哺乳动物胃肠道D细胞形态和分布的实验研究
第四军医大学唐都医院消化内科 陕西省西安市 710038
作者简介 吴战军，男，1965-02-13生，陕西省彬县人，汉族. 1989年毕业于四医大空军医学系，在空军济南医院从事消化专业工作5年.
现为四医大唐都医院硕士研究生，已发表论文3篇.(收稿 1997-03-16 修回 1997-05-25)
An immunohistochemical study on morphology and distribution of somatostotin-like
immunoreactive cells in mamalian gastrointestinal tract
, http://www.100md.com WU Zhan-Jun, XU Cai-Fu, and HUANG Yu-Xin
Department of Gastroenterology, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi′an 710038, China
Subject headings somatostatin; gastrointestinal system/cytology; appendix/cytology
Abstract
AIM To investigate the morphology and distribution of somatostatin -like immunoreactive (SSLI) cells in mamalian gastrointestinal tract, including appendix.
, 百拇医药
METHODS The morphology and the distribution of SSLI cells in gastrointestinal tract including appendix in 6 monkeys, 13 dogs and 8 mice were measured with immunohistochemical ABC technique.
RESULTS The SSLI cells were distributed in appendix and pylorus of mice, and in the pylori of 11 dogs. No SSLI cells were found in the spleen of mice and in the gallbladder of dogs and monkeys.
CONCLUSION SSLI were present throughout the gastrointestinal tract of mammals. They are found in the mucosa of appendix of dogs and mice, indicating that appendix has endocrine functions.
, http://www.100md.com
主题词 生长抑素； 胃肠系统/细胞学； 阑尾/细胞学
中国图书资料分类号 R329.444
摘要
目的 探讨D细胞,生长抑素免疫反应细胞(SSLI)在胃肠道包括阑尾在内的分布.
方法 应用免疫组化ABC法，观察了猴(n=6),狗(n=13)和小鼠(n=8)胃肠道SSLI细胞的分布.
结果 小鼠的胃窦和阑尾均有SSLI细胞，13例狗的胃窦亦均有SSLI细胞，13例狗的阑尾中11例有SSLI细胞分布. 小鼠的脾脏，狗、猴的胆囊未见SSLI细胞.
, 百拇医药
结论 SSLI细胞广泛分布于哺乳类动物胃肠道. 小鼠和狗的阑尾粘膜层有SSLI细胞分布，提示阑尾具有内分泌功能.
生长抑素(Somatostatin, SS)是一种分布广泛，具有多种生物学活性的抑制性脑肠肽. Polak等[1]应用免疫荧光技术发现狗、猪和人胃窦、十二指肠、空肠、回肠和胰腺中含有大量SSLI细胞. 本实验室曾发现胎儿阑尾组织中有大量SS分布. 作者应用免疫组化ABC法对SSLI在猴、狗和小鼠包括阑尾在内消化道的定位、形态和分布进行了系统研究，以期从生物进化角度，了解SSLI的分布，探讨阑尾的内分泌性质，为阑尾疾病治疗学提供内分泌生理学资料.
1 材料和方法
1.1 取材 取健康恒河猴(n=6)，杂种家养狗(n=13)、小白鼠(n=8)新鲜胃窦、脾脏、胆囊和阑尾组织，Bouin液固定16h～18h. 常规石蜡包埋，切片厚约5μm裱贴于涂有铬矾明胶的载玻片上，37℃烤干备用.
, 百拇医药
1.2 方法 ①切片经二甲苯脱蜡，逐级酒精入水；②甲醇0.3% H2O2 封闭内源性过氧化物酶；③0.01mol/L PBS(pH 7.4)冲洗5min 共3次；④正常羊血清封闭内源性非特异性蛋白；⑤依次加入兔抗SS-14，SS-28抗血清(1∶100，北京中山公司提供)，生物素标记羊抗兔IgG(1∶200，丹麦Dako公司产品)，AB复合物(1∶100，Dako公司提供)，分别4℃过夜，室温60min和45min，每次显孵育后用PBS洗涤3次各5min；⑥用DAB-H2O2显色4min～10min，苏木精复染，脱水、透明，中性树胶封片. 特异性阳性对照：大鼠胃窦组织. 特异性阴性对照：不加一抗的大鼠胃窦组织.
结果的记录：日本Olympus显微镜观察、摄片. 每种动物每个部位取2张切片，数5个视野SSLI细胞，然后取其平均值.
