二胺氧化酶在急性坏死性胰腺炎肠道损伤中的作用
1第一军医大学南方医院普外科 广东省广州市 510515
2中国人民解放军304医院普外科 北京市 100037
吴承堂，男，1967-08-10生，广西北海市人，汉族. 1990年广西桂林医学院医疗系毕业，1996年北京解放军军医进修学院，外科学硕士，普通外科讲师，主治医师，主要从事外科感染和腹部创伤的临床与实验研究，发表论文21篇.
项目负责人 吴承堂，510515，第一军医大学南方医院普外科，广东省广州市.
Correspondence to WU Cheng-Tang, Department of General Surgery, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China
, 百拇医药
Tel. +86·20·87705577 Ext. 87170
收稿日期 1998-04-08
Effect of DAO on intestinal damage in acute necrotizing pancreatitis in dogs
Cheng-Tang Wu1 and Zhan-Liang Li2
1Department of General Surgery, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China
, 百拇医药
2Department of General Surgery, Chinese PLA 304 Hospital, Beijing 100037, China
Abstract
AIM To investigate the relationship between plasma diamine oxidase (DAO) and gut injury in acute necrotizing pancreatitis (ANP).
METHODS ANP was induced by injection of sodium taurocholate with trypsin into the pancreatic duct in 8 dogs during abdominal operation. Serum levels of amylase was determined, DAO activities of plasma and ileal mucosa were measured dynamically.
, 百拇医药
RESULTS In ANP group, the levels of plasma DAO increased significantly in the first (mol/s，0.025±0.006 vs 0.011±0.002) and the second day (mol/s，0.019±0.005 vs 0.012±0.003), but after the fourth day (mol/s，0.006±0.001 vs 0.014±0.002) it decreased. The levels of DAO in ileum were also lowered. Serum levels of amylase was increased 3-10 times. ANP induced damage of epithlial villi of the mucosa and bacterial translocation was found in liver, pancreas, kidney, lung, spleen and mesenteric lymph nodes of all animals.
, http://www.100md.com
CONCLUSION Plasma DAO level might reflect the damage of intestinal mucosa in ANP, and bacterial translocation is the result of the
gut injury.
Subject headings pancreatitis/blood; pancreatitis/enzymology; intestinal mucosa/enzymology; intestins/pathology
Wu CT, Li ZL. Effect of DAO on intestinal damage in acute necrotizing pancreatitis in dogs. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi, 1999;7(1):64-65
, 百拇医药
摘要
目的 探讨急性坏死性胰腺炎(ANP)时血浆二胺氧化酶(DAO)水平变化及其与肠道损伤的关系.
方法 通过向主胰管内注入牛磺胆酸钠和胰蛋白酶复制犬ANP模型(n=8);检测血清淀粉酶水平;测定血浆、肠组织DAO活性;测量回肠粘膜绒毛形态学改变.
结果 ANP发病后d1(mols,0.025±0.006vs0.011±0.002),d2(mols,0.019±0.005vs0.012±0.003)血浆DAO活性增加,d4(mols,0.006±0.001vs0.014±0.002)以后明显下降,肠组织DAO活性亦显著下降;回肠粘膜绒毛萎缩、脱落,高度、宽度降低,面积减少;血清淀粉酶水平升高3～10倍;肝、胰、脾、肺、肾及肠系膜淋巴结出现细菌移位.
, 百拇医药
结论 ANP时血中DAO活性变化可反映肠粘膜上皮损伤,细菌移位则是肠屏障损伤的结果.
