慢性丙型肝炎患者病毒血清抗体的分型
河北医科大学第三医院 1感染科 2病毒免疫室 河北省石家庄市 050051
项目负责人 曹治宸河北医科大学第三医院感染科
收稿日期 1999-04-28
Subject headings hepatitis C,virus; antibody, viral; hepatitis C/therapy; interferon
主题词 肝炎，丙型/治疗；丙型肝炎病毒；抗体，病毒；干扰素
不同地区分离的HCV分属不同的基因型，对治疗的反应有较大的差异，检测病毒类型应对丙肝的临床预后有较大的帮助. 但基因分型方法复杂，技术要求高，价格昂贵，不便于临床应用. 血清抗体分型方法简便，能部分地反映HCV的分型情况. 我们对83例CHC患者进行了HCV血清抗体的检测，旨在了解在CHC中不同血清型的分布，及与患者预后的关系.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 1994-04/1997-08我院收治的CHC83例，男53例，女30例，平均年龄45岁±12岁. 按1995年北京会议病毒性肝炎诊断标准，其中轻度33例，中度46例，重度4例. 全部病例ALT在正常值(≤30U/L)的2.5倍之间.
1.2 方法 ①HCV血清标志物检测：抗-HCV采用二代ELISA法(华美生物工程公司试剂). 抗-HCV IgM采用ELISA法(高达生物技术研究所试剂). HCV RNA采用RT-PCR法(北京医大肝病所试剂). ②HCV血清抗体分型：北京医大肝病所提供试剂. 根据Machida等方法[1]，在HCV核心区抗原Cp9序列中合成两个分型抗原多肽Sp11(IPKKARRPEGRTWAQPGY)和Sp12(IPKDRRSTGKSWGKPGY)，包被酶联反应板，按试剂盒说明操作. 使用Humarreader酶标仪，以空白调零，以492mm波长测定. 临界值=阴性对照值+0.25，临界值附近的标本值，重复测定1次.
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2 结果
在83例CHC患者中，抗-HCV全部阳性(100%)，抗-HCV IgM 13例阳性(15.66%)，HCV RNA 45例阳性(54.22%).
2.1 HCV血清抗体分型结果 在83例CHC中，64例(77%)可测出不同的血清型抗体，其中单纯感染血清抗体Ⅰ型者27例(33%)，血清抗体Ⅰ，Ⅱ型混合感染者21例(25%)，单纯感染血清抗体Ⅱ型者16例(19%)，未测出血清抗体者19例(23%). 在CHC各组中，血清抗体分型的分布无显著性差异(P>0.05)，单纯感染血清抗体Ⅱ型HCV的患者病情较轻，但慢肝重度组病例较少，未做统计学处理.
2.2 不同血清抗体型感染对干扰素的反应 45例HCV血清抗体阳性的患者应用了干扰素(IFNα-2b，美国先灵葆雅公司)治疗. HCV RNA持续阴转和ALT复常，为持续反应；HCV RNA暂时阴转和(或)ALT反复异常波动，为暂时反应：HCV RNA无变化，为无反应. 随访1a，持续反应15例(33%)，暂时反应27例(60%)，无反应3例(7%). 无反应组例数太少，与暂时反应组合并后，同持续反应组比较，血清抗体分布无明显差异(χ2=1.3792，P>0.05).
, 百拇医药
3 讨论
HCV核心区蛋白中，第68到78位氨基酸是高度可变的. 根据其不同的抗原决定簇，可分为两组. 我们以两种多肽抗原包被酶免疫反应板，检测HCV血清型特异性抗体，将HCV分成血清Ⅰ型和血清Ⅱ型. 据报道血清Ⅰ型相当于HCV基因型Ⅰ/1a, Ⅱ/1b型，血清Ⅱ型相当于HCV基因型Ⅲ/2a, Ⅳ/2b型[1]. 血清分型与基因分型的符合率可达70%～90%[2，3]. 基因分型方法有核酸序列分析、多引物扩增、PCR酶切和印迹斑点杂交等，技术要求高，操作复杂费时，价格昂贵，不适合临床大量病例检测，而血清分型是较适用临床的方法. 我们对CHC患者进行血清抗体分型，64例血清型抗体检测阳性(77%)，结果与其他地区相似[3，4]. 血清型抗体分布中，Ⅰ型和Ⅱ型的混合感染占被测患者的1/4 ，较其他地区明显增多(广州为5.6%，辽宁为3.9%，秦皇岛为11.4%)[3-5]，可能由于本组病例均是慢性肝炎，是否与重复感染有关，还应进一步大量病例的观察分析. 或许重复感染就是造成丙肝慢性化的原因之一，应特别引起临床医生的重视.
