胃粘膜癌前病变P21和P53蛋白的表达
河北省张家口市张家口医学院附属医院 1消化内科 2电镜室病理解剖室 075000 3河北医科大学附属第二医院 050017
作者简介 林静，女，1955-11-06生，广东省中山市人，汉族. 1983年河北医科大学医学系毕业，临床医学硕士，副主任医师，主要从事消化疾病的诊治研究，发表论文10篇[河北省张家口市长青路12号. 电话(0313) 2013691].(收稿 1996-10-26 修回 1997-06-06)
P21 and P53 protein expression in intestinal metaplasia and dysplasia of gastric mucosa
, http://www.100md.com
LIN Jing1, SHEN Jin-Ku1, YU Shu-Xia1, DAI Jie2, BO Ai-Hua2 and YAO Xi-Xian3
1Department of Gastroenterology, First Affiliated Hospital, Zhangjiakou Medical College, Zhangjiakou 075000, Hebei Province, China
2Section of Pathoanatomy and Election Microscopy
3Second Affiliated Hospital, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, China
, 百拇医药
Subject headings stomach neoplasms/pathology; gastric mucosa/pathology; metaplasia; protein P53/metabolism; proto-oncogene protein P21 (ras)/metabolism
Abstract
AIM To study the relationship between intestinal metaplasia or dysplasia of gastric mucosa and gastric cancer.
METHODS P21 and P53 protein expressions were determined in 58 formalin-fixed, paraffin-embedded specimens of intestinal metaplasia (n=44) and dysplasia of gastric mucosa (n=14) by the SP immunohistochemical method.
, 百拇医药
RESULTS The positive rates of P21 and P53 proteins in type Ⅱb intestinal metaplasia (IM) (70.0% and 30.0%) were statistically higher than those in type Ⅰb IM (25.8% and 6.4%，P<0.01). The positive rates of P21 and P53 proteins in dysplasia (42.8% and 28.5%) were higher than those in IM (34% and 11.8%). The positive rates of P21 and P53 proteins in dysplasia with type Ⅱb IM (62.5% and 37.5%) were significantly higher than those in dysplasia with type Ⅰb IM (16.6% and 16.6%).
, 百拇医药
CONCLUSION Dysplasia accompanied by type Ⅱb IM may more easily develop gastric cancer than other lesions.
主题词 胃肿瘤/病理学； 胃粘膜/病理学； 化生； 蛋白质P53/代谢； 原癌基因蛋白质P21(ras)/代谢
中国图书资料分类号 R735.2
摘要
目的 检测胃粘膜肠化生和异型增生病变部位P21和P53蛋白表达与胃癌发生的关系.
方法 内窥镜及病理学证实为胃粘膜肠化生者44例，男26例，女18例，平均年龄47.5岁. 异型增生者14例，男9例，女5例，平均年龄64.5岁. 粘液组化将肠化生分型，免疫组化测定P21及P53蛋白表达.
, http://www.100md.com
结果 Ⅱb型肠化生P21及P53蛋白阳性率分别为70.0%和30.0%，均显著高于Ⅰb型肠化生(25.8%和6.4%，P<0.01). 异型增生P21及P53阳性率为42.8%和28.5%，高于肠化组34%和11.8%. Ⅱb型肠化异型增生P21和P53阳性率为62.5%和37.5%，也高于Ⅰb型肠化异型增生组16.6%和16.6%.
结论 分泌非中性粘液的Ⅱb型肠化异型增生带有更多与胃癌相同的生物学性状，可能与胃癌的发生关系密切.
胃粘膜肠上皮化生及异型增生系胃癌前期病变[1]，癌前病变有关基因表达异常已成为当前研究的热点. 研究表明[2，3]，P21和P53蛋白的测定对于这些疾病的诊断、治疗及预后判断具有一定意义. 我们利用免疫组化方法对慢性萎缩性胃炎肠化生，异型增生病变部位进行P21和P53蛋白测定，为进一步深入研究提供有益的线索.
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 选择1994年9月～1995年8月我院内镜室检查内窥镜及病理证实为胃窦粘膜肠化生及异型增生者58例.
