屈酮治疗大鼠急性出血坏死性胰腺炎内毒素血症的效果
内蒙古医学院第一附属医院普外科 内蒙古呼和浩特市 010050
赵海平，男，1963-11-30生，内蒙古海拉尔市人，汉族. 1987年内蒙古医学院医学系毕业，1997年内蒙古医学院普外专业硕士毕业，主治医师，主要从事肝、胆、胰外科疾病诊治研究，在国内发表论文数十篇，《外科理论与实践》编委，《小儿外科手册》编委，获1998年内蒙古中青年科技论文一等奖.
项目负责人 赵海平，010050，内蒙古呼和浩特市，内蒙古医学院第一附属医院普外科.
Correspondence to Hai-Ping Zhao, Department of Surgery, First Affiliated Hospital, Neimeng Medical College, Huhhot 010050, Neimeng, China
, http://www.100md.com
收稿日期 1998-11-09 接收日期 1999-03-01
Therapeutic effects of naltrexone in plasma endotoxin in experimental acute hemorrhagic
necrotizing pancreatitis of rats
Hai-Ping Zhao, Wan-Xiang Wang, Cheng-Wang Yang and Nai-Yan Shou
Department of Surgery, First Affiliated Hospital, Medical College, Huhhot 010050, Neimengu, China
, 百拇医药
Abstract
AIM To observe the therapeutic effects of naltrexone (NTX) in plasma endotoxin in experimental acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis of rats.
METHODS A model of acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis (AHNP) was induced by retrograde injection of 50g/L sodium taurocholate into the pancreatic duct. The rats were randomly divided into three groups: control group, AHNP group and NTX group. The effects of β-endophin recepter blocker, naltrexone on plasma levels of amylase and endotoxin, and changes of the pancreatic histology were examined under light and electronic microscopy and the survival rates of the three groups were calculated.
, http://www.100md.com
RESULTS Plasma levels of amylase (nmol/s, 2407±512, 2872±413, 3415±594) and endotoxin (EU/L, 45±23, 93±12, 160±35) in 6, 12 and 24h fell significantly and the damage of pancreatic tissue was reduced.
CONCLUSION NTX can decrease plasma endotoxin levels so as to improve the damage of pancreatic tissues and lower the death rate of the AHNP rats.
Subject headings pancreatitis naltrexone endotoxin
, 百拇医药
Zhao HP, Wang WX, Yang CW, Shou NY. Therapeutic effects of naltrexone in plasma endotoxin in experimental acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis of rats.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,1999;7(5):400-402
摘要
目的 探讨纳屈酮治疗大鼠急性出血坏死性胰腺炎内毒素血症的效果.
方法 应用50g/L牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射诱发大鼠急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)模型,观察对照组、AHNP组及纳屈酮(NTX)治疗组6,12,24h大鼠血浆淀粉酶、内毒素(ET)及胰腺组织光镜和电镜下病理改变,并统计3组大鼠48h存活率.
, 百拇医药
结果 AHNP组较对照组:于6,12,24h时点血浆淀粉酶(2407±512,2872±413,3415±594,nmol/s)、ET(45±23,93±12,160±35,EU/L)升高;NTX组较AHNP组:血浆淀粉酶(1532±567,1895±594,2483±818,nmol/s)、ET(28±3,21±8,69±9,EU/L)下降;而且光镜及电镜下,NTX组胰腺腺胞及间质病理损害减轻.
结论 NTX可通过降低AHNP大鼠血浆ET,而改善胰腺病理损害,降低其死亡率.
主题词 胰腺炎;纳屈酮;内毒素
赵海平, 王万祥, 杨成旺, 寿乃延.纳屈酮治疗大鼠急性出血坏死性胰腺炎内毒素血症的效果.世界华人消化杂志,1999;7(5):400-402
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0 引言
实验研究表明：纳络酮通过拮抗β-内啡肽对急性胰腺炎(AP)有增加胰腺组织灌流量及血流量作用[1]. 但由于纳络酮在体内血浆中T1/2仅为45min～60min，需多次给药才能维持药效. NTX对AHNP治疗国内外尚无报道. 本实验应用T1/2为纳络酮10倍的长效β-内啡肽受体拮抗剂NTX，治疗AHNP大鼠，观察AHNP大鼠血浆淀粉酶、内毒素及胰腺光镜和电镜下病理改变，并探讨其作用机制.
