幽门螺杆菌fla-A基因的变异
1广东省顺德市大良医院 528300
2第一军医大学南方医院全军消化内科研究所 广东省广州市 510515
余毅，女，1965-10-19生，广东省中山市人. 1986年广州军区军医学校毕业，1992/1993第一军医大学南方医院进修内镜诊断
及幽门螺杆菌研究，从事内科学消化系病专业，主治医师.
项目负责人 徐智民，510515，广州市同和南方医院全军消化内科研究所.
Correspondence to Zhi-Min Xu, PLA Institute for Digestive Diseases, Nanfang Hospital, the First Military Medical University,Guangzhou 510515, Guangdong Province, China
, 百拇医药
E-mail xu_zm@ usa. net
收稿日期 1998-07-07
Variability of flaA gene of Helicobacter pylori
Yi Yu1, Zhi-Min Xu2, Xi-Qi Ou1, Shan Song2 and Miao-Ying Zhang1
1Department of Daliang Hospital, Shunde 510300, Guangdong Province, China
, 百拇医药
2PLA Institute for Digestive Diseases, Nanfang Hospital, the First Military Medical University, Guangzhou 510515,Guangdong Province, China
Abstract
AIM To study the variability and pathogenecity of Helicobacter pylori (Hp).
METHODS PCR was performed in fifty-two biopsy specimens of gastric mucosa and 18 strains of Hp for 16S rRNA gene and flagellin Agene (flaA). And then PCR RFLP and RFLP-SSCP were also analyzed.
, 百拇医药
RESULTS Seven flaA genotypes were found by PCR-RFLP in 43 strains of Hp (detecting rate of variance was 16.3%), but 37 were found by PCR-RFLP-SSCP in the same group of cases (detecting rate of variance was 86.0%).
CONCLUSION Very large variability in flaA gene of Hp was detected by PCR-RFLP-SSCP, which is a more effective method than PCR-RFLP to identify Hp strains in human stomach.
Subject headings Helicobacter pylori; flaA gene; stomach diseases
, 百拇医药
Yu Y, Xu ZM, Ou XQ, Song S, Zhang MY. Variability of fla-A gene of Helicobacter pylori.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,1999;7(4):323-325
摘要
目的 鞭毛是幽门螺杆菌(Hp)的重要侵袭因子,本研究拟检测Hp鞭毛素A基因的变异性,进而研究其与Hp致病性的关系.
方法 我们对52例胃粘膜活检标本和18株Hp临床分离株进行Hp特异的16SrRNA基因和鞭毛素A基因PCR扩增和PCR-RFLP及PCR-RFLP-SSCP分析.
, http://www.100md.com
结果 对43例Hp(+)的flaA基因PCR-RFLP(HindⅢ)大约可分7个型(变异检出率为16.3%),而PCR-RFLP-SSCP可分37个型(变异检出率为86.0%),两者有非常显著性差异.
结论 flaA基因变异性极大,PCR-RFLP-SSCP优于PCR-RFLP,是检测其变异的有效方法.
主题词 螺杆菌,幽门;鞭毛素A基因;胃疾病
余毅, 徐智民, 欧锡祺, 宋姗, 张妙英.幽门螺杆菌fla-A基因的变异.世界华人消化杂志,1999;7(4):323-325
0 引言
, 百拇医药
幽门螺杆菌(Hp)是人类胃病的重要病原菌. 作为致病因素之一的Hp鞭毛，在其致病过程中起重要的作用[1-7]. 同时Hp的鞭毛从结构到基因型，均存在很大的差异[2-7]. 因此，表现在不同的Hp菌株所致人类病变也可能存在差异. 为研究Hp鞭毛基因的变异情况，我们采用Hp特异鞭毛A基因(flaA)引物，研究Hp鞭毛基因的变异的多态性.
