胃癌患者TNFα水平及其影响因素
1华北油田总医院内科 河北省任丘市 062552
2福建省立医院内科 3河南医科大学第二附属医院 4河北医科大学附属第二医院
作者简介 魏莉，女，1963-04-04生，河北省乐亭县人，汉族. 1995年河南医科大学毕业，消化内科硕士，主治医师[河北省任丘市华北石油会战道中段(总医院). 电话(0317)2723389].(收稿 1997-04-12 修回 1997-05-20)
Influencing factors on TNFα level in patients with gastric cancer
, 百拇医药
WEI Li1, LING Zhao-Qi2, XU Zhi-Lin3 and YAO Xi-Xian4
1Department of Internal Medicine, General Hospital, of Huabei Oil field Renqiu City 062552, Hebei Province, China
2Department of Internal Medicine, Fujian Provincial Hospital
3Second Affiliated Hospital, Henan Medical University
, 百拇医药 4Second Affiliated Hospital, Hebei Medical University
Subject headings stomach neoplasms/metabolism; tumor necrosis factor/biosynthesis; indomethacin
Abstract
AIM To investigate the factors affecting LPS-induced PBMC production of TNFα in patients with gastric cancer including autologous plasma and indomethacin.
, 百拇医药
METHODS The TNFα in PBMC of 36 patients with gastric cancer, (27 males and 9 females, aged 38-71 years, mean age of 52 years). 20 patients with benign gastric diseases (13 males and 7 females, aged 32-75 years, mean age of 49 years) and 20 normal subjects (12 males and 8 females, aged 25-52 years, mean age of 47 years) was measured by the ELISA method. PBMC of the patients with gastric cancer was cultured with autologous plasma+LPS or indomethacin (IM)+LPS.
, 百拇医药
RESULTS The TNFαlevel (μg/L) in gastric cancer group (3.04±1.66) was significantly higher than that of the normal control (0.76±0.57) and the benign gastric disease groups (1.03±0.62) (P<0.05). There was no difference of TNFα level in different pathological types and stages of cancer patients. When PBMC of cancer patients was incubated with LPS plus the patients plasma, TNFα production was drastically suppressed (2.07±0.94，P<0.05); however, when IM was added, TNFα production was enhanced significantly
, http://www.100md.com
(6.4±3.06, P<0.01).
CONCLUSION TNFα level may be a potential diagnostic marker in patients with gastric cancer. In addition, the cancer patient plasma may affect the modulation of TNFα production; and IM may raise the TNFα level.
主题词 胃肿瘤/代谢； 肿瘤坏死因子/生物合成； 吲哚美辛
中国图书资料分类号 R735.2
, http://www.100md.com
摘要
目的 研究胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)由细菌内毒素(LPS)诱导产生TNFα的能力及胃癌患者自身血浆和吲哚美辛对产生TNFα的影响.
方法 采用ELISA法测定36例胃癌患者(男27例，女9例，年龄38岁～71岁，平均52岁；其中，Ⅰ、Ⅱ期17例，Ⅲ、Ⅳ期19例)；20例良性胃病患者(男13例，女7例，年龄32岁～75岁，平均49岁)；及20例正常人(男12例，女8例，年龄25岁～52岁，平均47岁)PBMC经LPS诱导培养上清液中TNFα水平. 胃癌患者PBMC又给予另外两种处理：胃癌自身血浆+LPS和吲哚美辛+LPS.
结果 TNFα水平(μg/L)胃癌组(3.04±1.66)较良性胃病组(1.03±0.62)与正常组(0.76±0.57)均显著升高(P<0.05)，良性胃病组与正常组之间无显著差异(P>0.05)；胃癌患者的不同病理分型间、分期间亦无显著差异(P>0.05). 胃癌组PBMC经LPS诱导加自身血浆处理则TNFα水平较仅用LPS诱导者显著下降(2.07±0.94，P<0.05)，而经吲哚美辛处理较仅用LPS处理者显著升高(6.4±3.06，P<0.01).
, 百拇医药
结论 TNFα水平可作为胃癌诊断的潜在标记物；胃癌自身血浆可影响TNFα的产生；吲哚美辛可加强TNFα产生.
