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编号:10696168
芹灵冲剂对雏鸭体内DHBV/DNA的抑制作用
http://www.100md.com 1999年5月15日 《世界华人消化杂志》 1999年第5期
     解放军北京医学高等专科学校 1药理教研室 病理教研室 北京市 100071

    2中国医学科学院医药生物技术研究所病毒室 北京市 100085

    黄正明,男,1949-09-03生,河南省商丘市人,汉族. 1979年广州第一军医大学毕业,1994年军事医学科学院硕士,副教授,主要从事抗肝炎药物等研究,发表论文37篇.

    *9·5军队重点科研基金资助项目面上A类课题,No.[1996]卫科训字第96号.

    项目负责人
黄正明,100071,北京市丰台东大街8号,解放军北京医学高等专科学校药理教研室.

    Supported by the 9·5 Key Scientific Research Fund (Class A), No.96 Health-Science-Training 1996.

    Correspondence to Dr. Zheng-Ming Huang, Department of Parmacology, Chinese PLA Beijing Medical College, 8 Dongdajie,Fengtai District, Beijing 100071, China

    Tel. +86·10·66947723

    收稿日期 1998-11-09 接收日期 1998-12-09

    Inhibitory effect of Qinling granule on duck hepatitis B virus hepatitis model in nestling ducks in vivo*

    Zheng-Ming Huang1, Xin-Bo Yang1, Wen-Bin Cao1, Hong-Yan Chen1, Ming Zheng1,Jing-Zhen Zhang1, Hong-Shan Chen2 and Zhuang Li2

    1Department of Pharmacology, Beijing Medical College of Chinese PLA, Beijing 100071, China

    2Laboratory of Virus, Institute of Medicine and Biological Technology, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100085, China

    


    

    Abstract


    AIM To study the inhibitory effect of Qinling granule (QG) on duck hepatitis B virus (DHBV) hepatitis model in nestling ducks in vivo.

    METHODS Seven-day-old DHBV infected nestling ducks were randomly divided into five groups: ①normal saline (NS); ②positive control drug, ACV 100mg/kg; ③QG 10g/kg; ④QG 5g/kg; and ⑤QG 2.5g/kg. Five animals were used in each group. Drugs were administered orally, twice daily for 10 days. Blood was taken from leg vein and were separated before treatment (TO), on day 5 and day 10 (T5,T10) after treatment, and on day 3 (P3) after termination of treatment. The presence of DHBV DNA in serum was detected by dot-blot hybridization. Probe was labelled with 32P. Livers were cut out for pathological examination.

    RESULTS In middle and high dosage groups of QG (5 and 10g/kg), serum DHBV-DNA levels were significantly lowered (P<0.05 and P<0.01), and the effect was similar in low dose group.

    CONCLUSION
Qingling granule can inhibit DHBV in vivo. It is worthy of further studies as an anti-hepatitis drug.

    Subject headings hepatitis DHBV/traditional Chinese medicine treatment; Qinling granule/treatment;

    nestling ducks/model animal; HBV-DNA

    Huang ZM, Yang XB, Cao WB, Chen HY, Zheng M, Zhang JZ, Chen HS, Li Z. Inhibitory effect of Qinling granule on duck hepatitis B virus hepatitis model in nestling ducks in vivo. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,1999;7(5):384-386

    

    摘要

    
目的 观察芹灵冲剂(QinlingChongji,QL)对鸭体内鸭乙型肝炎病毒(DHBV)-DNA的抑制效果.

    方法 待DHBV感染雏鸭7d血清检测为阳性后,随机分组进行药物治疗试验,每组5只,QL分为高、中、低3个剂量组,分别为10,5和2.5g/kg组,ig,2次/d,10d.设病毒对照组(DHBV),以生理盐水代替药物,ig,Bid×10.阳性药用无环鸟苷(ACV)粉剂(250mg/支),ig100mg/kg,2次/d,10d(Bid×10).在感染后7d即用药前(T0),用药5d(T5),用药10d(T10)和停药后3d(P3),自鸭腿经静脉取血,分离血清,-70℃保存待检.

    结果 QL(5,10g/kg)组,对雏鸭无毒性,给药5d(T5)和10d(T10)能显著降低DHBV感染鸭血清中DHBV-DNA的水平,其抑制率分别与病毒对照组比较,均有显著性差异(P<0.05和P<0.01);低剂量组(2.5g/kg)对鸭血清DHBVDNA也有一定的疗效.3批实验结果 一致,并有明显的量效关系.

    结论 QL体内有抗DHBV的作用,值得临床进一步研究.

    主题词 肝炎,鸭乙型肝炎病毒感染/中医药疗法;芹灵冲剂/治疗应用;雏鸭/动物模型;乙肝病毒DNA

    黄正明, 杨新波, 曹文斌, 陈鸿雁, 郑鸣, 张敬珍, 陈鸿珊, 李壮. 芹灵冲剂对雏鸭体内DHBV/DNA的抑制作用.