1 材料和方法
1.1 材料 ①标本来源：本研究检测72例标本，包括人胃粘膜活检标本52例和临床Hp分离株18例. ②引物设计：本研究采用Ho et al[8]设计的Hp特异16S rRNA基因正链引物Hp 1(5’-GCGCAATCAGCGTCAGGTAATG-3’)和反链Hp 2(5’-GCTAAGAGATCAGCCTATGTCC-3’)PCR扩增用于鉴定Hp(扩增长度509bp)(由上海生化所合成)；采用Leying[3]设计的Hp鞭毛蛋白A基因(flaA)引物Fla1(5’-ATGGCTTTTCAGGTCAATAC-3',1～20nt)和Fla2(5’-CTTAAGATATTTTG TTGAA CG-3'，1500～1521nt)(由加拿大合成)PCR(扩增长度1521bp)用于检测Hp株之间的差异性. ③PCR试剂及器材：10×PCR反应缓冲液(500mmol/L KCl， Tris-HCl (pH 9.0)和10g/L Triton X-100；MgCl2 25mmol/L，dNTP, Tag酶购自南方医院基因检测中心，DNA分子质量标准物购自北京天象人公司，HindⅢ由天象人公司购得. 所用DNA扩增仪(Perkin Elmer-480)、电泳仪(Bio-RAD/PAC300)、电泳槽(Bio-Rad，Protean Ⅱ XI Cell)、恒压恒流电流电泳仪(DF-C，北京东方仪器厂)、28B型垂直电泳槽(北京)、水平电泳槽(北京东方仪器厂)及恒温循环器(HX-10555，军科院)由第一军医大学南方医院提供.
, 百拇医药
1.2 方法 胃粘膜标本采用10g/L SDS+蛋白酶K消化，苯酚∶氯仿∶异戊醇脱蛋白、乙酸钠及乙醇沉淀模板DNA，临床分离株直接将Hp菌落刮入灭菌双蒸水中，冻融后直接作为模板. 实验方法和步骤：①内镜下胃窦粘膜活检，用于Hp分离培养或抽提DNA；②PCR检测：在25μL反应体积中含dNTP各2.0mmol/L，1×PCR缓冲液，Fla1和Fla2各500nmol/L，DNA模板2μL，Tag酶1U，上覆2滴轻矿物油. PCR过程：将没有加酶及dNTP的PCR混合液95℃预变性5min→80℃×3min(加酶和dNTP)→(94℃×1min→47℃×1min→72℃×2min)×10循环→(94℃×30s→47℃×30s→72℃×1min)×25循环→72℃ 10min结束. 用于16S rRNA基因扩增的复性温度为55℃. ③PCR产物的琼脂糖凝胶电泳：吸取PCR产物6μL～8μL，在10g/L～15g/L的琼脂糖凝胶上100V×15min电泳，紫外分析仪上观察结果；④PCR-RFLP：PCR产物10μL用内切酶HindⅢ 2U+Buffer B于37℃消化2h，取10μL行丙烯酰胺凝胶电泳(2000V)，PAGE凝胶行银染观察其酶切产物的多态性. ⑤PCR-RFLP-SSCP：取上述酶切产物10μL，电泳前+等量SSCP上样缓冲液于95℃变性10min，在低温(<4℃)下上样及丙烯酰胺凝胶电泳(2000V)，PAGE凝胶行银染观察Hp鞭毛基因HindⅢ酶切片段单链构象的多态性.
, 百拇医药
2 结果
我们对52例胃粘膜标本采用Hp特异16S rRNA基因引物的PCR检出Hp 27例(阳性率为51.9%)，而采用Hp特异的flaA基因引物的PCR检出Hp 25例，阳性率为48.1%，相对于Hp-16S rRNA基因的PCR的阳性率92.6%. 两者比较无显著性差异. 另对18例Hp临床分离株均可扩增出特异的flaA带，阳性率100%. 43株Hp的flaA基因PCR-RFLP(HindⅢ)大约可分7个型(变异检出率为16.3%)，而PCR-RFLP-SSCP可分37个型(变异检出率为86.0%)，两者有非常显著性差异(图1).
图1 Hp flaA的PCR-RFLP和PCR-RFLP-SSCP (70g/L PAGE， 1200V·h，银染)*R：PCR-RFLP， S：PCR-RFLP-SSCP
, http://www.100md.com
3 讨论
我们观察到Hp的鞭毛有双级的单根鞭毛和多根鞭毛，部分临床株光镜下观察动力不明显或电镜下也难以观察到鞭毛，而鞭毛是Hp重要的致病因子之一. 文献报道，Hp的鞭毛基因变异很大，其研究一般采用PCR-RFLP的方法[5]. 而我们采用PCR-RFLP-SSCP方法，首先选用鞭毛flaA基因引物对其进行PCR检测，在PCR基础上对其产物行酶切片段长度的多态性分析(RFLP)和单链构象多态性分析(SSCP).
