肝硬变患者血清一氧化氮和细胞因子检测及其临床意义
南京军区南京总医院全军普通外科研究所 江苏省南京市 210002
项目负责人 汪义军南京军区南京总医院全军普通外科研究所 江苏省南京市 210002
收稿日期 1998-03-08
Subject headings liver cirrhosis/blood; nitric oxide/blood; interleukin-6/blookd; tumor necrosis factor/analysis
主题词 肝硬化/血液；一氧化氮/血液；白细胞介素6/血液；肿瘤坏死因子/分析
, http://www.100md.com
1 对象和方法
1.1 对象 正常对照组为本院健康工作人员，年龄19岁～59岁，男15例，女17例. 32例肝硬变患者为本院1994/1997住院，年龄26岁～62岁，男25例，女7例，因门脉高压症须行TIPSS手术治疗，手术前抽取静脉血测定NO，IL-6，IL-8和TNFα.
1.2 方法 ①NO测定：NO化学性质活泼，与分子氧反应生成NO2，并转化为NO-3和NO-2，血清NO-3和NO-2浓度之和(NO-3/NO-2)可代表体内NO水平[2]. 血清NO-3/NO-2测定采用本实验室建立的硝酸还原酶法. 具体步骤为：取3支试管，分为空白、标本和标准管. 空白管加0.1ml双蒸H2O，标本管加0.1ml血清，标准管加0.1ml 100μmol/L KNO3标准液. 各管加0.1ml0.5mol/L磷酸盐缓冲液，0.1ml 10μmol/L NADH，最后加0.1ml硝酸还原酶(酶浓度为3.0g/L，混匀，37℃反应1h，各管加1.0ml Griess试剂，置室温10min，540nm比色，计算. ②IL-6,IL-8和TNFα测定采用本实验室建立的生物素链亲和素ELISA法测定，TNFα抗血清由本室自制，TNFα标准品为Sigma产品，IL-6，IL-8单克隆抗体和标准品为第四军医大学免疫学教研室提供.统计学处理 数据用[AKx-D]±s表示，用t检验作显著性分析，相关分析用单因素直线相关表示.
, 百拇医药
2 结果
2.1 正常组和肝硬变患者血清NO浓度分别为82.9μmol/L±17.7μmol/L和131.2μmol/L±41.9μmol/L，肝硬变患者血清NO浓度显著高于正常人(P<0.01).
2.2 正常人、肝硬变患者血清IL-6，IL-8和TNFα结果 见表1.
表1 细胞因子测定结果(ng/L)
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bP<0.01, vs 正常组.
2.3 肝硬变患者血清NO分别与IL-6，IL-8和TNFα浓度比较，经直线相关回归分析，差异不显著，相关系数分别为-0.10，0.06，0.11，P>0.05.
3 讨论
NO是目前在体内发现的最小、最轻、最简单的生物信使分子，由一氧化氮合酶(NOS)催化L-Arg和分子氧反应生成. 生物体内存在两种产生NO的酶，一种为原生型cNOS，依赖Ca2+/钙调蛋白的调控，在胞内被激活并产生生物学效应；另一种为诱导型iNOS，在细胞因子(IL-1β，IL-6，TNFα)、内毒素作用下，巨噬细胞被激活，在其细胞核内合成表达的诱导酶，并在转录水平上调节. 本文观察到32例肝硬变患者血清NO浓度显著高于正常人(P<0.01)，可能原因是：①广泛的门体侧枝循环形成：肝硬变门脉高压患者存在广泛的侧枝循环并引起门体分流，来自静脉肠区、胃区的内毒素未经肝脏解毒进入体循环，刺激iNOS合成NO. ②内毒素含量增加：肝硬变患者血清内毒素水平升高，其升高机制一方面与侧枝循环引起门体分流有关，另一方面也与肝硬变时肝脏灭活内毒素作用下降有关. Guarner et al[3]通过对血清NO-3/NO-2含量测定发现，肝硬变患者血清NO-3/NO-2含量与血浆内毒素水平呈显著相关性(r=0.65，P<0.001). ③iNOS活性增高：Laffi[4]研究发现肝硬变患者iNOS活性显著高于正常对照组(P<0.001)，iNOS活性增高除内毒素刺激外，细胞因子如IL-1β，IL-6，TNFα等也起着重要作用. 本文对32例肝硬变患者血清IL-6，IL-8和TNFα含量测定表明，肝硬变患者血清IL-6，IL-8和TNFα含量显著高于正常人(P<0.01)，其升高原因是：①IL-6，IL-8和TNFα主要由单核巨噬细胞产生，肝硬变患者的内毒素血症能诱导单核巨噬细胞，肝细胞，肝枯否氏细胞，内皮细胞等合成IL-6，IL-8和TNFα. ②肝硬变患者肝脏清除IL-6，IL-8和TNFα能力下降. IL-6，IL-8和TNFα升高刺激iNOS合成以增加体内NO水平，但本文观察到肝硬变患者血清NO含量与IL-6，IL-8和TNFα浓度相关均不显著，表明肝硬变患者血清NO升高除与IL-6，TNFα作用有关外，还与其他因子如内毒素作用有关. 