1.2 方法 每例患者取胃窦部粘膜组织4～6块，10L/m3中性甲醛固定，石蜡包埋，连续切片厚5μm；分别进行HE染色，病理检查；粘液组化染色及P21和P53蛋白免疫组化反应.
1.2.1 粘液组化染色 试剂HID作用液由上海东方生化产品研制室提供. 1% AB染色及PAS染液由我院自行配制. 取一张切片做AB(pH 2.5)/PAS粘液组化染色，区别涎酸和中性粘液. 用1% AB染色后，1%过碘酸处理，再行PAS染色. 取另一片做HID/AB(pH 2.5)粘液组化染色，区别硫酸和涎酸粘液. 用HID作用液浸泡过夜后，1%AB染色. 肠化生分型标准：根据肠化生细胞产生粘液性质的不同，并参考Filipe的分型标准，将肠化分为4型：完全小肠型(Ⅰa)；完全结肠型(Ⅰb)；不完全小肠型(Ⅱa)；不完全结肠型(Ⅱb).
, 百拇医药
1.2.2 P21和P53蛋白免疫组化染色 免疫组化染色采用了SP法，其中P21和P53抗血清由Dako公司生产. SP药盒由北京中山生物化学试剂公司提供. 结果判定标准：P53阳性物质定位于细胞核内，呈棕色颗粒状. P21阳性物质位于细胞质和胞膜上，以胞膜处最明显，呈棕黄色.
统计学处理 数据经χ2检验.
2 结果
2.1 肠化组织P21和P53的表达 根据粘液组化染色，将肠化生分为Ⅰa型3例，Ⅰb型31例(其中含异型增生者6例)，Ⅱa型在粘液组化中无显示，Ⅱb型10例(其中含异型增生者8例). 根据统计学处理，Ⅱb型肠化生P21和P53染色阳性率分别为70.0%和30.0%. 均显著高于Ⅰb型25.8%和6.4%.
, 百拇医药
表1 肠化组织中P21和P53的表达
P<0.01.
2.2 异型增生组织P21和P53表达 异型增生P53染色阳性率为28.5%，高于肠化组11.3%. P21阳性率为42.8%，也高于肠化组34%(表2). 根据粘液组化染色将异型增生分为Ⅰb型6例，Ⅱb型8例. Ⅱb型异型增生P21和P53阳性率分别为62.5%及37.5%，均高于Ⅰb型异型增生组16.6%及16.6%(表3).
, 百拇医药
表2 肠化生与异型增生组织中P21和P53的表达
表3 不同类型异型增生组织中P21和P53的表达
, 百拇医药
3 讨论
ras基因编码高度相似的Mr 21000蛋白质，称为P21. 它参与膜的信号传递，在细胞生长、分化中起着重要作用. 如果ras基因持续激活，就能启动和加速细胞的生长、繁殖，最终导致细胞的恶性转化[4]. p53基因是机体内存在着的抑制细胞异常生长和肿瘤形成的抑癌基因. 此基因编码一种390个氨基酸Mr 53000的核磷酸蛋白，通过对DNA复制的影响而参与正常细胞的生长调控. 当p53基因发生突变时，在细胞核内大量积聚，可使细胞发生恶性转化[5]. 本研究发现，在不同类型肠化生组织中出现了P21，P53蛋白的异常表达. Ⅱb型肠化生P21及P53蛋白的阳性率明显高于Ⅰb型肠化生. 这说明在多种因素作用下，胃粘膜在肠化生阶段就已经存在着抑癌基因的减弱和癌基因的过度表达. 不全结肠型肠化生不仅组织学上较完全型肠化生分化差，异常基因产物也明显高于完全型肠化生.
, 百拇医药
在伴有不同类型肠化的异型增生组织中，具有不全结肠型肠化的异型增生其P21及P53蛋白表达阳性率高于具有完全结肠型肠化异型增生组织.这说明分泌非中性粘液的Ⅱb型异型增生带有更多与胃癌相同的生物学性状. 在所有癌前病变中，此种病变可能与胃癌的发生关系密切，应给予高度重视.