肿瘤患者激活的单核巨噬细胞抗肿瘤细胞毒作用是由于产生肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF)增加的结果，恶性肿瘤患者单个核细胞(PBMC)产生TNF能力增强[1]. 目前，关于肿瘤患者PBMC产生TNF影响因素的研究国内尚乏报道. 为此，对胃癌患者PBMC经大肠杆菌内毒素(LPS)诱导与自身血浆和消炎痛对产生TNFα水平的影响作了研究.
1 对象和方法
1.1 对象 ①胃癌组：36例，均经纤维内镜检查手术病理证实. 男27例，女9例，年龄38岁～71岁，平均52岁. 病理类型：乳头状管状腺癌16例，粘液腺癌8例，低分化癌12例. 按肿瘤TNM分期，Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期19例. 均未接受化疗、放疗和免疫治疗. ②良性胃病组：20例，男13例，女7例，年龄32岁～75岁，平均49岁. 均经内镜检查病理证实. 计慢性萎缩性胃炎12例，胃溃疡8例. ③正常组：为健康献血员共20例，男12例，女8例，年龄25岁～52岁，平均47岁.
, 百拇医药
1.2 方法
将无菌肝素抗凝血加入盛有淋巴细胞分离液的离心管中，1500r/min离心20min，吸出单个核细胞层，RPMI1640液洗3次. 调整细胞终浓度为1×10个/ml，加诱导剂LPS终浓度为10μg/ml. 另外，吲哚美辛终浓度15μg/ml，自身血浆浓度为10%. 用96孔培养板在37℃ 5% CO2饱和湿度下培养24h，离心取上清，-70℃冻存. 采用ELISA法测定，试剂盒由北京军事医学科学院提供.
统计学处理 数据以x±s表示，统计学处理按t检验进行.
2 结果
TNFα含量(μg/L)胃癌患者(3.04±1.66)较良性胃病(1.03±0.62)与正常对照组(0.76±0.57)均显著升高(P<0.05)；良性胃病组与正常对照组比较差异无显著性. 按胃癌病理分型乳头状、管状腺癌患者(3.06±1.73)，粘液腺癌患者(3.19±1.75)，低分化癌患者(2.93±1.49)，TNFα含量三组间进行比较，差异无显著性(P>0.05). 按胃癌病理分期Ⅲ～Ⅳ期(3.59±1.93)，Ⅰ～Ⅱ期TNFα含量(2.75±1.39)，两组间比较，差异无显著性(P>0.05). 胃癌患者自身血浆(2.07±0.94)和吲哚美辛(6.4±3.06)对LPS诱导的PBMC产生TNFα水平具有显著差异(P<0.05；<0.01).
, 百拇医药
3 讨论
TNF主要由激活的单核巨噬细胞产生，LPS被认为是最有效的单核巨噬细胞产生TNFα的诱导剂之一[2]，作者采用LPS作为诱导剂使胃癌患者PBMC产生TNFα，结果表明其诱导作用显著，胃癌患者TNFα水平显著高于良性胃病患者与正常人，提示检测患者TNFα水平可能是胃癌诊断的一个潜在标记物，但由于胃癌患者不同病理分型及分期之间TNFα水平比较无显著性差异(P>0.05)，因此，若将之作为胃癌患者病理分型及分期的一个辅助或监测指标并无临床意义. 关于激活的单核细胞产生TNFα的机理尚未完全明了，可能与此类患者体内单核细胞经历着一个慢性活化过程，最终由LPS提供第二信号而引起完全活化有关[3，4].
作者发现胃癌患者PBMC在LPS诱导下，经10%自身血浆处理后产生TNFα的能力被强烈抑制，与仅用LPS诱导处理比较培养上清液中的TNFα水平明显降低(P<0.05). 尽管PGE2>2ng/ml能抑制单核细胞产生TNF[1]，但10%自身血浆的加入，其中所含PGE2浓度不足以达到上述浓度而产生抑制作用. 应考虑在自身血浆中除PGE2以外可能还存在一种或多种影响TNFα产生的未知因子，此有待深入研究.