主题词 胰腺炎血液;组胺酶类血液;胰腺炎酶学;肠粘膜酶学;肠病理学
吴承堂, 黎沾良.二胺氧化酶在急性坏死性胰腺炎肠道损伤中的作用.世界华人消化杂志,1999;7(1):64-65
0 引言
研究表明，急性坏死性胰腺炎都合并有肠缺血、肠道损伤及肠粘膜通透性升高，致使肠道细菌和毒素穿过受损的肠粘膜屏障入血，导致肠源性感染，成为胰腺感染的根源[1]. 因此，肠道损伤的早期监测和治疗成了临床急待解决的问题，目前尚无准确和可靠的方法. 有报道认为，二胺氧化酶活性改变可反映肠道损伤的情况[2]. 我们探讨急性坏死性胰腺炎(ANP)时二胺氧化酶(DAO)水平变化及其与肠道损伤的关系.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 杂种犬15只，体重15kg±2kg，♀ ♂不限. 将犬随机分为对照组(n=7)和ANP组(n=8). 硫苯妥钠(30mg/kg)静脉麻醉后，无菌下经上腹正中切口入腹，暴露十二指肠并向后翻转，沿其系膜缘找到主胰管. 对照组仅用手触摸胰腺，ANP组以7.64kPa恒定压力经主胰管注入50g/L牛磺胆酸钠(0.5mL/kg)和胰蛋白酶(3000U/kg)，复制ANP模型.
1.2 方法 ①血浆及回肠组织DAO测定：术后1，2，4，7d抽取静脉血2mL，4℃ 3000r/min离心10min，吸取上清0.5mL；距回盲瓣15cm处取回肠0.2g～0.3g，以PBS 10倍稀释制成匀浆，4℃， 12000r/min，离心20min，取匀浆液0.5mL；血浆和回肠组织DAO均采用分光光度法测定[3]. ②回肠粘膜绒毛形态学测量采用CIAS图象分析系统(解放军301医院计算机室)测量回肠粘膜绒毛高度、宽度和面积. ③血及脏器细菌移位：术后每天抽血2mL作细菌培养. d7活杀，无菌剪取肝、胰、脾、肺、肾及肠系膜淋巴结，匀浆后作细菌培养，需氧菌37℃培养24h，厌氧菌37℃厌氧箱中培养48h后计数. ④病理学检查：切取胰腺及回肠组织，作光镜和电镜观察.
, 百拇医药
统计学处理 数据作t检验，结果以x±s表示.
2 结果
2.1 病理观察 实验组胰腺明显肿大，变硬，有暗黑或灰白坏死区. 镜检证实为坏死性胰腺炎. 回肠粘膜糜烂，散在出血点，光镜下可见明显的粘膜出血、水肿，上皮变性，绒毛部分脱落. 对照组胰腺及肠粘膜未见明显异常. 电镜观察对照组肠粘膜微绒毛整齐，ANP组肠粘膜微绒毛长短不一，排列不整齐，部分上皮脱落、减少.
2.2 血浆及回肠组织DAO ANP组血浆DAO的活性，d1, d2与对照组比较显著增加，而d4，d7则明显降低(P<0.01)，即先升高而后下降(见表1)；肠组织DAO活性则只相当于对照组的1/3(分别为0.042mol/s±0.001mol/s，0.122mol/s±0.021mol/s).
, 百拇医药
2.3 回肠粘膜绒毛形态学 与对照组比较，ANP组绒毛高度及宽度显著降低，面积减少(表2).
2.4 血清淀粉酶 ANP组犬术后各天血清淀粉酶水平高于对照组3～10倍(表3，P<0.01).
表1 犬ANP术后血浆DAO活性动态改变(mol/s, x±s)
, 百拇医药
bP<0.01，vs 对照组.
表2 犬ANP回肠粘膜绒毛高度、宽度和面积变化(x±s)
aP<0.05，bP<0.01，vs 对照组.
, 百拇医药
表3 犬ANP术后血清淀粉酶水平动态变化(x±s，μ/L)
bP<0.01，vs 对照组.
, 百拇医药
2.5 细菌移位 脏器细菌培养，胰腺炎犬肝、胰、脾、肺、肾及肠系膜淋巴结全部发生细菌移位，以肠系膜淋巴结检出率最高(8/8)，胰、肝其次(7/8)，然后是肺、肾(6/8)和脾(4/8)；血培养全部阳性，发病后1d，2d分别为6/8和5/8，对照组只有两只犬在肠系膜淋巴结培养出细菌，其他脏器和血培养均为阴性.
