血清抗HBs阳性慢性肝病患者的病因研究
1解放军155医院传染科 河南省开封市 475003
2西安医科大学第二附属医院
3河南省开封市传染病医院
陈耀凯，男，1966-12-27生，河南省固始县人，汉族. 1994年西安医科大学毕业，医学硕士，主治医师，主要从事传染病防治研究，已发表论文26篇.
项目负责人 陈耀凯，475003，解放军155医院传染科，河南省开封市医院前街3号Correspondence to Yao-Kai Chen, Department of Infections Diseases, Chinese PLA 155 Hospital,3 Yiyuan Qianjie, Kaifeng 475003, Henan Province, China
, 百拇医药
Tel. +86·378·3932210-2967
收稿日期 1997-07-27
Study on causes of serum antiHBs positive patients with chronic liver diseases
Yao-Kai Chen1, Xiu-Bin Wu2 and Zhen-Ying Zhang 3
1Department of Infectious Diseases, Chinese PLA 155 Hospital, Kaifeng 475003, Henan Province, China
, http://www.100md.com
2The Second Affiliated Hospital of Xi′an Medical University, Xi′an 710004, Shaanxi Province, China
3Kaifeng Municipal Infectious Diseases Hospital, Kaifeng 475001, Henan Province, China
Abstract
AIM To investigate the causes of chronic liver diseases with positive serum antiHBs.
METHODS HBV DNA and HCV RNA were detected in the sera from anti-HBs positive patients with chronic liver diseases using nested polymerase chain reaction. Thirty-two patients (25 male, 7 female) with average age of 41.7 years (21 to 63 years) were studied, including 18 chronic hepatitis and 14 cirrhosis. Nine cases of chronic hepatitis and 5 cases of cirrhosis were diagnosed by liver biopsy and the others based on the clinical diagnostic criteria.
, 百拇医药
RESULTS The positive rates of HBV DNA and HCV RNA were 62.5%(20/32) and 28.1%(9/32) respectively, with a total detectable rate of 81.3%(26/32).
CONCLUSION Serum anti-HBs positive patients with chronic liver diseases are mostly related to HBV and/or HCV infection.
Subject headings hepatitis, viral, human/etiology; hepatitis B surface antigens/analysis;
, 百拇医药
hepatitis B virus/genetics; hepatitis C-like viruses/genetics; DNA, viral/analysis
Chen YK, Wu XB, Zhang ZY. Study on causes of serum anti-HBs positive patients with chronic liver diseases.
Huaren Xiaohua Zazhi, 1998;6(1):49-50
摘要
目的 部分抗-HBs阳性者仍有活动性肝病存在，其病因还不十分清楚. 本研究旨在探讨血清抗HBs阳性慢性肝病患者的病因.
, 百拇医药 方法 应用套式聚合酶链反应检测血清抗HBs阳性慢性肝病患者血清中HBV DNA和HCV RNA. 患者32例，男25例，女7例，平均年龄41.7岁(21岁～63岁)，其中慢性 肝炎18例，肝硬变14例.9例慢性肝炎和5例肝硬变经肝活检证实，其余为临床诊断.
结果 血清中HBV DNA和HCV RNA的检出率分别为62.5%(20/32)和28.1%(9/32)；HBV DNA和(或)HCV RNA总检出率为81.3%(26/32).结论 血清抗HBs阳性慢性肝病患者的病因多数与HBV和(或)HCV感染有关.
主题词 肝炎，病毒性，人/病因学；肝炎表面抗原，乙型/分析；肝炎病毒，乙型/遗传学；C型肝炎样病毒属/遗传学；DNA，病毒/分析
陈耀凯, 吴修斌, 张振英. 血清抗HBs阳性慢性肝病患者的病因研究. 华人消化杂志, 1998;6(1):49-50
, 百拇医药
0 引言
一般认为，血清抗HBs的出现和存在是乙型肝炎病毒(HBV)清除的标志. 然而近年来发现部分抗-HBs阳性者仍有活动性肝病存在[1-3]. 虽然已有文献报道此类患者的病因可能与HBV感染有关，但HBV DNA检出率相差甚大，表明抗HBs阳性慢性肝病患者的病因仍不十分清楚. 为此，我们应用套式聚合酶链反应(PCR)技术检测了32例血清抗HBs阳性慢性肝病患者血清中HBV DNA和HCV RNA.
