幽门螺杆菌阳性胃粘膜病变AgNOR和rasp21的表达*
南京医科大学第一附属医院消化科 江苏省南京市 210029
*部分内容已于1996-02-28在广州举行的首届西太平洋地区Hp国际会议及1996-07-03在Kuala Lumpur举行的’96国际胃病会议上作大会报告，摘要发表在Gastroenterol Hepatol, 1996;11(Suppl 1):A23及1996；11(Suppl 2):A55.
作者简介 郜恒骏，男，1965-07-10生，江苏江都县人，汉族. 1986年扬州医学院医学系毕业，1995年上海中医药大学消化专业硕士研究生毕业，主治医师，讲师. 主要从事胃肠病防治的研究[江苏省南京市广洲路300号. 电话(025)3714511-6255(6542)或(025)3720720-67596].(收稿 1997-05-20 修回 1997-08-25)
AgNOR and rasp21 expression in gastric mucosal lesions with Helicobacter pylori infection
, 百拇医药
GAO Heng-Jun, LU Xiu-Zhen, ZHANG Xiao-Yong and ZHAO Zhi-Quan
Department of Gastroenterology, The First Affiliated Hospital, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China
Subject headings Helicobacter pylori/pathogenicity; gastric mucosal/pathology; stomach diseases/microbiology; stomach neoplasms/microbiology; nucleoproteins/metabolism; proto-oncogene protein P21/(RAS)
, 百拇医药
Abstract
AIM To study the number of AgNOR and rasp21 expression in different gastric mucosal lesions with Helicobacter pylori (Hp) infection to evaluate their biological behaviour and possible mechanism of Hp.
METHODS Hp (using CLO test combined with Wathin-Starry staining), AgNOR (silver colloid technique) and rasp21 (monoclonal antibody and immunohistochemical staining—ABC method) were detected in 278 patients with endoscopically and pathologically confirmed gastric mucosal lesions, including chronic superficial gastritis (CSG), chronic atrophic gastritis (CAG), intestinal metaplasia (IM), dysplasia (Dys), and gastric cancer (GC). Among them, 146 cases were Hp positive, and 132 cases Hp negative.
, 百拇医药
RESULTS The mean number of AgNOR in Hp positive group was significantly higher than that in Hp negative group in the gastric mucosal lesions except for CSG (P<0.05 or P<0.01). The positive rate of rasp21 expression in Hp positive group was also significantly higher than that in Hp negative group in gastric mucosal lesions except for CSG and CAG (P<0.05).
CONCLUSION Hp+ gastric mucosal lesions have more biological behaviour of tumors. Hp may act as a promoter to activate ras gene and to stimulate cell over proliferation.
, 百拇医药
主题词 螺杆菌，幽门/致病力； 胃粘膜/病理学； 胃疾病/微生物学；胃肿瘤/微生物学； 核蛋白类/代谢； 原癌基因蛋白质P21(RAS)
中国图书资料分类号 R735.2 R573.3
摘要
目的 研究幽门螺杆菌阳性(Hp+)不同胃粘膜病变的AgNOR数量及rasp21阳性表达率，探讨其生物学行为及Hp在此过程中可能的作用.
方法 经内窥镜病理检查证实胃粘膜病变(慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生、胃癌)共计278例. 通过Hp检测(CLO test结合Warthin-Starry 染色)证实其中146例阳性，132例阴性. 分别对其粘膜标本作了AgNOR定 量及rasp21表达的研究，比较不同胃粘膜病变中Hp阳性和阴性组间AgNOR数目和rasp21阳性表达率.
, http://www.100md.com
结果 除慢性浅表性胃炎外各病变中Hp+组的AgNOR数量均显著高于Hp-组(P<0.05或P<0.01)；除慢性浅表性胃炎及慢性萎缩性胃炎外各病变中Hp+组的rasp21阳性表达率均显著高于Hp-组(P<0.05).
结论 Hp+胃粘膜病变具有更多的肿瘤生物学行为，该菌可能刺激胃上皮细胞的过度增殖而启动恶性变.