, http://www.100md.com
近年来发现吲哚美辛有一定抗肿瘤作用，将10%自身血浆更换为吲哚美辛则产生TNFα能力明显增强. 目前研究认为吲哚美辛抗肿瘤的重要机制之一是其具有抑制前列腺素合成酶的作用. 前列腺素酶抑制剂可减慢肿瘤生长，甚至使实验性肿瘤消退[5]. 而吲哚美辛呈剂量依赖性增加TNF产生，在无LPS诱导时，单独用吲哚美辛单核细胞并无产生TNF增加作用[6]. 本结果表明吲哚美辛能使PBMC产生TNFα的能力明显增强，故将之作为对胃癌患者免疫机能增强剂可能在治疗方面发挥积极有益的作用.
4 参考文献
1 Nara K, Odaglri H, Fujii M, et al. Increased production of tumor necrosis factor and prostaglandin E by monocyte in
, http://www.100md.com
cancer patients and its unique modulation by their plasma. Cancer Immunol Immunother, 1987;25(1):126-132
2 Chensue SW, Terebuh PD, Remick DG, et al. In vivo biologic and immunohistochemical analysis of interleukin-1 α，β and
tumor necrosis factor during experimental endotoxemia. Am J Pathol, 1992;138(3):395-402
3 Hoffmann R, Grewe M, Estler HC, et al. Regulation of tumor necrosis factor-α-mRNA synthesis and distribution of tumor
, 百拇医药
necrosis factors-α-mRNA synthesizing cells in rat liver during experimental endotoxemia. J Hepatol, 1994;20(1):122-128
4 Goto M, Takei Y, Kawano S, et al. Tumor necrosis factor and endotoxin in the pathogenesis of liver and pulmonary injuries
after orthotopic liver transplantation in the rat. Hepatology, 1992;16(3):487-493
5 Jimbo T, Akimoto T, Tohgo A. Effect of combined administration of a synthetic low-toxicity lipid A derivative, DT-5461a,and indomethacin in various experimental tumor models of colon 26 carcinoma in mice.
Cancer Immunol Immunother, 1995;40(1):10-16
6 Kunkel SL, Wiggins RC, Chensue SW, et al. Regulation of macrophage tumor necrosis factor production by prostaglandin
E. Biochem Biophys Res Comm, 1986;137(1):404-410, 百拇医药(魏 莉1 凌赵起2 徐志林3 姚希贤4 )
2福建省立医院内科 3河南医科大学第二附属医院 4河北医科大学附属第二医院
作者简介 魏莉，女，1963-04-04生，河北省乐亭县人，汉族. 1995年河南医科大学毕业，消化内科硕士，主治医师[河北省任丘市华北石油会战道中段(总医院). 电话(0317)2723389].(收稿 1997-04-12 修回 1997-05-20)
Influencing factors on TNFα level in patients with gastric cancer
, 百拇医药
WEI Li1, LING Zhao-Qi2, XU Zhi-Lin3 and YAO Xi-Xian4
1Department of Internal Medicine, General Hospital, of Huabei Oil field Renqiu City 062552, Hebei Province, China
2Department of Internal Medicine, Fujian Provincial Hospital
3Second Affiliated Hospital, Henan Medical University
, 百拇医药 4Second Affiliated Hospital, Hebei Medical University
Subject headings stomach neoplasms/metabolism; tumor necrosis factor/biosynthesis; indomethacin
Abstract
AIM To investigate the factors affecting LPS-induced PBMC production of TNFα in patients with gastric cancer including autologous plasma and indomethacin.
, 百拇医药
METHODS The TNFα in PBMC of 36 patients with gastric cancer, (27 males and 9 females, aged 38-71 years, mean age of 52 years). 20 patients with benign gastric diseases (13 males and 7 females, aged 32-75 years, mean age of 49 years) and 20 normal subjects (12 males and 8 females, aged 25-52 years, mean age of 47 years) was measured by the ELISA method. PBMC of the patients with gastric cancer was cultured with autologous plasma+LPS or indomethacin (IM)+LPS.
, 百拇医药
RESULTS The TNFαlevel (μg/L) in gastric cancer group (3.04±1.66) was significantly higher than that of the normal control (0.76±0.57) and the benign gastric disease groups (1.03±0.62) (P<0.05). There was no difference of TNFα level in different pathological types and stages of cancer patients. When PBMC of cancer patients was incubated with LPS plus the patients plasma, TNFα production was drastically suppressed (2.07±0.94，P<0.05); however, when IM was added, TNFα production was enhanced significantly
, http://www.100md.com
(6.4±3.06, P<0.01).