, http://www.100md.com
2 结果
阴性对照未见特异性着色，阳性对照呈棕黄色着色，细胞核呈蓝紫色. SSLI细胞散在性分布于胃窦和阑尾，分布不均匀，多位于粘膜中部，少数位于粘膜底部，呈三角形，梭形，卵圆形等. 有的SSLI细胞一侧伸出一个长的胞浆突起，和邻近细胞接触. 小鼠胆囊和脾脏未见SSLI细胞，狗和猴胆囊未见SSLI细胞. 小鼠和狗每个视野SSLI细胞数目表1. 小鼠的胃窦和阑尾内均有SSLI细胞分布，13例狗的胃窦亦均有SSLI细胞分布，小鼠的脾脏和狗、猴的胆囊未见SSLI细胞的分布.
表1 小鼠和狗每个视野SSLI细胞数目
, http://www.100md.com
注：×100放大100倍视野，200放大200倍视野.
3 讨论
在哺乳类动物胃肠道和胰腺中含有大量生长抑素[2]. 消化系统各部位D细胞分布并不均匀，各部位D细胞数目与SS含量相一致[3]，未见SSLI在阑尾和脾脏分布的报道. 1984年Dancygier等[4]应用免疫组织细胞化学ABC法，发现人胆囊中没有D细胞，而肝外胆管系统中则有D细胞分布. 这为生长抑素瘤综合征的特征性病变——胆结石的形成，提供了理论依据. 作者应用免疫组化ABC法观察了D细胞在小鼠、狗、猴的胃窦、阑尾、胆囊和脾脏的分布，胆囊无SSLI细胞，这和Dancygier结果相一致. 脾脏无SSLI阳性细胞. 小鼠和狗阑尾中均有较多D细胞，提示阑尾不仅是免疫器官，而且具有内分泌功能，这为临床上处理阑尾病变时诊治方法的选择，提供了生理学资料.
, http://www.100md.com
阑尾中D细胞主要分布在粘膜腺体的中段和基底部，呈三角形，梭形，卵圆形，在细胞一侧有较长突起和周围细胞接触或突向腺腔，提示阑尾D细胞亦有腔分泌及旁分泌功能. 从定量角度看，小鼠和狗阑尾的D细胞和局部粘膜组织内SS含量不一致，其原因尚不清楚. 13例狗的胃窦中SSLI细胞均阳性，而13例狗阑尾标本中，有2例未见SSLI细胞，这可能与阑尾SSLI细胞分布较少，一份标本只取其中2张切片染色有关.
狗阑尾D细胞核中有SSLI阳性物质，这和王瑞安等[5]发现狗胰腺D细胞核中有SS免疫反应样物质存在相一致. 目前已从某些细胞核中发现有SS受体存在[6，7]，如能证实D细胞核中确实含有SS，将为研究SS的作用机制提供形态学依据，仍需要免疫电镜水平进一步证实.
4 参考文献
, http://www.100md.com
1 Polak JM, Pearse AGE, Grimelius L, et al. Growth-hormone realease-inhibiting hormone in gastrointestinal and pancreatic
cells. Lancet, 1975;31(7):1220-1222
2 Arimura A, Sato H, Dupont A, et al. Somatostatin: atoundance of immunoreactive hormone in rat stomach and
pancreas. Science, 1975;189(6):1007-1009
3 Bloom sR, Gut Hormones, London: Churchill livingstone, 1978:3-18
, http://www.100md.com
4 Dancygier H, Klein U, Leuschneru, et al. Somatostatim -containing cell in the extrahapatic biliary tract of
humans. Gastroenterology, 1984;86(4):892-896
5 王瑞安，蔡文琴，苏慧慈，等. 大鼠、豚鼠、猪、狗和牛胰腺生长抑素免疫反应细胞形态和分布的比较研究. 解剖学报，1995；26(2)：176-178
6 Morel G, Leroux P, Pelletier G. Ultrastructural autoradiographic localization of somatostatin-28 in the rat pituitary cell.
Endocrinology, 1985;116(4):1615-1620
7 Steiner C, Dahl R, Sheman W, et al. Somatostatin-receptors are biologically active before they are inserted into the
plasma membrane. Endocrinology, 1986;118(2):766-772, 百拇医药(吴战军 许才绂 黄裕新)
作者简介 吴战军，男，1965-02-13生，陕西省彬县人，汉族. 1989年毕业于四医大空军医学系，在空军济南医院从事消化专业工作5年.