肝硬变患者NO升高对增加患者心输出量，降低内脏和全身血管阻力，降低内脏血管对内源性缩血管物质敏感性起重要作用.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Moncada S, Palmer RM, Higgs EA. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology. Pharmacol Rev, 1991;43(2):109-142
2 Moshage H, Kok B, Huizenga JR, Jansen PL. Nitrite and nitrate determinations in plasms: a critical evaluation.
Clin Chem, 1995;41(6):892-896
3 Guarner C, Soriano G, Tomas A, Bulbena O, Novella MT, Balanzo J et al. Increased serum nitrite and nitrate levels in patients
with cirrhosis: relationship to endotoxemia. Hepatology,1993;18(5):1139-1143
4 Laffi G, Foschi M, Simoni A, Muqnai L, Melani L, Gentilini P. Increased production of nitric oxide by neutrophils from cirrhotic
patients with ascites and hyperdynamic circulation. Hepatology, 1993;18(4):102A, 百拇医药(汪义军 李 宁 吴性江 黎介寿)
项目负责人 汪义军南京军区南京总医院全军普通外科研究所 江苏省南京市 210002
收稿日期 1998-03-08
Subject headings liver cirrhosis/blood; nitric oxide/blood; interleukin-6/blookd; tumor necrosis factor/analysis
主题词 肝硬化/血液；一氧化氮/血液；白细胞介素6/血液；肿瘤坏死因子/分析
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1 对象和方法
1.1 对象 正常对照组为本院健康工作人员，年龄19岁～59岁，男15例，女17例. 32例肝硬变患者为本院1994/1997住院，年龄26岁～62岁，男25例，女7例，因门脉高压症须行TIPSS手术治疗，手术前抽取静脉血测定NO，IL-6，IL-8和TNFα.
1.2 方法 ①NO测定：NO化学性质活泼，与分子氧反应生成NO2，并转化为NO-3和NO-2，血清NO-3和NO-2浓度之和(NO-3/NO-2)可代表体内NO水平[2]. 血清NO-3/NO-2测定采用本实验室建立的硝酸还原酶法. 具体步骤为：取3支试管，分为空白、标本和标准管. 空白管加0.1ml双蒸H2O，标本管加0.1ml血清，标准管加0.1ml 100μmol/L KNO3标准液. 各管加0.1ml0.5mol/L磷酸盐缓冲液，0.1ml 10μmol/L NADH，最后加0.1ml硝酸还原酶(酶浓度为3.0g/L，混匀，37℃反应1h，各管加1.0ml Griess试剂，置室温10min，540nm比色，计算. ②IL-6,IL-8和TNFα测定采用本实验室建立的生物素链亲和素ELISA法测定，TNFα抗血清由本室自制，TNFα标准品为Sigma产品，IL-6，IL-8单克隆抗体和标准品为第四军医大学免疫学教研室提供.统计学处理 数据用[AKx-D]±s表示，用t检验作显著性分析，相关分析用单因素直线相关表示.
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2 结果
2.1 正常组和肝硬变患者血清NO浓度分别为82.9μmol/L±17.7μmol/L和131.2μmol/L±41.9μmol/L，肝硬变患者血清NO浓度显著高于正常人(P<0.01).