3 讨论
DAO是人类和所有哺乳动物肠粘膜上层绒毛细胞中具有高度活性的细胞内酶[4]，其活性与肠粘膜细胞核酸和蛋白质合成密切相关. DAO主要分布于肠道(占95%以上)，以空、回肠活性最高，且主要位于肠绒毛顶端细胞内. 肠粘膜和外周血中DAO活性能可靠地反映肠上皮细胞成熟度和完整性，其变化可反映肠粘膜屏障的功能状态[5]，且血中DAO活性相对稳定，因而可以通过无创伤方法测定其在外周血中的变化，由于血浆DAO活性与肠粘膜DAO活性显著相关，其变化可反映肠粘膜上皮的损伤和修复情况. 肠组织缺血、缺氧或营养障碍会引起肠粘膜DAO活性下降，继而导致血浆DAO活性下降. 但肠粘膜遭到严重损伤时，由于上皮破坏，致DAO大量释放入血，反可引起血中DAO活性一过性增高.
, http://www.100md.com
目前关于严重创伤、感染条件下引起的DAO活性改变尚未见报道，实验研究只局限于肠系膜动脉夹闭、结扎或离断后肠缺血引起的DAO活性变化[4]. ANP时血中DAO活性的变化，迄今未见报道. 本实验发现，ANP后，1d,2d血浆DAO活性增加，而4d以后则显著低于对照组水平；7d肠DAO的活性亦显著下降；镜检发现肠粘膜微绒毛部分上皮脱落、减少；回肠粘膜绒毛形态学测量可见绒毛高度、宽度显著降低，面积减少. 胰腺炎犬肝、胰、脾、肺、肾及肠系膜淋巴结全部发生细菌移位，血培养阳性率于发病后1d,2d最高. 提示ANP后早期肠粘膜上皮遭到破坏，DAO入血造成血中DAO活性短暂增高，随后的下降，则是DAO耗竭的结果，反映了肠屏障功能处于低下状态，随后发生的细菌移位则是肠屏障损伤的结果.
研究结果提示，肠道作为外科应急的中心器官，对缺氧的刺激特别敏感，ANP可导致肠组织缺血、缺氧，肠缺血引起肠粘膜DAO活性变化，且这种变化发生于肠上皮不可逆损伤之前，因此ANP时DAO成为早期诊断肠缺血、肠损伤的有用指标. ANP时，动态监测血中DAO活性的改变，对早期诊断肠道损伤及由此引发的感染并发症，提供重要的参考资料.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 吴承堂，黎沾良，祝小枫，熊德鑫，陆连荣，马诺山. 两种糖分子探针用于测定重症胰腺炎时肠通透性改变.
中华实验外科杂志，1997；14：195-196
2 赵军，黎沾良，盛志勇，施志国. 二胺氧化酶与肠道损伤. 国外医学创伤与外科基本问题分册，1993；14：11-13
3 黎君友，吕艺，薜丽波，郭振荣，盛志勇. 烫伤大鼠小肠组织和血浆二胺氧化酶的变化.中国应用生理学杂志，1993；9：355-356
4 Thompson JS, Lok GD. The effect of the route of nutrient delivery on gut structure and diamine oxidase levels. JPEN,1987;11:28-32
5 Lok GD. Plasma postheparin diamine oxidase. J Clin Invest, 1983;71:1308-1315, 百拇医药(吴承堂 黎沾良)
2中国人民解放军304医院普外科 北京市 100037
吴承堂，男，1967-08-10生，广西北海市人，汉族. 1990年广西桂林医学院医疗系毕业，1996年北京解放军军医进修学院，外科学硕士，普通外科讲师，主治医师，主要从事外科感染和腹部创伤的临床与实验研究，发表论文21篇.