本研究结果表明，Hp-flaA基因的PCR-RFLP可以检测出其基因型的差异，且差异的检出率与国外报道的结果接近[5]，但由于DNA的酶切反应受位点的限制，只要不是发生于位点的变异，而采用PCR-RFLP检出差异的很小. PCR-SSCP是将DNA的两条单链解开，在非变性PAGE凝胶中形成一定的空间结构，导致在电场中的泳动速度不一，形成一定的构象差异. 但其对DNA的片段大小有一定的要求，片段一般需小于400bp，且片段越小，检出点突变的机会越高，一般以200bp左右最为合适. 本研究选用的Hp flaA基因PCR产物达1521bp，采用PCR-SSCP便难以得到差异的结果. 为此，我们在PCR-RFLP的基础上，将PCR产物消化成一系列的片段，再进行SSCP电泳，使变异的检出率有明显的提高(16.3% vs 86.0%). 因此，PCR-RFLP-SSCP是鉴定菌株，了解变异的敏感方法.
, 百拇医药
鞭毛基因型的差异，可影响到Hp鞭毛动力的强弱、也可能与其粘附的强弱有关. Hp的感染首先需依靠其鞭毛动力，从致命的酸性胃液迅速穿入胃粘膜粘液层中定植，进而粘附于胃上皮细胞表面并在胃粘液层中扩展. Hp感染人胃后，为抵抗人类的自洁作用，也依靠其动力和粘附性，继续在胃内寄生，导致人类的胃病的发生和发展. 当然，影响Hp感染和导致人类胃病的因素尚有多种，如Hp的尿素酶、CagA,VacA等都与Hp的致病性有一定的关系. 除鞭毛基因外，鞭毛特异的ATP酶(flagellar-specific ATPase, FliⅠ)[10]也是影响Hp鞭毛动力的重要因素. 找出Hp基因差异与Hp株的致病性关系是非常困难的，需要大量的检测和对比研究. 我们在Hp flaA基因的变异检测方面做了一些工作，本研究证明，基于大片段的PCR-RFLP-SSCP是区分不同Hp株的理想方法，进而可检测不同Hp flaA基因型与其致病的关系.
, 百拇医药 4 参考文献
1 Newell DG. Virulence factors of Helicobacter pylori. Scand J Gastroenterol, 1991;187(Suppl):31-38
2 Penn CW, Luke CJ. Bacterial flagellar diversity and significance in pathogenesis. FEMS Microbiol Lett, 1992;79:331-336
3 Leying H, Suerbaum S, Geis G, Haas R. Cloning and genetic characterization of a Helicobacter pylori flagellin gene.
, 百拇医药
Mol Microbiol, 1992;6;2863-2874
4 Hurtado A, Owen RJ, Desai M. Flagellin gene profiling of Helicobacter pylori infecting symptomatic and asymptomatic individuals.
Res Microbiol,1994;145:585-594
5 Akopyanz N, Bukanov NO, Westblom TU, Berg DE. PCR-based RFLP analysis of DNA sequence diversity in the gastric
pathogen Helicobacter pylori.Nucleic Acids Res, 1992;20:6221-6225
, 百拇医药
6 Mobley HL. Defining Helicobacter pylori as a pathogen: strain heterogeneity and virulence. Am J Med, 1996;100:2S-9S
7 Forbes KJ, Fang Z, Pennington TH. Allelic variation in the Helicobacter pylori flagellin genes flaA and flaB:
its consequences for strain typing schemes and population structure. Epidemiol Infect, 1995;114:257-266
8 Ho SA, Hoyle JA, Lewis FA, Secker AD, Cross D, Mapstone NP. Direct polymerase chain reaction test for detection of
, 百拇医药
Helicobacter pylori in humans and animals.J Clin Microbiol, 1991;29:2543-2549
9 Eaton KA, Suerbaum S, Josenhans C, Krakowka S. Colonization of gnotobiotic piglets by Helicobacter pylori deficient in
two flagellin genes. Infect Immun, 1996;64:2445-2448
10 Jenks PJ, Foynes S, Ward SJ, Constantinidou C, Penn CW, Wren BW. A flagellar-specific ATPase (Fli-Ⅰ) is necessary for flagellar
export in Helicobacter pylori. FEMS Microbiol Lett, 1997;152:205-211, http://www.100md.com(余毅1 徐智民2 欧锡祺1 宋姗2 张妙英1)
2第一军医大学南方医院全军消化内科研究所 广东省广州市 510515
余毅，女，1965-10-19生，广东省中山市人. 1986年广州军区军医学校毕业，1992/1993第一军医大学南方医院进修内镜诊断
及幽门螺杆菌研究，从事内科学消化系病专业，主治医师.