1 对象和方法
1.1 对象 慢性肝病患者32例，男25例，女7例，平均年龄41.7岁(21岁～63岁)，其中慢性肝炎18例，肝硬变14例. 所有病例均排除乙肝疫苗接种史，9例单项抗-HBs阳性，13例抗HBs和抗-HBc阳性，4例抗-HBs和抗-HBe阳性，6例抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc均阳性. 诊断符合1995年北京全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准. 9例慢性肝炎和5例肝硬变经肝活检证实，其余为临床诊断.
, 百拇医药
1.2 方法 采用多重套式PCR技术检测HBV DNA和HCV RNA(PCR试剂由第二军医大学提供). HBV引物位于中国HBV株高度同源性的S基因区，扩增产物为523bp；HCV引物位于HCV RNA5′端非编码区，扩增产物为260bp. 操作步骤：①血清50μl用SDS蛋白酶K-饱和酚法提取HBV DNA和HCV RNA作为模板；②血清提取物，HBV外套引物各0.2μmol/L，HCV外套引物0.5μmol/L，10倍反应缓冲液3μl，Mg++ 2.5mmol/L， dNTP各0.2mmol/L，逆转录酶2.4U，RNasin 8U,Taq聚合酶0.75U，反应总体积30μl；③取第一次扩增产物为模板，加HBV和HCV内套引物各0.5mmol/L，除逆转录外其余步骤同②，反应总体积30μl；④第二次扩增产物电泳后溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果. 每次实验均设阳性和阴性对照，并随机抽 取部分标本作重复实验.
2 结果
, 百拇医药
HBV DNA和HCV RNA的检出率分别为62.5%(20/32)和28.1%(9/32)，其中9.4%(3/32)同时检出HBV DNA和HCV RNA；HBV DNA和(或)HCV RNA总检出率为81.3%(26/32).
3 讨论
套式PCR是一种新型的PCR反应，它采用内外引物分别对测定标本中的模板DNA进行扩增，不仅增强了PCR反应的特异性，而且可使检测敏感度稳定地提高1000倍，可以检出反应体系中2分子HBV DNA(1pg≈3×105分子)，而单次PCR检测呈阳性的反应体系约需要近103分子以上HBV DNA[1]. 作者所用多重套式PCR技术可以同时扩增HBV DNA和HCV RNA，较一般套式PCR技术更为方便实用. 本组32例抗HBs阳性慢性肝病患者中，62.5%(20/32)可以检出HBV DNA，HBV DNA和(或)HCV RNA总检出率为81.3%(26/32). 表明此类患者的病因多数仍与病毒感染有关，且以HBV感染为主.
, 百拇医药
一般认为，血清中检出HBV DNA即表示HBV在体内存在并复制. 部分HBV感染者出现抗-HBs后体内仍能检出HBV DNA并与肝病活动有关，可能有三种解释：一是HBV变异株感染或HBV基因突变[1，3]，在此情况下病毒可以逃避宿主体内抗HBs的免疫清除作用；二是HBV与抗-HBs形成免疫复合物而存在[4]；三是抗HBs效价低，因为抗HBs的保护作用与效价呈平行关系，抗HBs滴度≥10IU/L时才具有保护
作用[5].
HCV RNA是HCV复制及复制程度的重要标志，而HCV复制与肝病活动密切相关. 本组HCV RNA的检出率为28.1%(9/32)，其中9.4%(3/32)同时检出HBV DNA和HCV RNA，表明HCV单独或重叠感染也是导致抗HBs阳性肝病患者病情活动的重要原因之一.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 何晋德，吴晶新，杜绍财，陶其敏. 套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA.
中华内科杂志，1996;35(8):537-541
2 Kaneko S, Miller RH, Feinstone SM, Pickens M. Detection of serum hepatitis B virus DNA in patients with chronic hepatitis using
the polymerase chain reaction assay. Proc Natl Acad Sci USA, 1989;86(1):312-317
3 骆抗先，周荣，梁炽森，陈伟华，王志明. 聚合酶链反应鉴定HBsAg阴性慢性活动性乙型肝炎病毒感染. 中华内科杂志，1991；30(1)：21-23
4 张永新，杜绍财，陈萍，丛云辉，田庚善. 肝炎恢复期乙型肝炎抗体阳性的乙肝病毒DNA. 中华内科杂志，1992；31(1)：629-631
5 高寿征主编. 病毒性肝炎防治研究. 第1版. 北京：北京出版社，1993：20-22, 百拇医药(陈耀凯1 吴修斌2 张振英3)
2西安医科大学第二附属医院
3河南省开封市传染病医院
陈耀凯，男，1966-12-27生，河南省固始县人，汉族. 1994年西安医科大学毕业，医学硕士，主治医师，主要从事传染病防治研究，已发表论文26篇.