CONCLUSION TNFα level may be a potential diagnostic marker in patients with gastric cancer. In addition, the cancer patient plasma may affect the modulation of TNFα production; and IM may raise the TNFα level.
主题词 胃肿瘤/代谢； 肿瘤坏死因子/生物合成； 吲哚美辛
中国图书资料分类号 R735.2
, http://www.100md.com
摘要
目的 研究胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)由细菌内毒素(LPS)诱导产生TNFα的能力及胃癌患者自身血浆和吲哚美辛对产生TNFα的影响.
方法 采用ELISA法测定36例胃癌患者(男27例，女9例，年龄38岁～71岁，平均52岁；其中，Ⅰ、Ⅱ期17例，Ⅲ、Ⅳ期19例)；20例良性胃病患者(男13例，女7例，年龄32岁～75岁，平均49岁)；及20例正常人(男12例，女8例，年龄25岁～52岁，平均47岁)PBMC经LPS诱导培养上清液中TNFα水平. 胃癌患者PBMC又给予另外两种处理：胃癌自身血浆+LPS和吲哚美辛+LPS.
结果 TNFα水平(μg/L)胃癌组(3.04±1.66)较良性胃病组(1.03±0.62)与正常组(0.76±0.57)均显著升高(P<0.05)，良性胃病组与正常组之间无显著差异(P>0.05)；胃癌患者的不同病理分型间、分期间亦无显著差异(P>0.05). 胃癌组PBMC经LPS诱导加自身血浆处理则TNFα水平较仅用LPS诱导者显著下降(2.07±0.94，P<0.05)，而经吲哚美辛处理较仅用LPS处理者显著升高(6.4±3.06，P<0.01).
, 百拇医药
结论 TNFα水平可作为胃癌诊断的潜在标记物；胃癌自身血浆可影响TNFα的产生；吲哚美辛可加强TNFα产生.
肿瘤患者激活的单核巨噬细胞抗肿瘤细胞毒作用是由于产生肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF)增加的结果，恶性肿瘤患者单个核细胞(PBMC)产生TNF能力增强[1]. 目前，关于肿瘤患者PBMC产生TNF影响因素的研究国内尚乏报道. 为此，对胃癌患者PBMC经大肠杆菌内毒素(LPS)诱导与自身血浆和消炎痛对产生TNFα水平的影响作了研究.
1 对象和方法
1.1 对象 ①胃癌组：36例，均经纤维内镜检查手术病理证实. 男27例，女9例，年龄38岁～71岁，平均52岁. 病理类型：乳头状管状腺癌16例，粘液腺癌8例，低分化癌12例. 按肿瘤TNM分期，Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期19例. 均未接受化疗、放疗和免疫治疗. ②良性胃病组：20例，男13例，女7例，年龄32岁～75岁，平均49岁. 均经内镜检查病理证实. 计慢性萎缩性胃炎12例，胃溃疡8例. ③正常组：为健康献血员共20例，男12例，女8例，年龄25岁～52岁，平均47岁.
, 百拇医药
1.2 方法
将无菌肝素抗凝血加入盛有淋巴细胞分离液的离心管中，1500r/min离心20min，吸出单个核细胞层，RPMI1640液洗3次. 调整细胞终浓度为1×10个/ml，加诱导剂LPS终浓度为10μg/ml. 另外，吲哚美辛终浓度15μg/ml，自身血浆浓度为10%. 用96孔培养板在37℃ 5% CO2饱和湿度下培养24h，离心取上清，-70℃冻存. 采用ELISA法测定，试剂盒由北京军事医学科学院提供.
统计学处理 数据以x±s表示，统计学处理按t检验进行.
2 结果
TNFα含量(μg/L)胃癌患者(3.04±1.66)较良性胃病(1.03±0.62)与正常对照组(0.76±0.57)均显著升高(P<0.05)；良性胃病组与正常对照组比较差异无显著性. 按胃癌病理分型乳头状、管状腺癌患者(3.06±1.73)，粘液腺癌患者(3.19±1.75)，低分化癌患者(2.93±1.49)，TNFα含量三组间进行比较，差异无显著性(P>0.05). 按胃癌病理分期Ⅲ～Ⅳ期(3.59±1.93)，Ⅰ～Ⅱ期TNFα含量(2.75±1.39)，两组间比较，差异无显著性(P>0.05). 胃癌患者自身血浆(2.07±0.94)和吲哚美辛(6.4±3.06)对LPS诱导的PBMC产生TNFα水平具有显著差异(P<0.05；<0.01).
