物：寡核苷酸引物选自C基因区最保守的序列. ④样品处理：患者唾液中加入等体积无菌生理盐水，充分摇匀，取3ml混匀液于无菌专用试管中，低速离心5min，取上清液经15000rpm离心10min，充除上清液，用40μl裂解液悬浮沉淀，煮沸15min，14000rpm离心5min，取上清液2μl做反应模板. ⑤PCR扩增：用28μl反应液+2μl模板+Taq酶1μ，94℃ 5min，按94℃ 45s→55 ℃ 45s→72℃ 45s进行35循环，最后置72℃ 5min，取扩增物10μl～15μl于2% 的琼脂糖凝胶上进行电泳后，在紫外灯下观察到270bp的DNA片段，即为阳性. ⑥“乙肝二对半”测定：HBsAg，抗_HBs,HBeAg，抗_HBe，抗_HBc测定均用ELISA法，试剂由上海科华生物公司提供.
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2 结果87例患者乙肝标志物血清学检测HBsAg阳性，抗-HBs全部阴性，抗_HBc全部阳性，HBeAg阳性46例，抗_HBe阳性41例，血HBV_DNA(PCR)阳性70例(80%)，唾液HBV_DNA阳性29例(33.3%). 其中“大三阳”(HBsAg\,HBeAg\,抗_HBc阳性)46例中，血中HBV_DNA全部阳性(100%)，唾液HBV_DNA阳性22例(47.8%)；而“小三阳”(HBsAg\,抗_HBe\,抗_HBc阳性)41例中，血HBV_DNA阳性24例(58.5%)，唾液HBV-DNA阳性7例(17%)，提示“大三阳”与“小三阳”两者唾液HBV-DNA阳性率有显著性差异(P<0.05). 其它30例非乙肝患者的血清乙肝标志物，HBV_DNA均阴性，检测其唾液HBV_DNA也均阴性.
3 讨论乙型肝炎患者中唾液的传播途径越来越受到人们闹厥樱孀臥CR技术应用于临床， 血、唾液HBV_DNA检查与乙肝感染性及病毒复制有密切关系. HBeAg阳性表示HBV活动复制具有较强的传染性，现认为血HBV_DNA阳性更能反映HBV复制及传染性. 在本组资料中，“大三阳”46例，血HBV_DNA均阳性(100%)，唾液HBV-DNA阳性22例(47.8%)；而“小三阳”41例中，血HBV-DNA阳性24例(58.5%)，唾液HBV-DNA阳性7例(17%)，虽然“大三阳”和“小三阳”中血、唾液HBV_DNA阳性率有显著性差异(P<0.05)，但“小三阳”患者是仍有部分患者表现血、唾液HBV_DNA阳性，意味着病毒复制，说明仍具有高度传染性.本组结果显示唾液HBV_DNA检测与血HBV_DNA阳性呈平行关系，即血HBV_DNA阳性或HBeAg阳性时，患者体内的HBV-DNA随唾液排出机会较多，其唾液传染性增强，然而部分“小三阳”患者仍有传染性，故对这些患者的分泌物亦需要进行消毒处理.
致谢：本文承第一军医大学南方医院李福山教授指导., 百拇医药