项目负责人 陈耀凯，475003，解放军155医院传染科，河南省开封市医院前街3号Correspondence to Yao-Kai Chen, Department of Infections Diseases, Chinese PLA 155 Hospital,3 Yiyuan Qianjie, Kaifeng 475003, Henan Province, China
, 百拇医药
Tel. +86·378·3932210-2967
收稿日期 1997-07-27
Study on causes of serum antiHBs positive patients with chronic liver diseases
Yao-Kai Chen1, Xiu-Bin Wu2 and Zhen-Ying Zhang 3
1Department of Infectious Diseases, Chinese PLA 155 Hospital, Kaifeng 475003, Henan Province, China
, http://www.100md.com
2The Second Affiliated Hospital of Xi′an Medical University, Xi′an 710004, Shaanxi Province, China
3Kaifeng Municipal Infectious Diseases Hospital, Kaifeng 475001, Henan Province, China
Abstract
AIM To investigate the causes of chronic liver diseases with positive serum antiHBs.
METHODS HBV DNA and HCV RNA were detected in the sera from anti-HBs positive patients with chronic liver diseases using nested polymerase chain reaction. Thirty-two patients (25 male, 7 female) with average age of 41.7 years (21 to 63 years) were studied, including 18 chronic hepatitis and 14 cirrhosis. Nine cases of chronic hepatitis and 5 cases of cirrhosis were diagnosed by liver biopsy and the others based on the clinical diagnostic criteria.
, 百拇医药
RESULTS The positive rates of HBV DNA and HCV RNA were 62.5%(20/32) and 28.1%(9/32) respectively, with a total detectable rate of 81.3%(26/32).
CONCLUSION Serum anti-HBs positive patients with chronic liver diseases are mostly related to HBV and/or HCV infection.
Subject headings hepatitis, viral, human/etiology; hepatitis B surface antigens/analysis;
, 百拇医药
hepatitis B virus/genetics; hepatitis C-like viruses/genetics; DNA, viral/analysis
Chen YK, Wu XB, Zhang ZY. Study on causes of serum anti-HBs positive patients with chronic liver diseases.
Huaren Xiaohua Zazhi, 1998;6(1):49-50
摘要
目的 部分抗-HBs阳性者仍有活动性肝病存在，其病因还不十分清楚. 本研究旨在探讨血清抗HBs阳性慢性肝病患者的病因.
, 百拇医药 方法 应用套式聚合酶链反应检测血清抗HBs阳性慢性肝病患者血清中HBV DNA和HCV RNA. 患者32例，男25例，女7例，平均年龄41.7岁(21岁～63岁)，其中慢性 肝炎18例，肝硬变14例.9例慢性肝炎和5例肝硬变经肝活检证实，其余为临床诊断.
结果 血清中HBV DNA和HCV RNA的检出率分别为62.5%(20/32)和28.1%(9/32)；HBV DNA和(或)HCV RNA总检出率为81.3%(26/32).结论 血清抗HBs阳性慢性肝病患者的病因多数与HBV和(或)HCV感染有关.
主题词 肝炎，病毒性，人/病因学；肝炎表面抗原，乙型/分析；肝炎病毒，乙型/遗传学；C型肝炎样病毒属/遗传学；DNA，病毒/分析
陈耀凯, 吴修斌, 张振英. 血清抗HBs阳性慢性肝病患者的病因研究. 华人消化杂志, 1998;6(1):49-50
, 百拇医药
0 引言
一般认为，血清抗HBs的出现和存在是乙型肝炎病毒(HBV)清除的标志. 然而近年来发现部分抗-HBs阳性者仍有活动性肝病存在[1-3]. 虽然已有文献报道此类患者的病因可能与HBV感染有关，但HBV DNA检出率相差甚大，表明抗HBs阳性慢性肝病患者的病因仍不十分清楚. 为此，我们应用套式聚合酶链反应(PCR)技术检测了32例血清抗HBs阳性慢性肝病患者血清中HBV DNA和HCV RNA.