慢性浅表性胃炎(CSG)→慢性萎缩性胃炎 (CAG)→肠上皮化生(IM)→异型增生(Dys)→胃癌(GC)的演变过程已经明确[1，2].作为慢性胃炎的主要病因幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)感染在此过程中的作用值得进一步研究. 1993年～1996年我们对Hp+不同胃粘膜病变作核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)定量及rasp21表达的研究，以探讨其生物学行为及Hp在此过程中可能的作用机理.
, http://www.100md.com
1 对象和方法
1.1 对象 278例患者均因上消化道不适而就诊，均接受内窥镜检查和Hp检测. 内窥镜检查于胃窦前后壁、大小弯侧各钳取1块组织作病理检查，病理诊断由主任医师确定. 最后诊断为CSG 60例，CAG 60例，IM 50例，Dys 29例，IM+Dys 39例和GC 40例. Hp+诊断用CLO test结合病理Warthin-Starry染色而确定. 从CSG→GC，Hp+组分别为39，31，24，13，21和18例，Hp-组分别为21，29，26，16，18和22例.
1.2 方法
1.2.1 AgNOR染色、计数 石蜡切片烘干、脱蜡，酒精逐渐下行至蒸馏水中. 滴加AgNOR染色液(上海虹桥医院试剂实验研究所930875)暗盒内染40min～45min，去离子水水洗，脱水后吹干封片. 计数采用1993年6月制定的“上海方案”，即 ①计数每一个可辨别的颗粒； ②直径≥2.5μm的颗粒按5个计数；③最后按单位细胞核内的AgNOR数计算；④同时注意颗粒形态变化. 染色后的细胞核呈淡黄色，AgNOR呈棕黑色位于核内或核仁内，每例在油镜下计数100个细胞，求均值. 分别比较Hp+和Hp-组AgNOR数目.
, 百拇医药
1.2.2 rasp21表达的免疫组化研究 应用ABC免疫组化染色法. 抗rasp21单克隆抗体(Dako，USA)，ABC盒及鼠抗人二抗(IgG)购自Vector(USA). 染色步骤按ABC法常规操作. 已知阳性切片重复染色作阳性对照，以正常鼠血清替代一抗，PBS替代桥抗体分别作阴性对照. 以细胞膜或细胞浆着深褐色为阳性细胞，说明p21表达增多，比较两组阳性表达率.
统计学处理 分别用t检验(AgNOR)、χ2检验及四格表确切概率法(rasp21).
2 结果
2.1 AgNOR数目 除CSG外，其余各病变中Hp+组均显著高于阴性组(P<0.05或P<0.01，表1).
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2.2 rasp21阳性表达率 除CSG、CAG外，其余各病变中Hp+组均显著高于阴性组(P<0.05，表1).
表1 Hp阳性及阴性胃粘膜病变AgNOR数目及rasp21阳性表达率
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01，cP<0.05(四格表确切概率法).
3 讨论
从慢性胃炎经过CAG，IM，Dys，最后发展到GC[1，2]一般需十几年甚至几十年时间，作为慢性胃炎的主要病因Hp感染在此演变过程中作用的研究尤其重要[1]. 已有大量研究表明，Hp感染与GC发生密切相关[1，3]，为此WHO已正式将Hp纳入第一类致癌因子[4]，但其致病机制尚不清. 众多研究提示，细胞增殖加速是人类细胞癌变的重要机制[5]. 近年来，AgNOR已用于多种肿瘤进行细胞动力学研究及良恶性判定，其效果等同于Brdu参入及流式细胞术测定[6]. 因此，AgNOR数目可反映细胞增殖和分化状态，故可作为细胞分化异常的定量指标. 本研究发现从CSG→GC，除CSG外，其余各病变中Hp+组AgNOR数目均显著高于阴性组(P<0.05或P<0.01，表1). 正常细胞ras基因表达产物P21蛋白定位于细胞膜内表面，能将细胞外信号传入细胞内，维持细胞正常生长和代谢，受刺激后ras基因被激活从而引起细胞功能异常和持续增殖. IM，Dys也出现P21增强的表达，表明P21过度表达发生在癌变之前，提示间变细胞ras基因开始活化，基因产物已大量增加[7]. Ohuchi等[8]追踪15年发现演变为GC的Dys P21表达高于不演变为GC的Dys. 本组研究发现Hp+ CSG中仅1例有表达，其余各病变Hp+组rasp21阳性表达率均高于阴性组，除CAG外，均有显著性差异(P<0.05).
