肝癌患者血清及癌组织中β-葡糖醛酸酶活性改变及临床意义
1沈阳军区总医院肝胆外科 辽宁省沈阳市 110015
2中国医科大学病理教研室 辽宁省沈阳市 110001
项目负责人 杨波沈阳军区总医院肝胆外科 辽宁省沈阳市 110015
收稿日期 1998-11-09 接收日期1999-01-04
Subject headings liver neoplasms; glucuronidase/analysis; carcinoma, hepatocellular
主题词 肝肿瘤；葡糖醛酸酶/分析；癌，肝细胞
, 百拇医药
采用ELISA及免疫组化方法检测HCC患者血清及癌组织中β-G活性变化，旨在对β-G与HCC的关系进行探讨.
1 材料和方法
1.1 材料 共选取HCC患者63例，其中42例行手术切除治疗，取术前及术后lwk空腹静脉血；42例手术切除肝癌组织标本，均经病理确诊，其中高分化者16例，中低分化者26例. 另取106例健康献血员，13例肝外伤手术切除肝组织石蜡切块标本为对照组.
1.2 方法
1.2.1 血清学检测 血标本均为空腹静脉血，用量3mL，离心后取血清在-40℃保存. 为减少误差，取相近时期健康献血员血清，用ELISA法测定. 样品吸光度值/阴性对照吸光度值≥2为阳性. 阳性样本以倍比方式稀释至阴性时的滴度为测得值，单位为滴度，方法参照[1].
, 百拇医药
1.2.2 组织学检测 分别对42例肝癌组织及13例对照组标本取材，经常规制作石蜡连续切片，厚度4μm. 抗β-G单克隆抗体工作浓度为1∶200，采用ABC法，每例均用PBS代替Ⅰ抗作空白对照，光镜观察. 着色标准：细胞浆内出现棕黄色颗粒为β-G阳性反应细胞，每例标本记数200个细胞，以每100个计数的细胞中呈阳性反应细胞数表示. 根据β-G阳性反应细胞数量分为三组，阳性细胞百分率≤25%为(-)，25%～50%为(+)，50%～75%为(++)，>75%为(+++).
2 结果
肝癌患者血清β-G活性滴度(15.86±1.58)与正常对照组β-G活性滴度(6.71±1.11)比较有非常显著差异(P<0.01). 其中术后(8.74±1.16)比术前(16.05±1.60)显著降低，有非常显著差异(P<0.01). 组织学比较，肝癌组织细胞β-G阳性率(71.4%±3.4%)较对照组阳性率(28.3%±4.2%)有非常显著性差异，P<0.01. 肝癌分化程度与β-G表达阳性率的关系示，肝癌分化愈差，β-G表达阳性率愈高，呈正相关关系(r=0.637，P<0.01)见表1.
, http://www.100md.com
表1 肝癌分化程度与β-G表达阳性率的关系
3 讨论
β-G是细胞溶酶体中酸性水解酶，参与体内细胞的物质代谢，其前身在附有多聚核糖体的膜上合成的，而后进入内质网，再移位于高尔基复合体，由6-磷酸受体转移到溶酶体，在此聚集、加工、成熟为各种酶，完成一定生理功能[2]. 作用部位在于葡糖醛酸甙的β-糖苷键. 且该酶具有参与细胞增生的生理功能[3]. 研究表明，β-G可以水解癌周结缔组织中的蛋白多糖及糖蛋白，破坏其网状结构的防御作用，有利于癌细胞的浸润及扩散[4]，当机体组织细胞发生恶变时，该酶含量增加[5，6]. β-G在肝组织中含量最多[7]，为探讨HCC与β-G关系，采用ELISA及免疫组化法联合检测HCC患者血清及癌组织中β-G的整体性变化.
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本研究表明功能学上，肝癌患者血清β-G活性与正常人有质的差异，术前术后也有质的差异. 肝癌患者与正常人组织细胞间的β-G表达在形态学上亦有质的差异；β-G的过量表达与肝脏正常 细胞由转化致恶变的演变过程及程度直接相关.