项目负责人 徐智民，510515，广州市同和南方医院全军消化内科研究所.
Correspondence to Zhi-Min Xu, PLA Institute for Digestive Diseases, Nanfang Hospital, the First Military Medical University,Guangzhou 510515, Guangdong Province, China
, 百拇医药
E-mail xu_zm@ usa. net
收稿日期 1998-07-07
Variability of flaA gene of Helicobacter pylori
Yi Yu1, Zhi-Min Xu2, Xi-Qi Ou1, Shan Song2 and Miao-Ying Zhang1
1Department of Daliang Hospital, Shunde 510300, Guangdong Province, China
, 百拇医药
2PLA Institute for Digestive Diseases, Nanfang Hospital, the First Military Medical University, Guangzhou 510515,Guangdong Province, China
Abstract
AIM To study the variability and pathogenecity of Helicobacter pylori (Hp).
METHODS PCR was performed in fifty-two biopsy specimens of gastric mucosa and 18 strains of Hp for 16S rRNA gene and flagellin Agene (flaA). And then PCR RFLP and RFLP-SSCP were also analyzed.
, 百拇医药
RESULTS Seven flaA genotypes were found by PCR-RFLP in 43 strains of Hp (detecting rate of variance was 16.3%), but 37 were found by PCR-RFLP-SSCP in the same group of cases (detecting rate of variance was 86.0%).
CONCLUSION Very large variability in flaA gene of Hp was detected by PCR-RFLP-SSCP, which is a more effective method than PCR-RFLP to identify Hp strains in human stomach.
Subject headings Helicobacter pylori; flaA gene; stomach diseases
, 百拇医药
Yu Y, Xu ZM, Ou XQ, Song S, Zhang MY. Variability of fla-A gene of Helicobacter pylori.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,1999;7(4):323-325
摘要
目的 鞭毛是幽门螺杆菌(Hp)的重要侵袭因子,本研究拟检测Hp鞭毛素A基因的变异性,进而研究其与Hp致病性的关系.
方法 我们对52例胃粘膜活检标本和18株Hp临床分离株进行Hp特异的16SrRNA基因和鞭毛素A基因PCR扩增和PCR-RFLP及PCR-RFLP-SSCP分析.
, http://www.100md.com
结果 对43例Hp(+)的flaA基因PCR-RFLP(HindⅢ)大约可分7个型(变异检出率为16.3%),而PCR-RFLP-SSCP可分37个型(变异检出率为86.0%),两者有非常显著性差异.
结论 flaA基因变异性极大,PCR-RFLP-SSCP优于PCR-RFLP,是检测其变异的有效方法.
主题词 螺杆菌,幽门;鞭毛素A基因;胃疾病
余毅, 徐智民, 欧锡祺, 宋姗, 张妙英.幽门螺杆菌fla-A基因的变异.世界华人消化杂志,1999;7(4):323-325
0 引言
, 百拇医药
幽门螺杆菌(Hp)是人类胃病的重要病原菌. 作为致病因素之一的Hp鞭毛，在其致病过程中起重要的作用[1-7]. 同时Hp的鞭毛从结构到基因型，均存在很大的差异[2-7]. 因此，表现在不同的Hp菌株所致人类病变也可能存在差异. 为研究Hp鞭毛基因的变异情况，我们采用Hp特异鞭毛A基因(flaA)引物，研究Hp鞭毛基因的变异的多态性.