1 对象和方法
1.1 对象 慢性肝病患者32例，男25例，女7例，平均年龄41.7岁(21岁～63岁)，其中慢性肝炎18例，肝硬变14例. 所有病例均排除乙肝疫苗接种史，9例单项抗-HBs阳性，13例抗HBs和抗-HBc阳性，4例抗-HBs和抗-HBe阳性，6例抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc均阳性. 诊断符合1995年北京全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准. 9例慢性肝炎和5例肝硬变经肝活检证实，其余为临床诊断.
, 百拇医药
1.2 方法 采用多重套式PCR技术检测HBV DNA和HCV RNA(PCR试剂由第二军医大学提供). HBV引物位于中国HBV株高度同源性的S基因区，扩增产物为523bp；HCV引物位于HCV RNA5′端非编码区，扩增产物为260bp. 操作步骤：①血清50μl用SDS蛋白酶K-饱和酚法提取HBV DNA和HCV RNA作为模板；②血清提取物，HBV外套引物各0.2μmol/L，HCV外套引物0.5μmol/L，10倍反应缓冲液3μl，Mg++ 2.5mmol/L， dNTP各0.2mmol/L，逆转录酶2.4U，RNasin 8U,Taq聚合酶0.75U，反应总体积30μl；③取第一次扩增产物为模板，加HBV和HCV内套引物各0.5mmol/L，除逆转录外其余步骤同②，反应总体积30μl；④第二次扩增产物电泳后溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果. 每次实验均设阳性和阴性对照，并随机抽 取部分标本作重复实验.
2 结果
, 百拇医药
HBV DNA和HCV RNA的检出率分别为62.5%(20/32)和28.1%(9/32)，其中9.4%(3/32)同时检出HBV DNA和HCV RNA；HBV DNA和(或)HCV RNA总检出率为81.3%(26/32).
3 讨论
套式PCR是一种新型的PCR反应，它采用内外引物分别对测定标本中的模板DNA进行扩增，不仅增强了PCR反应的特异性，而且可使检测敏感度稳定地提高1000倍，可以检出反应体系中2分子HBV DNA(1pg≈3×105分子)，而单次PCR检测呈阳性的反应体系约需要近103分子以上HBV DNA[1]. 作者所用多重套式PCR技术可以同时扩增HBV DNA和HCV RNA，较一般套式PCR技术更为方便实用. 本组32例抗HBs阳性慢性肝病患者中，62.5%(20/32)可以检出HBV DNA，HBV DNA和(或)HCV RNA总检出率为81.3%(26/32). 表明此类患者的病因多数仍与病毒感染有关，且以HBV感染为主.
, 百拇医药
一般认为，血清中检出HBV DNA即表示HBV在体内存在并复制. 部分HBV感染者出现抗-HBs后体内仍能检出HBV DNA并与肝病活动有关，可能有三种解释：一是HBV变异株感染或HBV基因突变[1，3]，在此情况下病毒可以逃避宿主体内抗HBs的免疫清除作用；二是HBV与抗-HBs形成免疫复合物而存在[4]；三是抗HBs效价低，因为抗HBs的保护作用与效价呈平行关系，抗HBs滴度≥10IU/L时才具有保护
作用[5].
HCV RNA是HCV复制及复制程度的重要标志，而HCV复制与肝病活动密切相关. 本组HCV RNA的检出率为28.1%(9/32)，其中9.4%(3/32)同时检出HBV DNA和HCV RNA，表明HCV单独或重叠感染也是导致抗HBs阳性肝病患者病情活动的重要原因之一.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 何晋德，吴晶新，杜绍财，陶其敏. 套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA.
中华内科杂志，1996;35(8):537-541
2 Kaneko S, Miller RH, Feinstone SM, Pickens M. Detection of serum hepatitis B virus DNA in patients with chronic hepatitis using
the polymerase chain reaction assay. Proc Natl Acad Sci USA, 1989;86(1):312-317
3 骆抗先，周荣，梁炽森，陈伟华，王志明. 聚合酶链反应鉴定HBsAg阴性慢性活动性乙型肝炎病毒感染. 中华内科杂志，1991；30(1)：21-23
4 张永新，杜绍财，陈萍，丛云辉，田庚善. 肝炎恢复期乙型肝炎抗体阳性的乙肝病毒DNA. 中华内科杂志，1992；31(1)：629-631
5 高寿征主编. 病毒性肝炎防治研究. 第1版. 北京：北京出版社，1993：20-22, 百拇医药(陈耀凯1 吴修斌2 张振英3)