我们认为：β-G在肝癌患者血清及癌组织中的异常增高，是由癌细胞自身的生物学特性决定，缘于肿瘤细胞为适应其快速、过度增殖和异常分化的自主性生长的生存方式而产生的自我调控，由其自身独特的生长方式决定并成为内因的.
β-G作为一种体内酶标志，是与肝癌的发生、发展相关的体内活性酶，对其功能学与形态学的联合检测，有益于肝癌的诊断.
4 参考文献
1 杨波，蒲菲菲，康健，范剑非，杜晓炬，李顺明，朱善德，邢婕. ELISA测定血清β-葡萄糖醛酸酶及临床应用.
, http://www.100md.com
临床检验杂志， 1998;16:300
2 杨波，朱善德，杜晓炬，李顺明，杨捷润，李荫山. 人肝细胞超微结构β-葡萄糖醛酸酶分布的定位定量研究及意义.
中华实验外科杂志， 1996;13:342
3 Finch PJ, Ryan FP, Rogers K. Gastric enzymes as a screening test for gastric cancer. Gut, 1987;28:319
4 苗德林，黄幼蓉，程本宽. 胃癌细胞的β-葡萄糖醛酸酶及β-N-乙酰葡萄糖胺酶与浸润的关系. 中华病理学杂志， 1987；16：269
5 杨波，岳辉，范剑非，张宏，朱善德，杜晓炬，于安民. β-葡萄糖醛酸酶与肝细胞癌关系的免疫电镜研究. 中华肝脏病杂志，1998；6:105
6 游学俊，谭慎微. 头颈部恶性肿瘤患者β-葡萄糖醛酸酶活性的检测. 中华耳鼻喉科杂志， 1996;31:181
7 Ho KJ. Pathogenesis of the formation of pigment gallstons. The role of human biliary β-Glucuronidase.
Medicine Today. 1992;155:694, 百拇医药(杨 波1 朱善德1 于 众2 张 弘2 杜晓炬1 康 健1 蒲菲菲1)
2中国医科大学病理教研室 辽宁省沈阳市 110001
项目负责人 杨波沈阳军区总医院肝胆外科 辽宁省沈阳市 110015
收稿日期 1998-11-09 接收日期1999-01-04
Subject headings liver neoplasms; glucuronidase/analysis; carcinoma, hepatocellular
主题词 肝肿瘤；葡糖醛酸酶/分析；癌，肝细胞
, 百拇医药
采用ELISA及免疫组化方法检测HCC患者血清及癌组织中β-G活性变化，旨在对β-G与HCC的关系进行探讨.
1 材料和方法
1.1 材料 共选取HCC患者63例，其中42例行手术切除治疗，取术前及术后lwk空腹静脉血；42例手术切除肝癌组织标本，均经病理确诊，其中高分化者16例，中低分化者26例. 另取106例健康献血员，13例肝外伤手术切除肝组织石蜡切块标本为对照组.
1.2 方法
1.2.1 血清学检测 血标本均为空腹静脉血，用量3mL，离心后取血清在-40℃保存. 为减少误差，取相近时期健康献血员血清，用ELISA法测定. 样品吸光度值/阴性对照吸光度值≥2为阳性. 阳性样本以倍比方式稀释至阴性时的滴度为测得值，单位为滴度，方法参照[1].
, 百拇医药
1.2.2 组织学检测 分别对42例肝癌组织及13例对照组标本取材，经常规制作石蜡连续切片，厚度4μm. 抗β-G单克隆抗体工作浓度为1∶200，采用ABC法，每例均用PBS代替Ⅰ抗作空白对照，光镜观察. 着色标准：细胞浆内出现棕黄色颗粒为β-G阳性反应细胞，每例标本记数200个细胞，以每100个计数的细胞中呈阳性反应细胞数表示. 根据β-G阳性反应细胞数量分为三组，阳性细胞百分率≤25%为(-)，25%～50%为(+)，50%～75%为(++)，>75%为(+++).