1 材料和方法
1.1 材料 ①标本来源：本研究检测72例标本，包括人胃粘膜活检标本52例和临床Hp分离株18例. ②引物设计：本研究采用Ho et al[8]设计的Hp特异16S rRNA基因正链引物Hp 1(5’-GCGCAATCAGCGTCAGGTAATG-3’)和反链Hp 2(5’-GCTAAGAGATCAGCCTATGTCC-3’)PCR扩增用于鉴定Hp(扩增长度509bp)(由上海生化所合成)；采用Leying[3]设计的Hp鞭毛蛋白A基因(flaA)引物Fla1(5’-ATGGCTTTTCAGGTCAATAC-3',1～20nt)和Fla2(5’-CTTAAGATATTTTG TTGAA CG-3'，1500～1521nt)(由加拿大合成)PCR(扩增长度1521bp)用于检测Hp株之间的差异性. ③PCR试剂及器材：10×PCR反应缓冲液(500mmol/L KCl， Tris-HCl (pH 9.0)和10g/L Triton X-100；MgCl2 25mmol/L，dNTP, Tag酶购自南方医院基因检测中心，DNA分子质量标准物购自北京天象人公司，HindⅢ由天象人公司购得. 所用DNA扩增仪(Perkin Elmer-480)、电泳仪(Bio-RAD/PAC300)、电泳槽(Bio-Rad，Protean Ⅱ XI Cell)、恒压恒流电流电泳仪(DF-C，北京东方仪器厂)、28B型垂直电泳槽(北京)、水平电泳槽(北京东方仪器厂)及恒温循环器(HX-10555，军科院)由第一军医大学南方医院提供.
, 百拇医药
1.2 方法 胃粘膜标本采用10g/L SDS+蛋白酶K消化，苯酚∶氯仿∶异戊醇脱蛋白、乙酸钠及乙醇沉淀模板DNA，临床分离株直接将Hp菌落刮入灭菌双蒸水中，冻融后直接作为模板. 实验方法和步骤：①内镜下胃窦粘膜活检，用于Hp分离培养或抽提DNA；②PCR检测：在25μL反应体积中含dNTP各2.0mmol/L，1×PCR缓冲液，Fla1和Fla2各500nmol/L，DNA模板2μL，Tag酶1U，上覆2滴轻矿物油. PCR过程：将没有加酶及dNTP的PCR混合液95℃预变性5min→80℃×3min(加酶和dNTP)→(94℃×1min→47℃×1min→72℃×2min)×10循环→(94℃×30s→47℃×30s→72℃×1min)×25循环→72℃ 10min结束. 用于16S rRNA基因扩增的复性温度为55℃. ③PCR产物的琼脂糖凝胶电泳：吸取PCR产物6μL～8μL，在10g/L～15g/L的琼脂糖凝胶上100V×15min电泳，紫外分析仪上观察结果；④PCR-RFLP：PCR产物10μL用内切酶HindⅢ 2U+Buffer B于37℃消化2h，取10μL行丙烯酰胺凝胶电泳(2000V)，PAGE凝胶行银染观察其酶切产物的多态性. ⑤PCR-RFLP-SSCP：取上述酶切产物10μL，电泳前+等量SSCP上样缓冲液于95℃变性10min，在低温(<4℃)下上样及丙烯酰胺凝胶电泳(2000V)，PAGE凝胶行银染观察Hp鞭毛基因HindⅢ酶切片段单链构象的多态性.
, 百拇医药
2 结果
我们对52例胃粘膜标本采用Hp特异16S rRNA基因引物的PCR检出Hp 27例(阳性率为51.9%)，而采用Hp特异的flaA基因引物的PCR检出Hp 25例，阳性率为48.1%，相对于Hp-16S rRNA基因的PCR的阳性率92.6%. 两者比较无显著性差异. 另对18例Hp临床分离株均可扩增出特异的flaA带，阳性率100%. 43株Hp的flaA基因PCR-RFLP(HindⅢ)大约可分7个型(变异检出率为16.3%)，而PCR-RFLP-SSCP可分37个型(变异检出率为86.0%)，两者有非常显著性差异(图1).
图1 Hp flaA的PCR-RFLP和PCR-RFLP-SSCP (70g/L PAGE， 1200V·h，银染)*R：PCR-RFLP， S：PCR-RFLP-SSCP
, http://www.100md.com
3 讨论
我们观察到Hp的鞭毛有双级的单根鞭毛和多根鞭毛，部分临床株光镜下观察动力不明显或电镜下也难以观察到鞭毛，而鞭毛是Hp重要的致病因子之一. 文献报道，Hp的鞭毛基因变异很大，其研究一般采用PCR-RFLP的方法[5]. 而我们采用PCR-RFLP-SSCP方法，首先选用鞭毛flaA基因引物对其进行PCR检测，在PCR基础上对其产物行酶切片段长度的多态性分析(RFLP)和单链构象多态性分析(SSCP).