1 材料和方法
1.1 材料 Wistar大鼠110只，内蒙古大学实验动物研究中心提供，雌雄各半，体重250g～350g，随机分为对照组(n=20)，AHNP组(n=45),NTX组(n=45).
, 百拇医药
1.2 方法 大鼠禁食不禁饮12h后，参照Aho[2]方法复制AHNP大鼠模型. 试验分组①对照组常规开腹后轻翻胰腺，腹腔注入生理盐水5μL/g，逐层关腹，背部皮下注射生理盐水30μL/g. ②AHNP组复制AHNP模型后，腹腔注入生理盐水0.5μL/g，逐层关腹，背部皮下注射生理盐水30μL/g. ③NTX组复制AHNP模型后，腹腔注入NTX(美国Sigma公司提供)，0.5μg/g，容积为0.5μL/g，关腹. 背部皮下注射生理盐水30μL/g. NTX组10h后追加等量NTX，余组给等量生理盐水. 观测项目：各组均于6，12，24h断尾取血. ①血液肝素抗凝，离心后取血浆，检测淀粉酶(化学比色法，南京建成生物工程研究所产品)、ET(化学比色法，上海医化所产品). ②取胰腺尾部组织100mL/L福尔马林固定，HE染色，光镜观察组织学变化；40g/L戊二醛及10g/L锇酸双固定，EPON812包埋超薄切片，铀铅双重染色用H700H透射电镜观察. ③取对照组(n=5)，AHNP组(n=15)，NTX组(n=15)，观察48h大鼠病死率及病死鼠存活时间.
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统计学处理 淀粉酶、ET，大鼠存活时间用x±s表示，采用方差分析，病死率采用χ2检验.
2 结果
2.1 血浆淀粉酶各时点NTX组及AHNP 组较对照组明显增高；但NTX组较AHNP组明显下降，表1.
表1 大鼠AHNP血浆淀粉酶变化 (x±s, nmol/s)
, 百拇医药
aP<0.05，vs 对照组；cP<0.05，vs AHNP组，eP<0.05，vs NTX组.
2.2 血浆内毒素各时点 NTX组及AHNP组较对照组升高，但NTX组较AHNP组明显下降，表2.
表2 大鼠AHNP血浆内毒素变化 (x±s,EU/L)
, 百拇医药
bP<0.01，vs 对照组；dP<0.01，vs AHNP组；fP<0.01，vs NTX组.
2.3 生存情况 AHNP组大鼠病死率66.7%(10/15)，病死鼠平均存活时间23.6h±7.2h；NTX组病死率33.3%(5/15)，病死鼠平均存活时间29.9h±8.7h；NTX组与AHNP组病死率及病死鼠平均存活时间比较有显著性差异(P<0.05)；对照组48h长期存活.
2.4 肉眼及组织学观察 ①光镜：AHNP组光镜下胰腺腺泡及间质细胞6，12，24h分别以红细胞溢出，炎性细胞浸润，灶性凝固性坏死. NTX组各时点上述变化较局限，较AHNP组胰腺病理损害减轻. ②电镜：电镜下胰腺腺泡及间质细胞6h可见线粒体肿胀，粗面内质网扩张；12h线粒体肿胀，空泡样变性，嵴断失，粗面内质网脱颗粒；24h髓样小体及次级溶媒体出现，泡心细胞绒毛断失. NTX组上述各时点与AHNP组比较胰腺损害均减轻；胰腺细胞线粒体肿胀，嵴模糊；粗面内质网轻度扩张及少量脱颗粒；次级溶媒体明显减少，泡心细胞绒毛断裂. 对照组各时点镜下胰腺结构正常.
