复合法建立大鼠溃疡性结肠炎模型及其免疫和超微结构变化
济南军区总医院消化科 山东省济南市 250031
项目负责人 江学良济南军区总医院消化科 山东省济南市 250031
收稿日期 1999-01-09 接收日期 1999-03-01
Subject headings colitis, ulcerative; disease model, animal; antigen, CD29
主题词 结肠炎，溃疡性；疾病模型，动物；抗原，CD29
1 材料和方法
, http://www.100md.com
1.1 材料 封闭群健康成年Wistar大鼠60只，雌雄各半，体重250g～350g，2，4-二硝基氯苯(DNCB)为化学纯(上海试剂一厂)，乙酸(AA)为分析纯(东台市试剂厂)，CD4，CD29及异硫氰酸荧光素或PE标记的单克隆抗体均为法国Immunotech产品.
1.2 方法 实验动物适应性喂养标准饲料1wk后，随机分为3组，每组20只，A组(DNCB和AA复合法)：大鼠颈背部用10% Na2S脱毛后，连续14d，每天以20g/L DNCB丙酮液滴背1次，每次每鼠0.3mL，d15用直径3mm尼龙导管经肛门插入结肠8cm处，注入0.04mmol/L(0.1%)DNCB乙醇(50%)液0.25mL，d16同部位注入80mL/L AA溶液2mL，准确定时15s后再用5mL生理盐水冲洗. B组(单纯应用DNCB)：d1～d14方法同A组，d15～d18每天以尼龙导管向肛门内8cm结肠注入0.1% DNCB乙醇(500mL/L)液1次，每次每鼠0.25mL. C组(单纯应用AA)：用直径 3mm导管经肛门插入结肠8cm处，注入80mL/L AA溶液2mL，准确记时15s后，再用5mL生理盐水冲洗. 按设计观察各指标.
, 百拇医药
2 结果
2.1 症状和病程 造模完成后1wk～2wk，3组动物都出现粘液脓血便或粪便稀溏等溃疡性结肠炎(UC)常见症状. A组可持续16wk，B组造模后2wk粘液脓血便减少，逐渐恢复正常，C组上述症状可维持8wk.
2.2 病理学变化 3种方法均可产生粘膜溃疡，炎性细胞浸润，隐窝脓肿等UC组织学特征. 复合法病变可持续16wk以上，而DNCB法2wk后逐渐自愈，AA法可维持8wk.
2.3 超微结构观察 复合法在溃疡期可见粘膜表面和隐窝的上皮细胞微绒毛缩短，数目减少或不规则，杯状细胞不成熟，线粒体肿胀，变圆，脊变小，溶酶体增加.
, 百拇医药
2.4 免疫学反应 造模前及造模完成后1wk，CD4+，CD29+细胞A组为5.01%±2.01% vs 11.17%±2.18%，P<0.01. B组4.95%±1.87% vs 10.98%±2.87%，P<0.01. C组4.93%±1.96% vs 5.06%±2.03%，P>0.05.
2.5 成功率 复合法20只大鼠均可见典型溃疡形成，成功率为100%.
3 讨论
本实验采用DNCB和AA复合法所致大鼠UC模型具有以下特点：①病理学变化符合UC特征. ②是一种免疫反应的模型. CD4+，CD29+细胞的主要功能为辅助B淋巴细胞产生抗体和诱导细胞介导的淋巴细胞溶解作用，其升高可造成B淋巴细胞高度活化而发生免疫异常，可作为UC免疫监测指标[1]. 本实验CD4+，CD29+细胞较造模前明显升高，符合免疫反应模型的要求，且与人类CD4+，CD29+细胞变化一致[1]. 而单纯AA造模法无此改变. ③病程长. 本实验UC模型可维持16wk以上，克服了单纯DNCB法病程短，自愈性强的弱点. ④成功率高，重复性好，简单易行，是一种类似人类病变的理想的UC模型.
4 参考文献
1 江学良，权启镇，孙自勤，王要军，齐风. 糖皮质激素对重度溃疡性结肠炎患者淋巴细胞粘附分子表达的影响.