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Hp+胃粘膜病变的AgNOR及rasp21研究表明其粘膜上皮细胞增殖指数多明显升高，具有更多的肿瘤的生物学行为. 在此演变过程中Hp可能作为促进剂，通过激活ras基因而引起细胞过度增殖. 对Hp致癌机制如对P53及细胞凋亡(apoptosis)的影响正在进一步研究之中.
4 参考文献
1 Forman D. The prevalence of Helicobacter pylori infection in gastric cancer. Aliment pharmalol Ther, 1995;9(S2):71-76
2 Correa P. Human gastric carcinogenesis: a multistep and multifractorial process. First American cancer society award lecture on
, http://www.100md.com
cancer epidemiology and prevention. Cancer Res, 1992;52(24):6735-6740
3 Forman D, Webb P, Parsonnet J. H.pylori and gastric cancer. Lancet, 1994;343(8891):243-244
4 IARC Working group on the evaluation of carcinogenic risks to human. Schistosomes, liver flukes and Helicobacter pylori.
IARC WHO Agency and Secretariat, 1994:177
5 Preston-Martin S, Pike MC, Ross RK, et al. Increased cell division as a cause of human cancer. Cancer Res,
, 百拇医药
1990;50(23):7415-7421
6 Egan MJ, Croken J. Nucleolar organizer regions in pathology. Br J Cancer, 1992;65(1):1-5
7 于君，张锦坤. 癌基因产物P21蛋白在胃癌及癌前病变的表达. 中国肿瘤临床，1994；21(12)：902-904
8 Ohuchi N, Expression of the 21,000 molecular weight ras protein in a spectrum of benign and malignant human mammary
tissue. Cancer Res, 1986;46(9):2511-2514, http://www.100md.com(郜恒骏 吕秀珍 张小勇 赵志泉)
*部分内容已于1996-02-28在广州举行的首届西太平洋地区Hp国际会议及1996-07-03在Kuala Lumpur举行的’96国际胃病会议上作大会报告，摘要发表在Gastroenterol Hepatol, 1996;11(Suppl 1):A23及1996；11(Suppl 2):A55.
作者简介 郜恒骏，男，1965-07-10生，江苏江都县人，汉族. 1986年扬州医学院医学系毕业，1995年上海中医药大学消化专业硕士研究生毕业，主治医师，讲师. 主要从事胃肠病防治的研究[江苏省南京市广洲路300号. 电话(025)3714511-6255(6542)或(025)3720720-67596].(收稿 1997-05-20 修回 1997-08-25)
AgNOR and rasp21 expression in gastric mucosal lesions with Helicobacter pylori infection
, 百拇医药
GAO Heng-Jun, LU Xiu-Zhen, ZHANG Xiao-Yong and ZHAO Zhi-Quan
Department of Gastroenterology, The First Affiliated Hospital, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China
Subject headings Helicobacter pylori/pathogenicity; gastric mucosal/pathology; stomach diseases/microbiology; stomach neoplasms/microbiology; nucleoproteins/metabolism; proto-oncogene protein P21/(RAS)
, 百拇医药
Abstract
AIM To study the number of AgNOR and rasp21 expression in different gastric mucosal lesions with Helicobacter pylori (Hp) infection to evaluate their biological behaviour and possible mechanism of Hp.
METHODS Hp (using CLO test combined with Wathin-Starry staining), AgNOR (silver colloid technique) and rasp21 (monoclonal antibody and immunohistochemical staining—ABC method) were detected in 278 patients with endoscopically and pathologically confirmed gastric mucosal lesions, including chronic superficial gastritis (CSG), chronic atrophic gastritis (CAG), intestinal metaplasia (IM), dysplasia (Dys), and gastric cancer (GC). Among them, 146 cases were Hp positive, and 132 cases Hp negative.
, 百拇医药
RESULTS The mean number of AgNOR in Hp positive group was significantly higher than that in Hp negative group in the gastric mucosal lesions except for CSG (P<0.05 or P<0.01). The positive rate of rasp21 expression in Hp positive group was also significantly higher than that in Hp negative group in gastric mucosal lesions except for CSG and CAG (P<0.05).
CONCLUSION Hp+ gastric mucosal lesions have more biological behaviour of tumors. Hp may act as a promoter to activate ras gene and to stimulate cell over proliferation.