, 百拇医药
3 讨论
本实验大鼠AHNP模型光镜下胰腺腺泡及间质及腺泡肿胀，红细胞溢出，炎性细胞浸润及局灶凝固性坏死. 电镜下胰腺腺泡线粒体肿胀，嵴模糊及消失， 空泡样变性，粗面内质网脱颗粒，次级溶酶体形成；AHNP大鼠模型近似人类胆源性早期急性水肿性胰腺炎发展至中晚期的急性出血坏死性胰腺炎的致病过程，模型操作简单、方便、稳定、重复性好，平均存活期较短；适用于大批量模型制备.
3.1 AHNP内毒素血症及胰腺病理损害 正常情况下，肠道存在细菌及内毒素，但吸收入血甚微. 在急性出血坏死性胰腺炎时，腹膜炎、腹腔内液体渗出、炎症递质释放致肠壁缺血、肠壁血管通透性增加、肠麻痹等因素共同作用，使肠源性内毒素大量吸收，导致内毒素血症的发生. 内毒素不仅使原有的胰腺损害加重，血液动力学和全身代谢紊乱，而且导致全身脏器功能不全，甚至发生多器官功能衰竭，严重影响胰腺炎患者的预后. 本结果显示：血浆内毒素在6，12，24h对照组间无显著性差异(P>0.05)；AHNP组12，24h与6h比较，分别升高2倍及4倍；AHNP组较对照组增高为3，7，12倍. 对照组各时点胰腺组织结构正常；AHNP组6h时，胰腺出血，12h胰腺出血及坏死，24h胰腺坏死；胰腺损害随时间延长而加重，胰腺病理损害严重程度与血浆内毒素升高呈平行趋势；胰腺坏死严重情况下，内毒素水平达到高峰，提示胰腺出血及坏死程度越重，血浆内毒素变化升高越明显；相反，血浆内毒素增高可加重胰腺组织病理损害.
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3.2 NTX对AHNP的治疗机制 本结果显示，NTX组较AHNP组，血浆内毒素在6，12，24h下降2，4，3倍，但均未达到对照组水平；NTX组间24h与6，12h比较达到高峰，而与AHNP组24h比较，确明显下降；表明NTX可降低血浆内毒素；同时它通过改善胰腺血供、降低血浆淀粉酶及内毒素，而使胰腺组织局限性出血及坏死，细胞器损害减轻；观察48h三组大鼠存活时间及存活率，经过NTX治疗的AHNP大鼠存活期延长，病死率降低. 虽然，NTX可减轻AHNP大鼠胰腺病理性损害及血浆内毒素血症，但其治疗过程中，对AHNP产生的血浆中炎症递质和细胞因子的作用，需进一步研究. NTX的作用机制：①NTX阻断了中枢性脑垂体及下丘脑的β—内 啡肽作用，对交感缩血管中枢产生强烈兴奋作用，并抑制副交感中枢活动，增加心肌收缩力及外周血管阻力，使血压回升，而减轻肠壁微循环障碍，阻碍内毒素的大量吸收. ②血浆及胰腺组织中存在β—内啡肽，NTX可直接拮抗β—内啡肽作用，改善血液动力学变化，增加前列腺素合成及减少ATP代谢抑制效应，增加胰腺组织生物膜稳定性，减少胰酶活化及释放，使胰腺组织损害减轻. ③NTX通过改善血液循环，抑制炎症递质及毒性细胞因子产生及释放，阻断了胰酶原活化和释放，而使内毒素移位入血减少.
, 百拇医药
4 参考文献
1 邸荣庆，巫佩霞，菜舜英，井清源，朱政惠，曹红勇. β—内啡肽在急性胰腺炎发病中的作用和纳络酮治疗的实验研究.
中华外科杂志，1990；28：436
2 Aho HJ, Kokensalo SML, Nevalainen TJ. Experimental pancreatitis in the rat-sodum taurocholate induced acute
haemorrhagic pancreatitis. Scand J Gastroenterol, 1980;15:411, 百拇医药(赵海平 王万祥 杨成旺 寿乃延)
赵海平，男，1963-11-30生，内蒙古海拉尔市人，汉族. 1987年内蒙古医学院医学系毕业，1997年内蒙古医学院普外专业硕士毕业，主治医师，主要从事肝、胆、胰外科疾病诊治研究，在国内发表论文数十篇，《外科理论与实践》编委，《小儿外科手册》编委，获1998年内蒙古中青年科技论文一等奖.
