幽门螺杆菌Ⅰ型与Ⅱ型感染的血清学

http://www.100md.com 1998年6月15日 《世界华人消化杂志》 1998年第6期

     ¹北京军区总医院消化内科 北京市 100700

    ²中国医学科学院病毒研究所

    项目负责人 韩英北京军区总医院消化内科 北京市 100700

    收稿日期 1998-04-20

    

    Subject headings Helicobacter infections/diagnosis; Helicobacter pylori/isolation & purification; peptic ulcer/microbiology; stomach ulcer/microbiology; antibodies, bacterial/analysis

    主题词 螺杆菌感染/诊断；螺杆菌，幽门/分离和提纯；消化性溃疡/微生物学；胃炎/微生物学；抗体，细菌/分析

    1 对象和方法

    1.1 对象 1997-10/1998-02我院消化科门诊及住院的部分患者，共计111例. 其中消化性溃疡(PU)77例，胃炎29例，肿瘤5例. 所有患者的血清均同时进行幽门螺杆菌尿素酶(HpU)抗体及Ⅰ型和Ⅱ型Hp抗体的检测.

    1.2 方法 HpU抗体酶标法诊断试剂盒(协和医药集团)，按说明书进行检测. Ⅰ型和Ⅱ型Hp抗体检测系中国医学科学院病毒研究所与德国麦克莱金公司合作，利用基因克隆技术，将Cag-A(Ⅰ型)和HSP58(Ⅱ型)基因的优势表位克隆和表达，经纯化的抗原混合包被，建立ELISA法. 判定标准：①阳性对照OD值≥1.0；阴性对照OD值≤0.05. ②临界值(cutoff值)计算：临界值=阴性对照孔平均OD值+0.17. ③结果判定：OD值>临界值为Hp抗体阳性；OD值≤临界值为Hp抗体阴性.

    2 结果

    2.1 ELISA检测方法验证 将ELISA试剂指标与其他几项指标进行了比较，其结果表1.

    表1 ELISA(抗Hp-IgG)与其他几项指标阳性率的比较

检测项目	n	阳性例数	阳性率(%)
组织/细菌培养	92	54	59
细菌裂解物W.b*	92	50	54
Cag-A W.b*	92	46	50
ELISA#	92	61	66

    * W.b免疫蛋白印迹法 #酶联免疫吸附试验

    以上结果显示，ELISA法敏感性、特异性均优于其他几种方法.

    2.2 两种抗体检测结果的比较 两种抗体检测方法的 阳性率有较大差异；Ⅰ，Ⅱ型抗体检测法的敏感性明显高于HpU法，表2.

    表2 HpU抗体及Ⅰ，Ⅱ型Hp抗体检测的阳性率比较

疾患	n	HpU阳性 n(%)	Ⅰ,Ⅱ型阳性n(%)	两项阳性n(%)
PU	77	16(20.8)	44(57.1)	13(16.9)
胃炎	29	3(10.3)	9(31.0)	0 ( 0.0)
肿瘤	5	2(40.0)	2(40.0)	0 ( 0.0)
总计	111	21(18.9)	55(49.5)	13(11.7)

    上述结果表明，应用经纯化的基因工程表达的Hp的Cag-A(Ⅰ型)和HsP-58(Ⅱ型)抗原，采用间接ELISA方法检测待检血清中的抗体，灵敏性，特异性均优于尿素酶法.

    3 讨论

    Hp的基因型和表现型在一定程度上都存在着多态性，依据其分泌毒素的情况不同，可以将其分为产毒素和非产毒素两大类；依据其Cag-A和VacA基因及其相应蛋白表达的有无，将Hp菌分为两型：Ⅰ型，含有CagA基因，表达CagA蛋白和VacA蛋白；Ⅱ型，不含CagA基因，不表达CagA蛋白和VacA蛋白. Ⅰ型Hp有较强的毒性，与胃十二指肠溃疡及胃癌的发生密切相关；Ⅱ型Hp菌株的毒性较小，感染后一般只引起慢性浅表性胃炎^[1].

    目前国内外已有多种Hp抗体检测试剂盒上市，其中大多用培养的Hp菌体抽提物作为抗原，检测人血清中的Hp总抗体，其特异性和敏感性均不理想，主要用于检测人群中的Hp感染率.采用基因工程表达的CagA蛋白制备的产细胞毒素Hp抗体酶免疫检测试剂盒(CagA-Hp)仅能检测出Ⅰ型感染的患者，而对Ⅱ型感染的患者则可造成漏检.

    免疫吸附(ELISA)方法是临床常用的检测Hp感染的方法，具有高度的敏感性和特异性^[2]. ELISA技术的Hp抗原依据其纯度可分为纯化抗原，部分纯化抗原和粗制抗原. 本研究的检测方法是采用高新的基因克隆技术将Ⅰ型和Ⅱ型Hp基因的优势表位克隆和表达，并将Cag-A和HsP-58两种优势表位抗原混合，作为特异性诊断抗原，检测血清中的相应抗体，克服了其他菌体蛋白质所造成的假阳性，提高了检测的特异性和敏感性，即可检测产细胞毒素CagA的Ⅰ型菌珠，又可检出毒力较低的Ⅱ型菌株，具有一定的临床及科研价值，且操作简便，适于推广应用.

    4 参考文献

    1 Xiang ZY, Censini S, Bayeli PF, Telford JL, Figura N, Rappuole R et al. Analysis of expression of CagA and VacA virulence factors

    in 43 strains of Helicobacter pylori reveals that clinical isolates can be divided into two major types and that CagA is

    not necessary for expression of the vacuolating cytotoxin. Infect Immun, 1995;63(1):94-98

    2 Ching CK, Wong BCY, Kwok E, Ong L, Covacci A, Lam SK et al. Prevalence of CagA-bearing Helicobacter pylori

    strains detected by the anti-CagA assay in patients with peptic ulcer disease and in controls. Am J Gastroenterol,

    1996;91(5):949-953(韩 英1 武子涛1 李世荣1 皮国华2)

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/DirDu/1998/06/15/69/52/52.htm