本研究结果表明，Hp-flaA基因的PCR-RFLP可以检测出其基因型的差异，且差异的检出率与国外报道的结果接近[5]，但由于DNA的酶切反应受位点的限制，只要不是发生于位点的变异，而采用PCR-RFLP检出差异的很小. PCR-SSCP是将DNA的两条单链解开，在非变性PAGE凝胶中形成一定的空间结构，导致在电场中的泳动速度不一，形成一定的构象差异. 但其对DNA的片段大小有一定的要求，片段一般需小于400bp，且片段越小，检出点突变的机会越高，一般以200bp左右最为合适. 本研究选用的Hp flaA基因PCR产物达1521bp，采用PCR-SSCP便难以得到差异的结果. 为此，我们在PCR-RFLP的基础上，将PCR产物消化成一系列的片段，再进行SSCP电泳，使变异的检出率有明显的提高(16.3% vs 86.0%). 因此，PCR-RFLP-SSCP是鉴定菌株，了解变异的敏感方法.
, 百拇医药
鞭毛基因型的差异，可影响到Hp鞭毛动力的强弱、也可能与其粘附的强弱有关. Hp的感染首先需依靠其鞭毛动力，从致命的酸性胃液迅速穿入胃粘膜粘液层中定植，进而粘附于胃上皮细胞表面并在胃粘液层中扩展. Hp感染人胃后，为抵抗人类的自洁作用，也依靠其动力和粘附性，继续在胃内寄生，导致人类的胃病的发生和发展. 当然，影响Hp感染和导致人类胃病的因素尚有多种，如Hp的尿素酶、CagA,VacA等都与Hp的致病性有一定的关系. 除鞭毛基因外，鞭毛特异的ATP酶(flagellar-specific ATPase, FliⅠ)[10]也是影响Hp鞭毛动力的重要因素. 找出Hp基因差异与Hp株的致病性关系是非常困难的，需要大量的检测和对比研究. 我们在Hp flaA基因的变异检测方面做了一些工作，本研究证明，基于大片段的PCR-RFLP-SSCP是区分不同Hp株的理想方法，进而可检测不同Hp flaA基因型与其致病的关系.
, 百拇医药 4 参考文献
1 Newell DG. Virulence factors of Helicobacter pylori. Scand J Gastroenterol, 1991;187(Suppl):31-38
2 Penn CW, Luke CJ. Bacterial flagellar diversity and significance in pathogenesis. FEMS Microbiol Lett, 1992;79:331-336
3 Leying H, Suerbaum S, Geis G, Haas R. Cloning and genetic characterization of a Helicobacter pylori flagellin gene.
, 百拇医药
Mol Microbiol, 1992;6;2863-2874
4 Hurtado A, Owen RJ, Desai M. Flagellin gene profiling of Helicobacter pylori infecting symptomatic and asymptomatic individuals.
Res Microbiol,1994;145:585-594
5 Akopyanz N, Bukanov NO, Westblom TU, Berg DE. PCR-based RFLP analysis of DNA sequence diversity in the gastric
pathogen Helicobacter pylori.Nucleic Acids Res, 1992;20:6221-6225
, 百拇医药
6 Mobley HL. Defining Helicobacter pylori as a pathogen: strain heterogeneity and virulence. Am J Med, 1996;100:2S-9S
7 Forbes KJ, Fang Z, Pennington TH. Allelic variation in the Helicobacter pylori flagellin genes flaA and flaB:
its consequences for strain typing schemes and population structure. Epidemiol Infect, 1995;114:257-266
8 Ho SA, Hoyle JA, Lewis FA, Secker AD, Cross D, Mapstone NP. Direct polymerase chain reaction test for detection of
, 百拇医药
Helicobacter pylori in humans and animals.J Clin Microbiol, 1991;29:2543-2549
9 Eaton KA, Suerbaum S, Josenhans C, Krakowka S. Colonization of gnotobiotic piglets by Helicobacter pylori deficient in
two flagellin genes. Infect Immun, 1996;64:2445-2448
10 Jenks PJ, Foynes S, Ward SJ, Constantinidou C, Penn CW, Wren BW. A flagellar-specific ATPase (Fli-Ⅰ) is necessary for flagellar
export in Helicobacter pylori. FEMS Microbiol Lett, 1997;152:205-211, http://www.100md.com(余毅1 徐智民2 欧锡祺1 宋姗2 张妙英1)