项目负责人 赵海平，010050，内蒙古呼和浩特市，内蒙古医学院第一附属医院普外科.
Correspondence to Hai-Ping Zhao, Department of Surgery, First Affiliated Hospital, Neimeng Medical College, Huhhot 010050, Neimeng, China
, http://www.100md.com
收稿日期 1998-11-09 接收日期 1999-03-01
Therapeutic effects of naltrexone in plasma endotoxin in experimental acute hemorrhagic
necrotizing pancreatitis of rats
Hai-Ping Zhao, Wan-Xiang Wang, Cheng-Wang Yang and Nai-Yan Shou
Department of Surgery, First Affiliated Hospital, Medical College, Huhhot 010050, Neimengu, China
, 百拇医药
Abstract
AIM To observe the therapeutic effects of naltrexone (NTX) in plasma endotoxin in experimental acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis of rats.
METHODS A model of acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis (AHNP) was induced by retrograde injection of 50g/L sodium taurocholate into the pancreatic duct. The rats were randomly divided into three groups: control group, AHNP group and NTX group. The effects of β-endophin recepter blocker, naltrexone on plasma levels of amylase and endotoxin, and changes of the pancreatic histology were examined under light and electronic microscopy and the survival rates of the three groups were calculated.
, http://www.100md.com
RESULTS Plasma levels of amylase (nmol/s, 2407±512, 2872±413, 3415±594) and endotoxin (EU/L, 45±23, 93±12, 160±35) in 6, 12 and 24h fell significantly and the damage of pancreatic tissue was reduced.
CONCLUSION NTX can decrease plasma endotoxin levels so as to improve the damage of pancreatic tissues and lower the death rate of the AHNP rats.
Subject headings pancreatitis naltrexone endotoxin
, 百拇医药
Zhao HP, Wang WX, Yang CW, Shou NY. Therapeutic effects of naltrexone in plasma endotoxin in experimental acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis of rats.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,1999;7(5):400-402
摘要
目的 探讨纳屈酮治疗大鼠急性出血坏死性胰腺炎内毒素血症的效果.
方法 应用50g/L牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射诱发大鼠急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)模型,观察对照组、AHNP组及纳屈酮(NTX)治疗组6,12,24h大鼠血浆淀粉酶、内毒素(ET)及胰腺组织光镜和电镜下病理改变,并统计3组大鼠48h存活率.
, 百拇医药
结果 AHNP组较对照组:于6,12,24h时点血浆淀粉酶(2407±512,2872±413,3415±594,nmol/s)、ET(45±23,93±12,160±35,EU/L)升高;NTX组较AHNP组:血浆淀粉酶(1532±567,1895±594,2483±818,nmol/s)、ET(28±3,21±8,69±9,EU/L)下降;而且光镜及电镜下,NTX组胰腺腺胞及间质病理损害减轻.
结论 NTX可通过降低AHNP大鼠血浆ET,而改善胰腺病理损害,降低其死亡率.
主题词 胰腺炎;纳屈酮;内毒素
赵海平, 王万祥, 杨成旺, 寿乃延.纳屈酮治疗大鼠急性出血坏死性胰腺炎内毒素血症的效果.世界华人消化杂志,1999;7(5):400-402
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0 引言
实验研究表明：纳络酮通过拮抗β-内啡肽对急性胰腺炎(AP)有增加胰腺组织灌流量及血流量作用[1]. 但由于纳络酮在体内血浆中T1/2仅为45min～60min，需多次给药才能维持药效. NTX对AHNP治疗国内外尚无报道. 本实验应用T1/2为纳络酮10倍的长效β-内啡肽受体拮抗剂NTX，治疗AHNP大鼠，观察AHNP大鼠血浆淀粉酶、内毒素及胰腺光镜和电镜下病理改变，并探讨其作用机制.