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主题词 螺杆菌，幽门/致病力； 胃粘膜/病理学； 胃疾病/微生物学；胃肿瘤/微生物学； 核蛋白类/代谢； 原癌基因蛋白质P21(RAS)
中国图书资料分类号 R735.2 R573.3
摘要
目的 研究幽门螺杆菌阳性(Hp+)不同胃粘膜病变的AgNOR数量及rasp21阳性表达率，探讨其生物学行为及Hp在此过程中可能的作用.
方法 经内窥镜病理检查证实胃粘膜病变(慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生、胃癌)共计278例. 通过Hp检测(CLO test结合Warthin-Starry 染色)证实其中146例阳性，132例阴性. 分别对其粘膜标本作了AgNOR定 量及rasp21表达的研究，比较不同胃粘膜病变中Hp阳性和阴性组间AgNOR数目和rasp21阳性表达率.
, http://www.100md.com
结果 除慢性浅表性胃炎外各病变中Hp+组的AgNOR数量均显著高于Hp-组(P<0.05或P<0.01)；除慢性浅表性胃炎及慢性萎缩性胃炎外各病变中Hp+组的rasp21阳性表达率均显著高于Hp-组(P<0.05).
结论 Hp+胃粘膜病变具有更多的肿瘤生物学行为，该菌可能刺激胃上皮细胞的过度增殖而启动恶性变.
慢性浅表性胃炎(CSG)→慢性萎缩性胃炎 (CAG)→肠上皮化生(IM)→异型增生(Dys)→胃癌(GC)的演变过程已经明确[1，2].作为慢性胃炎的主要病因幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)感染在此过程中的作用值得进一步研究. 1993年～1996年我们对Hp+不同胃粘膜病变作核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)定量及rasp21表达的研究，以探讨其生物学行为及Hp在此过程中可能的作用机理.
, http://www.100md.com
1 对象和方法
1.1 对象 278例患者均因上消化道不适而就诊，均接受内窥镜检查和Hp检测. 内窥镜检查于胃窦前后壁、大小弯侧各钳取1块组织作病理检查，病理诊断由主任医师确定. 最后诊断为CSG 60例，CAG 60例，IM 50例，Dys 29例，IM+Dys 39例和GC 40例. Hp+诊断用CLO test结合病理Warthin-Starry染色而确定. 从CSG→GC，Hp+组分别为39，31，24，13，21和18例，Hp-组分别为21，29，26，16，18和22例.
1.2 方法
1.2.1 AgNOR染色、计数 石蜡切片烘干、脱蜡，酒精逐渐下行至蒸馏水中. 滴加AgNOR染色液(上海虹桥医院试剂实验研究所930875)暗盒内染40min～45min，去离子水水洗，脱水后吹干封片. 计数采用1993年6月制定的“上海方案”，即 ①计数每一个可辨别的颗粒； ②直径≥2.5μm的颗粒按5个计数；③最后按单位细胞核内的AgNOR数计算；④同时注意颗粒形态变化. 染色后的细胞核呈淡黄色，AgNOR呈棕黑色位于核内或核仁内，每例在油镜下计数100个细胞，求均值. 分别比较Hp+和Hp-组AgNOR数目.
, 百拇医药
1.2.2 rasp21表达的免疫组化研究 应用ABC免疫组化染色法. 抗rasp21单克隆抗体(Dako，USA)，ABC盒及鼠抗人二抗(IgG)购自Vector(USA). 染色步骤按ABC法常规操作. 已知阳性切片重复染色作阳性对照，以正常鼠血清替代一抗，PBS替代桥抗体分别作阴性对照. 以细胞膜或细胞浆着深褐色为阳性细胞，说明p21表达增多，比较两组阳性表达率.
统计学处理 分别用t检验(AgNOR)、χ2检验及四格表确切概率法(rasp21).
2 结果
2.1 AgNOR数目 除CSG外，其余各病变中Hp+组均显著高于阴性组(P<0.05或P<0.01，表1).
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2.2 rasp21阳性表达率 除CSG、CAG外，其余各病变中Hp+组均显著高于阴性组(P<0.05，表1).