, 百拇医药
3 讨论
TNF主要由激活的单核巨噬细胞产生，LPS被认为是最有效的单核巨噬细胞产生TNFα的诱导剂之一[2]，作者采用LPS作为诱导剂使胃癌患者PBMC产生TNFα，结果表明其诱导作用显著，胃癌患者TNFα水平显著高于良性胃病患者与正常人，提示检测患者TNFα水平可能是胃癌诊断的一个潜在标记物，但由于胃癌患者不同病理分型及分期之间TNFα水平比较无显著性差异(P>0.05)，因此，若将之作为胃癌患者病理分型及分期的一个辅助或监测指标并无临床意义. 关于激活的单核细胞产生TNFα的机理尚未完全明了，可能与此类患者体内单核细胞经历着一个慢性活化过程，最终由LPS提供第二信号而引起完全活化有关[3，4].
作者发现胃癌患者PBMC在LPS诱导下，经10%自身血浆处理后产生TNFα的能力被强烈抑制，与仅用LPS诱导处理比较培养上清液中的TNFα水平明显降低(P<0.05). 尽管PGE2>2ng/ml能抑制单核细胞产生TNF[1]，但10%自身血浆的加入，其中所含PGE2浓度不足以达到上述浓度而产生抑制作用. 应考虑在自身血浆中除PGE2以外可能还存在一种或多种影响TNFα产生的未知因子，此有待深入研究.
, http://www.100md.com
近年来发现吲哚美辛有一定抗肿瘤作用，将10%自身血浆更换为吲哚美辛则产生TNFα能力明显增强. 目前研究认为吲哚美辛抗肿瘤的重要机制之一是其具有抑制前列腺素合成酶的作用. 前列腺素酶抑制剂可减慢肿瘤生长，甚至使实验性肿瘤消退[5]. 而吲哚美辛呈剂量依赖性增加TNF产生，在无LPS诱导时，单独用吲哚美辛单核细胞并无产生TNF增加作用[6]. 本结果表明吲哚美辛能使PBMC产生TNFα的能力明显增强，故将之作为对胃癌患者免疫机能增强剂可能在治疗方面发挥积极有益的作用.
4 参考文献
1 Nara K, Odaglri H, Fujii M, et al. Increased production of tumor necrosis factor and prostaglandin E by monocyte in
, http://www.100md.com
cancer patients and its unique modulation by their plasma. Cancer Immunol Immunother, 1987;25(1):126-132
2 Chensue SW, Terebuh PD, Remick DG, et al. In vivo biologic and immunohistochemical analysis of interleukin-1 α，β and
tumor necrosis factor during experimental endotoxemia. Am J Pathol, 1992;138(3):395-402
3 Hoffmann R, Grewe M, Estler HC, et al. Regulation of tumor necrosis factor-α-mRNA synthesis and distribution of tumor
, 百拇医药
necrosis factors-α-mRNA synthesizing cells in rat liver during experimental endotoxemia. J Hepatol, 1994;20(1):122-128
4 Goto M, Takei Y, Kawano S, et al. Tumor necrosis factor and endotoxin in the pathogenesis of liver and pulmonary injuries
after orthotopic liver transplantation in the rat. Hepatology, 1992;16(3):487-493
5 Jimbo T, Akimoto T, Tohgo A. Effect of combined administration of a synthetic low-toxicity lipid A derivative, DT-5461a,and indomethacin in various experimental tumor models of colon 26 carcinoma in mice.
Cancer Immunol Immunother, 1995;40(1):10-16
6 Kunkel SL, Wiggins RC, Chensue SW, et al. Regulation of macrophage tumor necrosis factor production by prostaglandin
E. Biochem Biophys Res Comm, 1986;137(1):404-410, 百拇医药(魏 莉1 凌赵起2 徐志林3 姚希贤4 )