本研究还表明，P21和P53蛋白之间有协同阳性表达. 在肠化生中共同阳性率为11.3%，在异型增生中上升为28.5%，而无1例单独显示P53阳性. 这说明，随着癌前病变的加重，协同表达率逐渐升高. 一个癌基因的激活不足以引起细胞的恶性转化，而需要至少一种以上激活癌基因或失活抗癌基因的协作，甚至还需要其它因素参与才能促进癌变的发生.
实验中我们还观察到，无论是肠化生还是异型增生P21蛋白阳性表达率均高于P53蛋白. 这说明在癌变的发生中，ras基因的激活大多先于抗癌基因的失活. 可能在癌基因激活的基础上，大量转化蛋白与抗癌基因蛋白结合导致了抗癌基因的失活. 因此，在癌前病变中，检测P21蛋白可能较P53蛋白更早地发现基因的突变，可作为癌变早期诊断的一个标志物.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 徐采朴，刘为纹. 慢性胃炎、肠化及不典型增生的随访观察. 中华消化杂志，1984；4(1)：10-12
2 Shiao YH, Rugge M. P53 alteration in gastric precancerous lesions. Am J Pathol, 1994;144(3):511-517
3 房殿春，刘为纹. 应用免疫组化方法检测癌基因ras产物P21在胃癌及癌前组织的表达. 新消化病学杂志，1994；2(4)：225-226
4 Zhang K, Declue JE, Vass WC, et al. Suppression of C-ras transforming by GTPase acti-vating protein. Nature,
1990;396(7):754-756
5 Levine AJ. The P53 suppressor gene. N Engl J Med, 1992;326(20):1350-1352, http://www.100md.com(林 静1 沈金库1 于淑霞1 戴 洁2 薄爱华2 姚希贤3)
作者简介 林静，女，1955-11-06生，广东省中山市人，汉族. 1983年河北医科大学医学系毕业，临床医学硕士，副主任医师，主要从事消化疾病的诊治研究，发表论文10篇[河北省张家口市长青路12号. 电话(0313) 2013691].(收稿 1996-10-26 修回 1997-06-06)
P21 and P53 protein expression in intestinal metaplasia and dysplasia of gastric mucosa
, http://www.100md.com
LIN Jing1, SHEN Jin-Ku1, YU Shu-Xia1, DAI Jie2, BO Ai-Hua2 and YAO Xi-Xian3
1Department of Gastroenterology, First Affiliated Hospital, Zhangjiakou Medical College, Zhangjiakou 075000, Hebei Province, China
2Section of Pathoanatomy and Election Microscopy
3Second Affiliated Hospital, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, China
, 百拇医药
Subject headings stomach neoplasms/pathology; gastric mucosa/pathology; metaplasia; protein P53/metabolism; proto-oncogene protein P21 (ras)/metabolism
Abstract
AIM To study the relationship between intestinal metaplasia or dysplasia of gastric mucosa and gastric cancer.
METHODS P21 and P53 protein expressions were determined in 58 formalin-fixed, paraffin-embedded specimens of intestinal metaplasia (n=44) and dysplasia of gastric mucosa (n=14) by the SP immunohistochemical method.
, 百拇医药
RESULTS The positive rates of P21 and P53 proteins in type Ⅱb intestinal metaplasia (IM) (70.0% and 30.0%) were statistically higher than those in type Ⅰb IM (25.8% and 6.4%，P<0.01). The positive rates of P21 and P53 proteins in dysplasia (42.8% and 28.5%) were higher than those in IM (34% and 11.8%). The positive rates of P21 and P53 proteins in dysplasia with type Ⅱb IM (62.5% and 37.5%) were significantly higher than those in dysplasia with type Ⅰb IM (16.6% and 16.6%).
, 百拇医药
CONCLUSION Dysplasia accompanied by type Ⅱb IM may more easily develop gastric cancer than other lesions.
主题词 胃肿瘤/病理学； 胃粘膜/病理学； 化生； 蛋白质P53/代谢； 原癌基因蛋白质P21(ras)/代谢
中国图书资料分类号 R735.2
摘要
目的 检测胃粘膜肠化生和异型增生病变部位P21和P53蛋白表达与胃癌发生的关系.