2 结果
肝癌患者血清β-G活性滴度(15.86±1.58)与正常对照组β-G活性滴度(6.71±1.11)比较有非常显著差异(P<0.01). 其中术后(8.74±1.16)比术前(16.05±1.60)显著降低，有非常显著差异(P<0.01). 组织学比较，肝癌组织细胞β-G阳性率(71.4%±3.4%)较对照组阳性率(28.3%±4.2%)有非常显著性差异，P<0.01. 肝癌分化程度与β-G表达阳性率的关系示，肝癌分化愈差，β-G表达阳性率愈高，呈正相关关系(r=0.637，P<0.01)见表1.
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表1 肝癌分化程度与β-G表达阳性率的关系
| 分化程度 | n | - | + | ++ | +++ | n(%) |
| 高分化 | 16 | 2 | 4 | 6 | 4 | 14(87.5) |
| 中低分化 | 26 | 3 | 5 | 9 | 9 | 23(88.5) |
3 讨论
β-G是细胞溶酶体中酸性水解酶，参与体内细胞的物质代谢，其前身在附有多聚核糖体的膜上合成的，而后进入内质网，再移位于高尔基复合体，由6-磷酸受体转移到溶酶体，在此聚集、加工、成熟为各种酶，完成一定生理功能[2]. 作用部位在于葡糖醛酸甙的β-糖苷键. 且该酶具有参与细胞增生的生理功能[3]. 研究表明，β-G可以水解癌周结缔组织中的蛋白多糖及糖蛋白，破坏其网状结构的防御作用，有利于癌细胞的浸润及扩散[4]，当机体组织细胞发生恶变时，该酶含量增加[5，6]. β-G在肝组织中含量最多[7]，为探讨HCC与β-G关系，采用ELISA及免疫组化法联合检测HCC患者血清及癌组织中β-G的整体性变化.
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本研究表明功能学上，肝癌患者血清β-G活性与正常人有质的差异，术前术后也有质的差异. 肝癌患者与正常人组织细胞间的β-G表达在形态学上亦有质的差异；β-G的过量表达与肝脏正常 细胞由转化致恶变的演变过程及程度直接相关.
我们认为：β-G在肝癌患者血清及癌组织中的异常增高，是由癌细胞自身的生物学特性决定，缘于肿瘤细胞为适应其快速、过度增殖和异常分化的自主性生长的生存方式而产生的自我调控，由其自身独特的生长方式决定并成为内因的.
β-G作为一种体内酶标志，是与肝癌的发生、发展相关的体内活性酶，对其功能学与形态学的联合检测，有益于肝癌的诊断.
4 参考文献
1 杨波，蒲菲菲，康健，范剑非，杜晓炬，李顺明，朱善德，邢婕. ELISA测定血清β-葡萄糖醛酸酶及临床应用.
, http://www.100md.com
临床检验杂志， 1998;16:300
2 杨波，朱善德，杜晓炬，李顺明，杨捷润，李荫山. 人肝细胞超微结构β-葡萄糖醛酸酶分布的定位定量研究及意义.
中华实验外科杂志， 1996;13:342
3 Finch PJ, Ryan FP, Rogers K. Gastric enzymes as a screening test for gastric cancer. Gut, 1987;28:319
4 苗德林，黄幼蓉，程本宽. 胃癌细胞的β-葡萄糖醛酸酶及β-N-乙酰葡萄糖胺酶与浸润的关系. 中华病理学杂志， 1987；16：269
5 杨波，岳辉，范剑非，张宏，朱善德，杜晓炬，于安民. β-葡萄糖醛酸酶与肝细胞癌关系的免疫电镜研究. 中华肝脏病杂志，1998；6:105
6 游学俊，谭慎微. 头颈部恶性肿瘤患者β-葡萄糖醛酸酶活性的检测. 中华耳鼻喉科杂志， 1996;31:181
7 Ho KJ. Pathogenesis of the formation of pigment gallstons. The role of human biliary β-Glucuronidase.
Medicine Today. 1992;155:694, 百拇医药(杨 波1 朱善德1 于 众2 张 弘2 杜晓炬1 康 健1 蒲菲菲1)