1 材料和方法
1.1 材料 Wistar大鼠110只，内蒙古大学实验动物研究中心提供，雌雄各半，体重250g～350g，随机分为对照组(n=20)，AHNP组(n=45),NTX组(n=45).
, 百拇医药
1.2 方法 大鼠禁食不禁饮12h后，参照Aho[2]方法复制AHNP大鼠模型. 试验分组①对照组常规开腹后轻翻胰腺，腹腔注入生理盐水5μL/g，逐层关腹，背部皮下注射生理盐水30μL/g. ②AHNP组复制AHNP模型后，腹腔注入生理盐水0.5μL/g，逐层关腹，背部皮下注射生理盐水30μL/g. ③NTX组复制AHNP模型后，腹腔注入NTX(美国Sigma公司提供)，0.5μg/g，容积为0.5μL/g，关腹. 背部皮下注射生理盐水30μL/g. NTX组10h后追加等量NTX，余组给等量生理盐水. 观测项目：各组均于6，12，24h断尾取血. ①血液肝素抗凝，离心后取血浆，检测淀粉酶(化学比色法，南京建成生物工程研究所产品)、ET(化学比色法，上海医化所产品). ②取胰腺尾部组织100mL/L福尔马林固定，HE染色，光镜观察组织学变化；40g/L戊二醛及10g/L锇酸双固定，EPON812包埋超薄切片，铀铅双重染色用H700H透射电镜观察. ③取对照组(n=5)，AHNP组(n=15)，NTX组(n=15)，观察48h大鼠病死率及病死鼠存活时间.
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统计学处理 淀粉酶、ET，大鼠存活时间用x±s表示，采用方差分析，病死率采用χ2检验.
2 结果
2.1 血浆淀粉酶各时点NTX组及AHNP 组较对照组明显增高；但NTX组较AHNP组明显下降，表1.
表1 大鼠AHNP血浆淀粉酶变化 (x±s, nmol/s)
| 组 别 | n | 6h | 12h | 24h |
| 对照组 | 15 | 1144±112 | 1420±211 | 1702±435 |
| AHNP组e | 30 | 2078±512 | 2872±413 | 3415±594 |
| NTX组 | 30 | 1532±567 | 1895±594 | 2483±818 |
, 百拇医药
aP<0.05，vs 对照组；cP<0.05，vs AHNP组，eP<0.05，vs NTX组.
2.2 血浆内毒素各时点 NTX组及AHNP组较对照组升高，但NTX组较AHNP组明显下降，表2.
表2 大鼠AHNP血浆内毒素变化 (x±s,EU/L)
| 组 别 | n | 6h | 12h | 24h |
| 对照组 | 15 | 15±4 | 12±3 | 13±1 |
| AHNP组f | 30 | 45±23 | 93±12 | 160±35 |
| NTX组 | 30 | 28±3 | 21±8 | 69±9 |
, 百拇医药
bP<0.01，vs 对照组；dP<0.01，vs AHNP组；fP<0.01，vs NTX组.
2.3 生存情况 AHNP组大鼠病死率66.7%(10/15)，病死鼠平均存活时间23.6h±7.2h；NTX组病死率33.3%(5/15)，病死鼠平均存活时间29.9h±8.7h；NTX组与AHNP组病死率及病死鼠平均存活时间比较有显著性差异(P<0.05)；对照组48h长期存活.
2.4 肉眼及组织学观察 ①光镜：AHNP组光镜下胰腺腺泡及间质细胞6，12，24h分别以红细胞溢出，炎性细胞浸润，灶性凝固性坏死. NTX组各时点上述变化较局限，较AHNP组胰腺病理损害减轻. ②电镜：电镜下胰腺腺泡及间质细胞6h可见线粒体肿胀，粗面内质网扩张；12h线粒体肿胀，空泡样变性，嵴断失，粗面内质网脱颗粒；24h髓样小体及次级溶媒体出现，泡心细胞绒毛断失. NTX组上述各时点与AHNP组比较胰腺损害均减轻；胰腺细胞线粒体肿胀，嵴模糊；粗面内质网轻度扩张及少量脱颗粒；次级溶媒体明显减少，泡心细胞绒毛断裂. 对照组各时点镜下胰腺结构正常.