方法 内窥镜及病理学证实为胃粘膜肠化生者44例，男26例，女18例，平均年龄47.5岁. 异型增生者14例，男9例，女5例，平均年龄64.5岁. 粘液组化将肠化生分型，免疫组化测定P21及P53蛋白表达.
, http://www.100md.com
结果 Ⅱb型肠化生P21及P53蛋白阳性率分别为70.0%和30.0%，均显著高于Ⅰb型肠化生(25.8%和6.4%，P<0.01). 异型增生P21及P53阳性率为42.8%和28.5%，高于肠化组34%和11.8%. Ⅱb型肠化异型增生P21和P53阳性率为62.5%和37.5%，也高于Ⅰb型肠化异型增生组16.6%和16.6%.
结论 分泌非中性粘液的Ⅱb型肠化异型增生带有更多与胃癌相同的生物学性状，可能与胃癌的发生关系密切.
胃粘膜肠上皮化生及异型增生系胃癌前期病变[1]，癌前病变有关基因表达异常已成为当前研究的热点. 研究表明[2，3]，P21和P53蛋白的测定对于这些疾病的诊断、治疗及预后判断具有一定意义. 我们利用免疫组化方法对慢性萎缩性胃炎肠化生，异型增生病变部位进行P21和P53蛋白测定，为进一步深入研究提供有益的线索.
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 选择1994年9月～1995年8月我院内镜室检查内窥镜及病理证实为胃窦粘膜肠化生及异型增生者58例.
1.2 方法 每例患者取胃窦部粘膜组织4～6块，10L/m3中性甲醛固定，石蜡包埋，连续切片厚5μm；分别进行HE染色，病理检查；粘液组化染色及P21和P53蛋白免疫组化反应.
1.2.1 粘液组化染色 试剂HID作用液由上海东方生化产品研制室提供. 1% AB染色及PAS染液由我院自行配制. 取一张切片做AB(pH 2.5)/PAS粘液组化染色，区别涎酸和中性粘液. 用1% AB染色后，1%过碘酸处理，再行PAS染色. 取另一片做HID/AB(pH 2.5)粘液组化染色，区别硫酸和涎酸粘液. 用HID作用液浸泡过夜后，1%AB染色. 肠化生分型标准：根据肠化生细胞产生粘液性质的不同，并参考Filipe的分型标准，将肠化分为4型：完全小肠型(Ⅰa)；完全结肠型(Ⅰb)；不完全小肠型(Ⅱa)；不完全结肠型(Ⅱb).
, 百拇医药
1.2.2 P21和P53蛋白免疫组化染色 免疫组化染色采用了SP法，其中P21和P53抗血清由Dako公司生产. SP药盒由北京中山生物化学试剂公司提供. 结果判定标准：P53阳性物质定位于细胞核内，呈棕色颗粒状. P21阳性物质位于细胞质和胞膜上，以胞膜处最明显，呈棕黄色.
统计学处理 数据经χ2检验.
2 结果
2.1 肠化组织P21和P53的表达 根据粘液组化染色，将肠化生分为Ⅰa型3例，Ⅰb型31例(其中含异型增生者6例)，Ⅱa型在粘液组化中无显示，Ⅱb型10例(其中含异型增生者8例). 根据统计学处理，Ⅱb型肠化生P21和P53染色阳性率分别为70.0%和30.0%. 均显著高于Ⅰb型25.8%和6.4%.
, 百拇医药
表1 肠化组织中P21和P53的表达
| 肠化类型 | n | P21阳性 | P53阳性 | ||
| n | (%) | n | (%) | ||
| Ⅰa型 | 3 | 0 | 0.0 | 0 | 0.0 |
| Ⅰb型 | 31 | 8 | 25.8 | 2 | 6.4 |
| Ⅱb型 | 10 | 7 | 70.0 | 3 | 30.0 |
P<0.01.
2.2 异型增生组织P21和P53表达 异型增生P53染色阳性率为28.5%，高于肠化组11.3%. P21阳性率为42.8%，也高于肠化组34%(表2). 根据粘液组化染色将异型增生分为Ⅰb型6例，Ⅱb型8例. Ⅱb型异型增生P21和P53阳性率分别为62.5%及37.5%，均高于Ⅰb型异型增生组16.6%及16.6%(表3).