    世界华人消化杂志,1999;7(5):384-386

    

    0 引言


    芹灵冲剂(QL)根据中医中药组方的有关理论,结合民间用药经验,由水芹等二味中药合理配伍精制而成,具有清热利胆、解毒祛湿之功效,主治乙型肝炎、黄疸肝炎和单项谷丙转胺酶(ALT)升高者. 临床对102例乙肝患者疗效观察,取得较好效果,退黄率为99.6%,降酶率为96.1%,HBsAg三个稀释度下降率为84.4%[1]. 为了验证QL抗乙肝病毒的作用,在DHBV肝炎雏鸭模型上,观察QL对DHBV抑制的体内疗效,研究总结如下.

    1 材料和方法

    1.1 材料
①动物:1日龄北京鸭,购自北京禽蛋养鸭场. ②鸭乙型肝炎病毒:为鸭乙型肝炎病毒DNA (DHBV-DNA)强阳性血清,由中国医学科学院医药生物技术研究所病毒室提供,-70℃保存. ③药物:芹灵冲剂,批号970426,由解放军北京医学高等专科学校研究,天津洪福制药厂生产. 阳性药物-无环鸟苷(ACV)粉剂(250mg/支),英国Wellcome foundation Co产品. 临用前用生理盐水配成需要浓度. ④试剂:α-p 32P-dCTP购自北京福瑞生物技术工程公司. 缺口翻译药盒购自普洛麦格公司(Primega Co);Sephadex G-50,Ficoll PVP购自瑞典Pharmacia公司;SDS西德Merck公司产品;鱼精DNA、牛血清清蛋白为中国科学院生物物理所产品;硝酸纤维素膜0.45μm Amersham公司产品.

    1.2 方法

    1.2.1 DHBV感染治疗 1日龄北京鸭,经腿胫静脉注射DHBV-DNA阳性鸭血清,每只0.2mL,在感染后7d取血,分离血清,-70℃保存待检. 待DHBV感染雏鸭7d血清检测为阳性后,随机分组进行药物治疗试验,每组5只,QL分为高、中、低3个剂量10g/kg,5g/kg和2.5g/kg组,ig,2次/d,10d. 设病毒对照组(DHBV),以生理盐水代替药物,ig. 阳性药用无环鸟苷粉剂(250mg/支),ig,100mg/kg,3次/d,10d.

    1.2.2 DHBV-DNA的检测及药学计算 在感染后7d即用药前(T0),用药5d(T5),用药10d(T10)和停药后3d(P3),自鸭腿胫静脉取血,分离血清,每批各组血清样品同时点膜(30μL),测定鸭血清中DHBV-DNA水平,按缺口翻译试剂盒说明书方法,用32P标记DHBV-DNA探针,并作鸭血清斑点杂交,放射自显影膜片斑点,用DG3022型酶标检测仪测定光密度值(A),波长为490nm,以杂交斑点A作为鸭血清DHBV-DNA水平值. 计算每组鸭不同时间血清DNA的平均值(x±s),并将每组鸭用药后T5,T10和停药后P3血清DHBV-DNA水平与同组T0 A比较,采用配对T检验,计算T1,P1值. 计算每组鸭T5,T10和P3血清DHBV-DNA的抑制百分率,比较各组鸭血清DHBV-DNA抑制率的动态. 将给药治疗组不同时间DHBV-DNA抑制率分别与病毒对照组相同时间DHBV-DNA抑制率比较,采用成组检验,计算T2,P2值.

    给药前(T0)A-给药后(T5,T10,P3)A

    DNA抑制%= ×100%

    给药前(T0)A

    2 结果

    实验的雏鸭感染后7d血清DHBV-DNA全部阳性. 在整个实验过程中,病毒对照鸭血清DHBV-DNA水平虽有波动,但无显著差异(表1).

    2.1 ACV对DHBV感染鸭血清DHBV-DNA的影响 DHBV感染鸭ig,ACV 100mg/kg,2次/d,5d及10d与T0比较,均明显下降(P<0.05,表1),抑制率与病毒对照组比较亦有显著性差异(P<0.05),停药后3d DHBV-DNA回升,有反跳现象,与文献报道一致[2],表明ACV作为抗DHBV阳性药作用是明显的,本实验结果可靠.