中国危重病急救医学，1998；10：366-368, 百拇医药(江学良 权启镇 王 东 孙自勤 王要军)
项目负责人 江学良济南军区总医院消化科 山东省济南市 250031
收稿日期 1999-01-09 接收日期 1999-03-01
Subject headings colitis, ulcerative; disease model, animal; antigen, CD29
主题词 结肠炎，溃疡性；疾病模型，动物；抗原，CD29
1 材料和方法
, http://www.100md.com
1.1 材料 封闭群健康成年Wistar大鼠60只，雌雄各半，体重250g～350g，2，4-二硝基氯苯(DNCB)为化学纯(上海试剂一厂)，乙酸(AA)为分析纯(东台市试剂厂)，CD4，CD29及异硫氰酸荧光素或PE标记的单克隆抗体均为法国Immunotech产品.
1.2 方法 实验动物适应性喂养标准饲料1wk后，随机分为3组，每组20只，A组(DNCB和AA复合法)：大鼠颈背部用10% Na2S脱毛后，连续14d，每天以20g/L DNCB丙酮液滴背1次，每次每鼠0.3mL，d15用直径3mm尼龙导管经肛门插入结肠8cm处，注入0.04mmol/L(0.1%)DNCB乙醇(50%)液0.25mL，d16同部位注入80mL/L AA溶液2mL，准确定时15s后再用5mL生理盐水冲洗. B组(单纯应用DNCB)：d1～d14方法同A组，d15～d18每天以尼龙导管向肛门内8cm结肠注入0.1% DNCB乙醇(500mL/L)液1次，每次每鼠0.25mL. C组(单纯应用AA)：用直径 3mm导管经肛门插入结肠8cm处，注入80mL/L AA溶液2mL，准确记时15s后，再用5mL生理盐水冲洗. 按设计观察各指标.
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2 结果
2.1 症状和病程 造模完成后1wk～2wk，3组动物都出现粘液脓血便或粪便稀溏等溃疡性结肠炎(UC)常见症状. A组可持续16wk，B组造模后2wk粘液脓血便减少，逐渐恢复正常，C组上述症状可维持8wk.
2.2 病理学变化 3种方法均可产生粘膜溃疡，炎性细胞浸润，隐窝脓肿等UC组织学特征. 复合法病变可持续16wk以上，而DNCB法2wk后逐渐自愈，AA法可维持8wk.
2.3 超微结构观察 复合法在溃疡期可见粘膜表面和隐窝的上皮细胞微绒毛缩短，数目减少或不规则，杯状细胞不成熟，线粒体肿胀，变圆，脊变小，溶酶体增加.
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2.4 免疫学反应 造模前及造模完成后1wk，CD4+，CD29+细胞A组为5.01%±2.01% vs 11.17%±2.18%，P<0.01. B组4.95%±1.87% vs 10.98%±2.87%，P<0.01. C组4.93%±1.96% vs 5.06%±2.03%，P>0.05.
2.5 成功率 复合法20只大鼠均可见典型溃疡形成，成功率为100%.
3 讨论
本实验采用DNCB和AA复合法所致大鼠UC模型具有以下特点：①病理学变化符合UC特征. ②是一种免疫反应的模型. CD4+，CD29+细胞的主要功能为辅助B淋巴细胞产生抗体和诱导细胞介导的淋巴细胞溶解作用，其升高可造成B淋巴细胞高度活化而发生免疫异常，可作为UC免疫监测指标[1]. 本实验CD4+，CD29+细胞较造模前明显升高，符合免疫反应模型的要求，且与人类CD4+，CD29+细胞变化一致[1]. 而单纯AA造模法无此改变. ③病程长. 本实验UC模型可维持16wk以上，克服了单纯DNCB法病程短，自愈性强的弱点. ④成功率高，重复性好，简单易行，是一种类似人类病变的理想的UC模型.
4 参考文献
1 江学良，权启镇，孙自勤，王要军，齐风. 糖皮质激素对重度溃疡性结肠炎患者淋巴细胞粘附分子表达的影响.
中国危重病急救医学，1998；10：366-368, 百拇医药(江学良 权启镇 王 东 孙自勤 王要军)