, 百拇医药
表2 肠化生与异型增生组织中P21和P53的表达
| 组别 | n | P21阳性 | P53阳性 | ||
| n | (%) | n | (%) | ||
| 肠化生 | 44 | 15 | 34.0 | 5 | 11.3 |
| 异型增生 | 14 | 6 | 42.8 | 4 | 28.5 |
表3 不同类型异型增生组织中P21和P53的表达
| 粘液分型 | n | P21阳性 | P53阳性 | ||
| n | (%) | n | (%) | ||
| Ⅰa型异型增生 | 6 | 1 | 16.6 | 1 | 16.6 |
| Ⅰb型异型增生 | 8 | 5 | 62.5 | 3 | 37.5 |
, 百拇医药
3 讨论
ras基因编码高度相似的Mr 21000蛋白质，称为P21. 它参与膜的信号传递，在细胞生长、分化中起着重要作用. 如果ras基因持续激活，就能启动和加速细胞的生长、繁殖，最终导致细胞的恶性转化[4]. p53基因是机体内存在着的抑制细胞异常生长和肿瘤形成的抑癌基因. 此基因编码一种390个氨基酸Mr 53000的核磷酸蛋白，通过对DNA复制的影响而参与正常细胞的生长调控. 当p53基因发生突变时，在细胞核内大量积聚，可使细胞发生恶性转化[5]. 本研究发现，在不同类型肠化生组织中出现了P21，P53蛋白的异常表达. Ⅱb型肠化生P21及P53蛋白的阳性率明显高于Ⅰb型肠化生. 这说明在多种因素作用下，胃粘膜在肠化生阶段就已经存在着抑癌基因的减弱和癌基因的过度表达. 不全结肠型肠化生不仅组织学上较完全型肠化生分化差，异常基因产物也明显高于完全型肠化生.
, 百拇医药
在伴有不同类型肠化的异型增生组织中，具有不全结肠型肠化的异型增生其P21及P53蛋白表达阳性率高于具有完全结肠型肠化异型增生组织.这说明分泌非中性粘液的Ⅱb型异型增生带有更多与胃癌相同的生物学性状. 在所有癌前病变中，此种病变可能与胃癌的发生关系密切，应给予高度重视.
本研究还表明，P21和P53蛋白之间有协同阳性表达. 在肠化生中共同阳性率为11.3%，在异型增生中上升为28.5%，而无1例单独显示P53阳性. 这说明，随着癌前病变的加重，协同表达率逐渐升高. 一个癌基因的激活不足以引起细胞的恶性转化，而需要至少一种以上激活癌基因或失活抗癌基因的协作，甚至还需要其它因素参与才能促进癌变的发生.
实验中我们还观察到，无论是肠化生还是异型增生P21蛋白阳性表达率均高于P53蛋白. 这说明在癌变的发生中，ras基因的激活大多先于抗癌基因的失活. 可能在癌基因激活的基础上，大量转化蛋白与抗癌基因蛋白结合导致了抗癌基因的失活. 因此，在癌前病变中，检测P21蛋白可能较P53蛋白更早地发现基因的突变，可作为癌变早期诊断的一个标志物.
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4 参考文献
1 徐采朴，刘为纹. 慢性胃炎、肠化及不典型增生的随访观察. 中华消化杂志，1984；4(1)：10-12
2 Shiao YH, Rugge M. P53 alteration in gastric precancerous lesions. Am J Pathol, 1994;144(3):511-517
3 房殿春，刘为纹. 应用免疫组化方法检测癌基因ras产物P21在胃癌及癌前组织的表达. 新消化病学杂志，1994；2(4)：225-226
4 Zhang K, Declue JE, Vass WC, et al. Suppression of C-ras transforming by GTPase acti-vating protein. Nature,
1990;396(7):754-756
5 Levine AJ. The P53 suppressor gene. N Engl J Med, 1992;326(20):1350-1352, http://www.100md.com(林 静1 沈金库1 于淑霞1 戴 洁2 薄爱华2 姚希贤3)