    表1 QL在鸭体内对DHBV-DNA的抑制作用 (n=5)
实验批次 药物 (g/kg)血清DHBV-DNA的A490x±s
T0T5T10P3
病毒对照1.29±0.261.26±0.251.14±0.291.18±0.24
ACV 0.1/kg1.20±0.180.67±0.11a0.51±0.08a0.99±0.30
QL 2.5/kg1.16±0.220.79±0.110.76±0.160.84±0.12
QL 5.0/kg1.08±0.170.65±0.11a0.51±0.15a0.72±0.10
QL 10.0/kg1.04±0.180.41±0.07b0.34±0.08b0.51±0.10a
病毒对照0.52±0.050.54±0.100.53±0.090.50±0.04
ACV 0.1/kg0.54±0.120.25±0.05a0.26±0.04a0.52±0.13
QL 2.5/kg0.55±0.170.39±0.140.34±0.060.37±0.10
QL 5.0/kg0.53±0.060.27±0.07a0.24±0.04a0.34±0.05
QL 10.0/kg0.53±0.060.19±0.04b0.16±0.04b0.27±0.05b
病毒对照0.92±0.180.90±0.170.91±0.150.83±0.15
ACV 0.1/kg0.87±0.140.44±0.13a0.42±0.09a0.78±0.12
QL 2.5/kg0.92±0.220.60±0.160.54±0.100.72±0.12
QL 5.0/kg0.88±0.210.53±0.14a0.43±0.10a0.68±0.13
QL 10.0/kg0.94±0.140.41±0.10b0.36±0.07b0.46±0.19b


    aP<0.05,bP<0.01,vs T0 配对t检验.

    2.2 芹灵冲剂对DHBV感染鸭体内血清DHBV-DNA的影响 QL10.0g/kg的平均抑制率在给药5d分别为67.5%,64.8%和54.4%;给药10d分别为70.2%,69.8%和60.4%,与给药前后鸭血清DHBV-DNA水平的自身比较及给药后不同时间鸭血清DHBV-DNA抑制率分别与病毒对照组相同时间的同一指标比较,给药后5d和10d都有非常显著性差异(P<0.01). QL 5.0g/kg的平均抑制率在给药5d分别为48.4%,50.0%和41.1%,给药10d分别为55.3%,54.7%和52.7%. 给药后不同时间鸭血清DHBV-DNA抑制率分别与病毒对照组相同时间的同一指标比较,在给药后5d和10d都有显著性差异(P<0.05). QL 2.5g/kg虽然在给药5d,10d对鸭血清DHBV-DNA具有一定抑制作用,但无统计学意义,效果不如上述两剂量组(表1). 实验结果重复性好,停药3d后QL药物对鸭血清DHBV-DNA仍显示了一定的抑制作用,并有剂量反应关系(图1~3).

    1 QL对鸭体内HBV-DNA的抑制效果(第1批).

    2 QL对鸭体内HBV-DNA的抑制效果(第2批).

    3 QL对鸭体内HBV-DNA的抑制效果(第3批).

    3 讨论

    鸭乙型肝炎病毒肝炎雏鸭为国家认可的评价抗肝炎药物疗效的一种模型,该病毒与人HBV同属嗜肝DNA病毒[2],在复制过程上有相似性. 我们的三批实验结果表明,阳性药ACV对DHBV-DNA的抑制作用明显,有非常显著性意义. QL三个剂量组(10,5和2.5g/kg组)对DHBV感染鸭血清DHBV-DNA都有一定的抑制作用,并有剂量反应关系,其中以10g/kg组效果最好,对DHBV-DNA最高抑制率可达70%以上,在给药后的5d,10d,3批实验都有非常显著性意义. 5g/kg虽能显著抑制DHBV-DNA,但不如大剂量组. 2.5g/kg虽然剂量较小,但对DHBV也有一定的抑制作用.

    在抗DHBV机制的研究中,QL中的主要药物水芹具有抑制DHBV-DNA聚合酶的作用使DHBV-DNA的复制过程障碍[3]. 此外,QL还具有抗脂质过氧化作用[4],增加DHBV肝炎雏鸭血中SOD活性,降低MDA的含量,清除氧自由基,保护肝细胞膜作用,因此表明QL是一种对HBV有抑制作用的药物.

    4 参考文献

    1 黄正明,杨新波,曹文斌,周逸军,卢立燕. 芹灵冲剂治疗慢乙肝102例临床观察. 华人消化杂志,1998;6:144-145

    2 陈鸿珊,郭聚涛. 阿糖腺苷单磷酸对鸭乙型肝炎的治疗效果. 实验和临床病毒学杂志,1989;3:12

    3 Huang ZM, Yang XB, Cao WB. Anti-duck hepatitis B virus mechanism by Shui Qin extraction. Chin Sci Bull, 1997;42:1481-1483

    4 黄正明,杨新波,曹文斌,陈鸿雁,郑鸣,张敬珍. 芹灵冲剂抗脂质过氧化作用. 中药药理与临床,1998;14(特刊):80, http://www.100md.com(黄正明1 杨新波1 曹文斌1 陈鸿雁1 郑鸣1 张敬珍1 陈鸿珊2 李壮2)