项目负责人 吴承堂，510515，第一军医大学南方医院普外科，广东省广州市.
Correspondence to WU Cheng-Tang, Department of General Surgery, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China
, 百拇医药
Tel. +86·20·87705577 Ext. 87170
收稿日期 1998-04-08
Effect of DAO on intestinal damage in acute necrotizing pancreatitis in dogs
Cheng-Tang Wu1 and Zhan-Liang Li2
1Department of General Surgery, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China
, 百拇医药
2Department of General Surgery, Chinese PLA 304 Hospital, Beijing 100037, China
Abstract
AIM To investigate the relationship between plasma diamine oxidase (DAO) and gut injury in acute necrotizing pancreatitis (ANP).
METHODS ANP was induced by injection of sodium taurocholate with trypsin into the pancreatic duct in 8 dogs during abdominal operation. Serum levels of amylase was determined, DAO activities of plasma and ileal mucosa were measured dynamically.
, 百拇医药
RESULTS In ANP group, the levels of plasma DAO increased significantly in the first (mol/s，0.025±0.006 vs 0.011±0.002) and the second day (mol/s，0.019±0.005 vs 0.012±0.003), but after the fourth day (mol/s，0.006±0.001 vs 0.014±0.002) it decreased. The levels of DAO in ileum were also lowered. Serum levels of amylase was increased 3-10 times. ANP induced damage of epithlial villi of the mucosa and bacterial translocation was found in liver, pancreas, kidney, lung, spleen and mesenteric lymph nodes of all animals.
, http://www.100md.com
CONCLUSION Plasma DAO level might reflect the damage of intestinal mucosa in ANP, and bacterial translocation is the result of the
gut injury.
Subject headings pancreatitis/blood; pancreatitis/enzymology; intestinal mucosa/enzymology; intestins/pathology
Wu CT, Li ZL. Effect of DAO on intestinal damage in acute necrotizing pancreatitis in dogs. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi, 1999;7(1):64-65
, 百拇医药
摘要
目的 探讨急性坏死性胰腺炎(ANP)时血浆二胺氧化酶(DAO)水平变化及其与肠道损伤的关系.
方法 通过向主胰管内注入牛磺胆酸钠和胰蛋白酶复制犬ANP模型(n=8);检测血清淀粉酶水平;测定血浆、肠组织DAO活性;测量回肠粘膜绒毛形态学改变.
结果 ANP发病后d1(mols,0.025±0.006vs0.011±0.002),d2(mols,0.019±0.005vs0.012±0.003)血浆DAO活性增加,d4(mols,0.006±0.001vs0.014±0.002)以后明显下降,肠组织DAO活性亦显著下降;回肠粘膜绒毛萎缩、脱落,高度、宽度降低,面积减少;血清淀粉酶水平升高3～10倍;肝、胰、脾、肺、肾及肠系膜淋巴结出现细菌移位.
, 百拇医药
结论 ANP时血中DAO活性变化可反映肠粘膜上皮损伤,细菌移位则是肠屏障损伤的结果.
主题词 胰腺炎血液;组胺酶类血液;胰腺炎酶学;肠粘膜酶学;肠病理学
吴承堂, 黎沾良.二胺氧化酶在急性坏死性胰腺炎肠道损伤中的作用.世界华人消化杂志,1999;7(1):64-65
0 引言
研究表明，急性坏死性胰腺炎都合并有肠缺血、肠道损伤及肠粘膜通透性升高，致使肠道细菌和毒素穿过受损的肠粘膜屏障入血，导致肠源性感染，成为胰腺感染的根源[1]. 因此，肠道损伤的早期监测和治疗成了临床急待解决的问题，目前尚无准确和可靠的方法. 有报道认为，二胺氧化酶活性改变可反映肠道损伤的情况[2]. 我们探讨急性坏死性胰腺炎(ANP)时二胺氧化酶(DAO)水平变化及其与肠道损伤的关系.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 杂种犬15只，体重15kg±2kg，♀ ♂不限. 将犬随机分为对照组(n=7)和ANP组(n=8). 硫苯妥钠(30mg/kg)静脉麻醉后，无菌下经上腹正中切口入腹，暴露十二指肠并向后翻转，沿其系膜缘找到主胰管. 对照组仅用手触摸胰腺，ANP组以7.64kPa恒定压力经主胰管注入50g/L牛磺胆酸钠(0.5mL/kg)和胰蛋白酶(3000U/kg)，复制ANP模型.