现为四医大唐都医院硕士研究生，已发表论文3篇.(收稿 1997-03-16 修回 1997-05-25)
An immunohistochemical study on morphology and distribution of somatostotin-like
immunoreactive cells in mamalian gastrointestinal tract
, http://www.100md.com WU Zhan-Jun, XU Cai-Fu, and HUANG Yu-Xin
Department of Gastroenterology, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi′an 710038, China
Subject headings somatostatin; gastrointestinal system/cytology; appendix/cytology
Abstract
AIM To investigate the morphology and distribution of somatostatin -like immunoreactive (SSLI) cells in mamalian gastrointestinal tract, including appendix.
, 百拇医药
METHODS The morphology and the distribution of SSLI cells in gastrointestinal tract including appendix in 6 monkeys, 13 dogs and 8 mice were measured with immunohistochemical ABC technique.
RESULTS The SSLI cells were distributed in appendix and pylorus of mice, and in the pylori of 11 dogs. No SSLI cells were found in the spleen of mice and in the gallbladder of dogs and monkeys.
CONCLUSION SSLI were present throughout the gastrointestinal tract of mammals. They are found in the mucosa of appendix of dogs and mice, indicating that appendix has endocrine functions.
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主题词 生长抑素； 胃肠系统/细胞学； 阑尾/细胞学
中国图书资料分类号 R329.444
摘要
目的 探讨D细胞,生长抑素免疫反应细胞(SSLI)在胃肠道包括阑尾在内的分布.
方法 应用免疫组化ABC法，观察了猴(n=6),狗(n=13)和小鼠(n=8)胃肠道SSLI细胞的分布.
结果 小鼠的胃窦和阑尾均有SSLI细胞，13例狗的胃窦亦均有SSLI细胞，13例狗的阑尾中11例有SSLI细胞分布. 小鼠的脾脏，狗、猴的胆囊未见SSLI细胞.
, 百拇医药
结论 SSLI细胞广泛分布于哺乳类动物胃肠道. 小鼠和狗的阑尾粘膜层有SSLI细胞分布，提示阑尾具有内分泌功能.
生长抑素(Somatostatin, SS)是一种分布广泛，具有多种生物学活性的抑制性脑肠肽. Polak等[1]应用免疫荧光技术发现狗、猪和人胃窦、十二指肠、空肠、回肠和胰腺中含有大量SSLI细胞. 本实验室曾发现胎儿阑尾组织中有大量SS分布. 作者应用免疫组化ABC法对SSLI在猴、狗和小鼠包括阑尾在内消化道的定位、形态和分布进行了系统研究，以期从生物进化角度，了解SSLI的分布，探讨阑尾的内分泌性质，为阑尾疾病治疗学提供内分泌生理学资料.
1 材料和方法
1.1 取材 取健康恒河猴(n=6)，杂种家养狗(n=13)、小白鼠(n=8)新鲜胃窦、脾脏、胆囊和阑尾组织，Bouin液固定16h～18h. 常规石蜡包埋，切片厚约5μm裱贴于涂有铬矾明胶的载玻片上，37℃烤干备用.
, 百拇医药
1.2 方法 ①切片经二甲苯脱蜡，逐级酒精入水；②甲醇0.3% H2O2 封闭内源性过氧化物酶；③0.01mol/L PBS(pH 7.4)冲洗5min 共3次；④正常羊血清封闭内源性非特异性蛋白；⑤依次加入兔抗SS-14，SS-28抗血清(1∶100，北京中山公司提供)，生物素标记羊抗兔IgG(1∶200，丹麦Dako公司产品)，AB复合物(1∶100，Dako公司提供)，分别4℃过夜，室温60min和45min，每次显孵育后用PBS洗涤3次各5min；⑥用DAB-H2O2显色4min～10min，苏木精复染，脱水、透明，中性树胶封片. 特异性阳性对照：大鼠胃窦组织. 特异性阴性对照：不加一抗的大鼠胃窦组织.
结果的记录：日本Olympus显微镜观察、摄片. 每种动物每个部位取2张切片，数5个视野SSLI细胞，然后取其平均值.