表1 Hp阳性及阴性胃粘膜病变AgNOR数目及rasp21阳性表达率
| 诊断 | n | AgNOR(x±s) | rasp21(%) | ||
| Hp阳性 | Hp阴性 | Hp阳性 | Hp阴性 | ||
| CSG | 60 | 2.03±0.12 | 1.97±0.13 | 1.0 | 0.0 |
| CAG | 60 | 4.82±0.97 | 2.43±0.75a | 38.2 | 26.7 |
| IM | 50 | 5.74±0.38 | 3.03±0.35a | 66.8 | 40.3a |
| Dys | 29 | 7.57±0.79 | 4.13±0.72b | 75.7 | 45.6c |
| IM+Dys | 39 | 7.96±0.86 | 4.21±0.81b | 79.4 | 50.3c |
| GC | 40 | 11.87±0.64 | 9.45±0.53a | 80.2 | 56.3a |
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aP<0.05，bP<0.01，cP<0.05(四格表确切概率法).
3 讨论
从慢性胃炎经过CAG，IM，Dys，最后发展到GC[1，2]一般需十几年甚至几十年时间，作为慢性胃炎的主要病因Hp感染在此演变过程中作用的研究尤其重要[1]. 已有大量研究表明，Hp感染与GC发生密切相关[1，3]，为此WHO已正式将Hp纳入第一类致癌因子[4]，但其致病机制尚不清. 众多研究提示，细胞增殖加速是人类细胞癌变的重要机制[5]. 近年来，AgNOR已用于多种肿瘤进行细胞动力学研究及良恶性判定，其效果等同于Brdu参入及流式细胞术测定[6]. 因此，AgNOR数目可反映细胞增殖和分化状态，故可作为细胞分化异常的定量指标. 本研究发现从CSG→GC，除CSG外，其余各病变中Hp+组AgNOR数目均显著高于阴性组(P<0.05或P<0.01，表1). 正常细胞ras基因表达产物P21蛋白定位于细胞膜内表面，能将细胞外信号传入细胞内，维持细胞正常生长和代谢，受刺激后ras基因被激活从而引起细胞功能异常和持续增殖. IM，Dys也出现P21增强的表达，表明P21过度表达发生在癌变之前，提示间变细胞ras基因开始活化，基因产物已大量增加[7]. Ohuchi等[8]追踪15年发现演变为GC的Dys P21表达高于不演变为GC的Dys. 本组研究发现Hp+ CSG中仅1例有表达，其余各病变Hp+组rasp21阳性表达率均高于阴性组，除CAG外，均有显著性差异(P<0.05).
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Hp+胃粘膜病变的AgNOR及rasp21研究表明其粘膜上皮细胞增殖指数多明显升高，具有更多的肿瘤的生物学行为. 在此演变过程中Hp可能作为促进剂，通过激活ras基因而引起细胞过度增殖. 对Hp致癌机制如对P53及细胞凋亡(apoptosis)的影响正在进一步研究之中.
4 参考文献
1 Forman D. The prevalence of Helicobacter pylori infection in gastric cancer. Aliment pharmalol Ther, 1995;9(S2):71-76
2 Correa P. Human gastric carcinogenesis: a multistep and multifractorial process. First American cancer society award lecture on
, http://www.100md.com
cancer epidemiology and prevention. Cancer Res, 1992;52(24):6735-6740
3 Forman D, Webb P, Parsonnet J. H.pylori and gastric cancer. Lancet, 1994;343(8891):243-244
4 IARC Working group on the evaluation of carcinogenic risks to human. Schistosomes, liver flukes and Helicobacter pylori.
IARC WHO Agency and Secretariat, 1994:177
5 Preston-Martin S, Pike MC, Ross RK, et al. Increased cell division as a cause of human cancer. Cancer Res,
, 百拇医药
1990;50(23):7415-7421
6 Egan MJ, Croken J. Nucleolar organizer regions in pathology. Br J Cancer, 1992;65(1):1-5
7 于君，张锦坤. 癌基因产物P21蛋白在胃癌及癌前病变的表达. 中国肿瘤临床，1994；21(12)：902-904
8 Ohuchi N, Expression of the 21,000 molecular weight ras protein in a spectrum of benign and malignant human mammary
tissue. Cancer Res, 1986;46(9):2511-2514, http://www.100md.com(郜恒骏 吕秀珍 张小勇 赵志泉)