1.2 方法 ①血浆及回肠组织DAO测定：术后1，2，4，7d抽取静脉血2mL，4℃ 3000r/min离心10min，吸取上清0.5mL；距回盲瓣15cm处取回肠0.2g～0.3g，以PBS 10倍稀释制成匀浆，4℃， 12000r/min，离心20min，取匀浆液0.5mL；血浆和回肠组织DAO均采用分光光度法测定[3]. ②回肠粘膜绒毛形态学测量采用CIAS图象分析系统(解放军301医院计算机室)测量回肠粘膜绒毛高度、宽度和面积. ③血及脏器细菌移位：术后每天抽血2mL作细菌培养. d7活杀，无菌剪取肝、胰、脾、肺、肾及肠系膜淋巴结，匀浆后作细菌培养，需氧菌37℃培养24h，厌氧菌37℃厌氧箱中培养48h后计数. ④病理学检查：切取胰腺及回肠组织，作光镜和电镜观察.
, 百拇医药
统计学处理 数据作t检验，结果以x±s表示.
2 结果
2.1 病理观察 实验组胰腺明显肿大，变硬，有暗黑或灰白坏死区. 镜检证实为坏死性胰腺炎. 回肠粘膜糜烂，散在出血点，光镜下可见明显的粘膜出血、水肿，上皮变性，绒毛部分脱落. 对照组胰腺及肠粘膜未见明显异常. 电镜观察对照组肠粘膜微绒毛整齐，ANP组肠粘膜微绒毛长短不一，排列不整齐，部分上皮脱落、减少.
2.2 血浆及回肠组织DAO ANP组血浆DAO的活性，d1, d2与对照组比较显著增加，而d4，d7则明显降低(P<0.01)，即先升高而后下降(见表1)；肠组织DAO活性则只相当于对照组的1/3(分别为0.042mol/s±0.001mol/s，0.122mol/s±0.021mol/s).
, 百拇医药
2.3 回肠粘膜绒毛形态学 与对照组比较，ANP组绒毛高度及宽度显著降低，面积减少(表2).
2.4 血清淀粉酶 ANP组犬术后各天血清淀粉酶水平高于对照组3～10倍(表3，P<0.01).
表1 犬ANP术后血浆DAO活性动态改变(mol/s, x±s)
| 组别 | 1d | 2d | 4d | 7d |
| 对照 | 0.011±0.002 | 0.012±0.003 | 0.014±0.002 | 0.013±0.002 |
| ANP | 0.025±0.006b | 0.019±0.005b | 0.006±0.001b | 0.003±0.001 |
, 百拇医药
bP<0.01，vs 对照组.
表2 犬ANP回肠粘膜绒毛高度、宽度和面积变化(x±s)
| 组别 | 高度(μm) | 宽度(μm) | 面积(μm2) |
| 对照 | 436±21 | 122±14 | 49874±1631 |
| ANP | 318±34ab | 96±23b | 30472±2164b |
aP<0.05，bP<0.01，vs 对照组.
, 百拇医药
表3 犬ANP术后血清淀粉酶水平动态变化(x±s，μ/L)
| 组别 | 术前 | 1d | 2d | 4d | 7d |
| 对照 | 0.013±0.001 | 0.014±0.001 | 0.013±0.001 | 0.013±0.001 | 0.013±0.001 |
| ANP | 0.014±0.001b | 0.123±0.023b | 0.118±0.019b | 0.077±0.022b | 0.046±0.015b |
bP<0.01，vs 对照组.