, 百拇医药
3 讨论
本实验大鼠AHNP模型光镜下胰腺腺泡及间质及腺泡肿胀，红细胞溢出，炎性细胞浸润及局灶凝固性坏死. 电镜下胰腺腺泡线粒体肿胀，嵴模糊及消失， 空泡样变性，粗面内质网脱颗粒，次级溶酶体形成；AHNP大鼠模型近似人类胆源性早期急性水肿性胰腺炎发展至中晚期的急性出血坏死性胰腺炎的致病过程，模型操作简单、方便、稳定、重复性好，平均存活期较短；适用于大批量模型制备.
3.1 AHNP内毒素血症及胰腺病理损害 正常情况下，肠道存在细菌及内毒素，但吸收入血甚微. 在急性出血坏死性胰腺炎时，腹膜炎、腹腔内液体渗出、炎症递质释放致肠壁缺血、肠壁血管通透性增加、肠麻痹等因素共同作用，使肠源性内毒素大量吸收，导致内毒素血症的发生. 内毒素不仅使原有的胰腺损害加重，血液动力学和全身代谢紊乱，而且导致全身脏器功能不全，甚至发生多器官功能衰竭，严重影响胰腺炎患者的预后. 本结果显示：血浆内毒素在6，12，24h对照组间无显著性差异(P>0.05)；AHNP组12，24h与6h比较，分别升高2倍及4倍；AHNP组较对照组增高为3，7，12倍. 对照组各时点胰腺组织结构正常；AHNP组6h时，胰腺出血，12h胰腺出血及坏死，24h胰腺坏死；胰腺损害随时间延长而加重，胰腺病理损害严重程度与血浆内毒素升高呈平行趋势；胰腺坏死严重情况下，内毒素水平达到高峰，提示胰腺出血及坏死程度越重，血浆内毒素变化升高越明显；相反，血浆内毒素增高可加重胰腺组织病理损害.
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3.2 NTX对AHNP的治疗机制 本结果显示，NTX组较AHNP组，血浆内毒素在6，12，24h下降2，4，3倍，但均未达到对照组水平；NTX组间24h与6，12h比较达到高峰，而与AHNP组24h比较，确明显下降；表明NTX可降低血浆内毒素；同时它通过改善胰腺血供、降低血浆淀粉酶及内毒素，而使胰腺组织局限性出血及坏死，细胞器损害减轻；观察48h三组大鼠存活时间及存活率，经过NTX治疗的AHNP大鼠存活期延长，病死率降低. 虽然，NTX可减轻AHNP大鼠胰腺病理性损害及血浆内毒素血症，但其治疗过程中，对AHNP产生的血浆中炎症递质和细胞因子的作用，需进一步研究. NTX的作用机制：①NTX阻断了中枢性脑垂体及下丘脑的β—内 啡肽作用，对交感缩血管中枢产生强烈兴奋作用，并抑制副交感中枢活动，增加心肌收缩力及外周血管阻力，使血压回升，而减轻肠壁微循环障碍，阻碍内毒素的大量吸收. ②血浆及胰腺组织中存在β—内啡肽，NTX可直接拮抗β—内啡肽作用，改善血液动力学变化，增加前列腺素合成及减少ATP代谢抑制效应，增加胰腺组织生物膜稳定性，减少胰酶活化及释放，使胰腺组织损害减轻. ③NTX通过改善血液循环，抑制炎症递质及毒性细胞因子产生及释放，阻断了胰酶原活化和释放，而使内毒素移位入血减少.
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4 参考文献
1 邸荣庆，巫佩霞，菜舜英，井清源，朱政惠，曹红勇. β—内啡肽在急性胰腺炎发病中的作用和纳络酮治疗的实验研究.
中华外科杂志，1990；28：436
2 Aho HJ, Kokensalo SML, Nevalainen TJ. Experimental pancreatitis in the rat-sodum taurocholate induced acute
haemorrhagic pancreatitis. Scand J Gastroenterol, 1980;15:411, 百拇医药(赵海平 王万祥 杨成旺 寿乃延)