, http://www.100md.com
2 结果
阴性对照未见特异性着色，阳性对照呈棕黄色着色，细胞核呈蓝紫色. SSLI细胞散在性分布于胃窦和阑尾，分布不均匀，多位于粘膜中部，少数位于粘膜底部，呈三角形，梭形，卵圆形等. 有的SSLI细胞一侧伸出一个长的胞浆突起，和邻近细胞接触. 小鼠胆囊和脾脏未见SSLI细胞，狗和猴胆囊未见SSLI细胞. 小鼠和狗每个视野SSLI细胞数目表1. 小鼠的胃窦和阑尾内均有SSLI细胞分布，13例狗的胃窦亦均有SSLI细胞分布，小鼠的脾脏和狗、猴的胆囊未见SSLI细胞的分布.
表1 小鼠和狗每个视野SSLI细胞数目
| 动物 | 胃窦 | 阑尾 | ||
| ×100 | ×200 | ×100 | ×200 | |
| 小鼠 | 16 | 9 | 8 | 3 |
| 狗 | 11 | 7 | 9 | 4 |
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注：×100放大100倍视野，200放大200倍视野.
3 讨论
在哺乳类动物胃肠道和胰腺中含有大量生长抑素[2]. 消化系统各部位D细胞分布并不均匀，各部位D细胞数目与SS含量相一致[3]，未见SSLI在阑尾和脾脏分布的报道. 1984年Dancygier等[4]应用免疫组织细胞化学ABC法，发现人胆囊中没有D细胞，而肝外胆管系统中则有D细胞分布. 这为生长抑素瘤综合征的特征性病变——胆结石的形成，提供了理论依据. 作者应用免疫组化ABC法观察了D细胞在小鼠、狗、猴的胃窦、阑尾、胆囊和脾脏的分布，胆囊无SSLI细胞，这和Dancygier结果相一致. 脾脏无SSLI阳性细胞. 小鼠和狗阑尾中均有较多D细胞，提示阑尾不仅是免疫器官，而且具有内分泌功能，这为临床上处理阑尾病变时诊治方法的选择，提供了生理学资料.
, http://www.100md.com
阑尾中D细胞主要分布在粘膜腺体的中段和基底部，呈三角形，梭形，卵圆形，在细胞一侧有较长突起和周围细胞接触或突向腺腔，提示阑尾D细胞亦有腔分泌及旁分泌功能. 从定量角度看，小鼠和狗阑尾的D细胞和局部粘膜组织内SS含量不一致，其原因尚不清楚. 13例狗的胃窦中SSLI细胞均阳性，而13例狗阑尾标本中，有2例未见SSLI细胞，这可能与阑尾SSLI细胞分布较少，一份标本只取其中2张切片染色有关.
狗阑尾D细胞核中有SSLI阳性物质，这和王瑞安等[5]发现狗胰腺D细胞核中有SS免疫反应样物质存在相一致. 目前已从某些细胞核中发现有SS受体存在[6，7]，如能证实D细胞核中确实含有SS，将为研究SS的作用机制提供形态学依据，仍需要免疫电镜水平进一步证实.
4 参考文献
, http://www.100md.com
1 Polak JM, Pearse AGE, Grimelius L, et al. Growth-hormone realease-inhibiting hormone in gastrointestinal and pancreatic
cells. Lancet, 1975;31(7):1220-1222
2 Arimura A, Sato H, Dupont A, et al. Somatostatin: atoundance of immunoreactive hormone in rat stomach and
pancreas. Science, 1975;189(6):1007-1009
3 Bloom sR, Gut Hormones, London: Churchill livingstone, 1978:3-18
, http://www.100md.com
4 Dancygier H, Klein U, Leuschneru, et al. Somatostatim -containing cell in the extrahapatic biliary tract of
humans. Gastroenterology, 1984;86(4):892-896
5 王瑞安，蔡文琴，苏慧慈，等. 大鼠、豚鼠、猪、狗和牛胰腺生长抑素免疫反应细胞形态和分布的比较研究. 解剖学报，1995；26(2)：176-178
6 Morel G, Leroux P, Pelletier G. Ultrastructural autoradiographic localization of somatostatin-28 in the rat pituitary cell.
Endocrinology, 1985;116(4):1615-1620
7 Steiner C, Dahl R, Sheman W, et al. Somatostatin-receptors are biologically active before they are inserted into the
plasma membrane. Endocrinology, 1986;118(2):766-772, 百拇医药(吴战军 许才绂 黄裕新)