, 百拇医药
2.5 细菌移位 脏器细菌培养，胰腺炎犬肝、胰、脾、肺、肾及肠系膜淋巴结全部发生细菌移位，以肠系膜淋巴结检出率最高(8/8)，胰、肝其次(7/8)，然后是肺、肾(6/8)和脾(4/8)；血培养全部阳性，发病后1d，2d分别为6/8和5/8，对照组只有两只犬在肠系膜淋巴结培养出细菌，其他脏器和血培养均为阴性.
3 讨论
DAO是人类和所有哺乳动物肠粘膜上层绒毛细胞中具有高度活性的细胞内酶[4]，其活性与肠粘膜细胞核酸和蛋白质合成密切相关. DAO主要分布于肠道(占95%以上)，以空、回肠活性最高，且主要位于肠绒毛顶端细胞内. 肠粘膜和外周血中DAO活性能可靠地反映肠上皮细胞成熟度和完整性，其变化可反映肠粘膜屏障的功能状态[5]，且血中DAO活性相对稳定，因而可以通过无创伤方法测定其在外周血中的变化，由于血浆DAO活性与肠粘膜DAO活性显著相关，其变化可反映肠粘膜上皮的损伤和修复情况. 肠组织缺血、缺氧或营养障碍会引起肠粘膜DAO活性下降，继而导致血浆DAO活性下降. 但肠粘膜遭到严重损伤时，由于上皮破坏，致DAO大量释放入血，反可引起血中DAO活性一过性增高.
, http://www.100md.com
目前关于严重创伤、感染条件下引起的DAO活性改变尚未见报道，实验研究只局限于肠系膜动脉夹闭、结扎或离断后肠缺血引起的DAO活性变化[4]. ANP时血中DAO活性的变化，迄今未见报道. 本实验发现，ANP后，1d,2d血浆DAO活性增加，而4d以后则显著低于对照组水平；7d肠DAO的活性亦显著下降；镜检发现肠粘膜微绒毛部分上皮脱落、减少；回肠粘膜绒毛形态学测量可见绒毛高度、宽度显著降低，面积减少. 胰腺炎犬肝、胰、脾、肺、肾及肠系膜淋巴结全部发生细菌移位，血培养阳性率于发病后1d,2d最高. 提示ANP后早期肠粘膜上皮遭到破坏，DAO入血造成血中DAO活性短暂增高，随后的下降，则是DAO耗竭的结果，反映了肠屏障功能处于低下状态，随后发生的细菌移位则是肠屏障损伤的结果.
研究结果提示，肠道作为外科应急的中心器官，对缺氧的刺激特别敏感，ANP可导致肠组织缺血、缺氧，肠缺血引起肠粘膜DAO活性变化，且这种变化发生于肠上皮不可逆损伤之前，因此ANP时DAO成为早期诊断肠缺血、肠损伤的有用指标. ANP时，动态监测血中DAO活性的改变，对早期诊断肠道损伤及由此引发的感染并发症，提供重要的参考资料.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 吴承堂，黎沾良，祝小枫，熊德鑫，陆连荣，马诺山. 两种糖分子探针用于测定重症胰腺炎时肠通透性改变.
中华实验外科杂志，1997；14：195-196
2 赵军，黎沾良，盛志勇，施志国. 二胺氧化酶与肠道损伤. 国外医学创伤与外科基本问题分册，1993；14：11-13
3 黎君友，吕艺，薜丽波，郭振荣，盛志勇. 烫伤大鼠小肠组织和血浆二胺氧化酶的变化.中国应用生理学杂志，1993；9：355-356
4 Thompson JS, Lok GD. The effect of the route of nutrient delivery on gut structure and diamine oxidase levels. JPEN,1987;11:28-32
5 Lok GD. Plasma postheparin diamine oxidase. J Clin Invest, 1983;71:1308-1315, 百拇医药(吴承堂 黎沾良)