2.2 正常人、肝硬变患者血清IL-6，IL-8和TNFα结果 见表1.
表1 细胞因子测定结果(ng/L)
| 组别 | n | IL-6 | IL-8 | TNFα |
| 正常组 | 32 | 40.6±12.8 | 54.7±21.2 | 110.3±32.4 |
| 肝硬变组 | 32 | 1346.7±360.1b | 1066.3±280.7b | 1144.2±396.3b |
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bP<0.01, vs 正常组.
2.3 肝硬变患者血清NO分别与IL-6，IL-8和TNFα浓度比较，经直线相关回归分析，差异不显著，相关系数分别为-0.10，0.06，0.11，P>0.05.
3 讨论
NO是目前在体内发现的最小、最轻、最简单的生物信使分子，由一氧化氮合酶(NOS)催化L-Arg和分子氧反应生成. 生物体内存在两种产生NO的酶，一种为原生型cNOS，依赖Ca2+/钙调蛋白的调控，在胞内被激活并产生生物学效应；另一种为诱导型iNOS，在细胞因子(IL-1β，IL-6，TNFα)、内毒素作用下，巨噬细胞被激活，在其细胞核内合成表达的诱导酶，并在转录水平上调节. 本文观察到32例肝硬变患者血清NO浓度显著高于正常人(P<0.01)，可能原因是：①广泛的门体侧枝循环形成：肝硬变门脉高压患者存在广泛的侧枝循环并引起门体分流，来自静脉肠区、胃区的内毒素未经肝脏解毒进入体循环，刺激iNOS合成NO. ②内毒素含量增加：肝硬变患者血清内毒素水平升高，其升高机制一方面与侧枝循环引起门体分流有关，另一方面也与肝硬变时肝脏灭活内毒素作用下降有关. Guarner et al[3]通过对血清NO-3/NO-2含量测定发现，肝硬变患者血清NO-3/NO-2含量与血浆内毒素水平呈显著相关性(r=0.65，P<0.001). ③iNOS活性增高：Laffi[4]研究发现肝硬变患者iNOS活性显著高于正常对照组(P<0.001)，iNOS活性增高除内毒素刺激外，细胞因子如IL-1β，IL-6，TNFα等也起着重要作用. 本文对32例肝硬变患者血清IL-6，IL-8和TNFα含量测定表明，肝硬变患者血清IL-6，IL-8和TNFα含量显著高于正常人(P<0.01)，其升高原因是：①IL-6，IL-8和TNFα主要由单核巨噬细胞产生，肝硬变患者的内毒素血症能诱导单核巨噬细胞，肝细胞，肝枯否氏细胞，内皮细胞等合成IL-6，IL-8和TNFα. ②肝硬变患者肝脏清除IL-6，IL-8和TNFα能力下降. IL-6，IL-8和TNFα升高刺激iNOS合成以增加体内NO水平，但本文观察到肝硬变患者血清NO含量与IL-6，IL-8和TNFα浓度相关均不显著，表明肝硬变患者血清NO升高除与IL-6，TNFα作用有关外，还与其他因子如内毒素作用有关. 肝硬变患者NO升高对增加患者心输出量，降低内脏和全身血管阻力，降低内脏血管对内源性缩血管物质敏感性起重要作用.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Moncada S, Palmer RM, Higgs EA. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology. Pharmacol Rev, 1991;43(2):109-142
2 Moshage H, Kok B, Huizenga JR, Jansen PL. Nitrite and nitrate determinations in plasms: a critical evaluation.
Clin Chem, 1995;41(6):892-896
3 Guarner C, Soriano G, Tomas A, Bulbena O, Novella MT, Balanzo J et al. Increased serum nitrite and nitrate levels in patients
with cirrhosis: relationship to endotoxemia. Hepatology,1993;18(5):1139-1143
4 Laffi G, Foschi M, Simoni A, Muqnai L, Melani L, Gentilini P. Increased production of nitric oxide by neutrophils from cirrhotic
patients with ascites and hyperdynamic circulation. Hepatology, 1993;18(4):102A, 百拇医药(汪义军 李 宁 吴性江 黎介寿)