, 百拇医药
不同型别HCV的致病力强弱，一直是人们关注的问题. HCV基因型Ⅱ/1b型被认为致病力较强，对IFN的治疗反应较差[6]. 本实验64例CHC患者的病情与血清抗体分型的分布未发现明显的关系，但单纯血清抗体Ⅱ型感染者，病情较轻，未发现重度慢性肝炎. 由于分组例数较小，不便于统计学处理. 单纯血清抗体Ⅱ型感染者较其他地区报告明显减少，能否说明血清抗体Ⅱ型感染者病情较轻，治疗反应较好，而少有慢性化的倾向，尚缺乏深入的论证. 血清抗体Ⅰ型包括基因型Ⅱ/1b型和Ⅰ/1a，以血清抗体分型能否全面反映病毒的毒力，还需进一步的探讨. 在45例CHC对IFN的治疗反应中，单纯血清抗体Ⅱ型感染对IFN治疗反应较好，血清抗体Ⅰ型和Ⅰ型、Ⅱ型的混合感染疗效较差，但无显著性差异(P>0.05). 可能病例数较少，不能反映准确的治疗反应. 本组均是慢性肝炎，CHC对IFN的治疗反应远不及急性丙肝，疗效常受年龄、病史和其他原有疾病等多种因素影响[7，8]，也是本组病例持续反应者较少的原因.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Machida A, Ohnuma H, Tsuda F. Two distinct subtypes of hepatitis C virus defined by antibodies detected to the putative
core protein. Hepatology, 1992;16:886-889
2 Mondelli MV, Cerino A, Bono F. Hepatitis C virus(HCV) core serotypes in chronic HCV infection. J Clin Microbiol,
1994;32:2523-2525
, 百拇医药 3 唐小平，袁小珍，唐漾波. 丙型肝炎病毒血清抗体分型研究. 中华传染病杂志，1997；15：194-195
4 韩悦，石有昌，马环. 丙型肝炎病毒血清分型的研究. 实用肝脏病杂志，1998；3：139-141
5 孙谢文. 丙型肝炎病毒血清分型与基因分型的探讨. 河北医科大学学报，1997；18(Suppl)：60-62
6 Brechot C. Hepatitis C virus genetic variability: clinical implications. Am J Gastroenterol, 1994;89:41-44
7 曹治宸，南月敏，刘金星. 丙型肝炎治疗的多因素分析. 中华肝脏病杂志，1998；5：215-216
8 曹治宸，孔丽，甄真. 铁代谢改变对丙型肝炎治疗的影响. 中华肝脏病杂志，1998；6：8-7, 百拇医药(曹治宸1 孔 丽1 甄 真1 张进贵2)
项目负责人 曹治宸河北医科大学第三医院感染科
收稿日期 1999-04-28
Subject headings hepatitis C,virus; antibody, viral; hepatitis C/therapy; interferon
主题词 肝炎，丙型/治疗；丙型肝炎病毒；抗体，病毒；干扰素
不同地区分离的HCV分属不同的基因型，对治疗的反应有较大的差异，检测病毒类型应对丙肝的临床预后有较大的帮助. 但基因分型方法复杂，技术要求高，价格昂贵，不便于临床应用. 血清抗体分型方法简便，能部分地反映HCV的分型情况. 我们对83例CHC患者进行了HCV血清抗体的检测，旨在了解在CHC中不同血清型的分布，及与患者预后的关系.
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1 材料和方法
1.1 材料 1994-04/1997-08我院收治的CHC83例，男53例，女30例，平均年龄45岁±12岁. 按1995年北京会议病毒性肝炎诊断标准，其中轻度33例，中度46例，重度4例. 全部病例ALT在正常值(≤30U/L)的2.5倍之间.
1.2 方法 ①HCV血清标志物检测：抗-HCV采用二代ELISA法(华美生物工程公司试剂). 抗-HCV IgM采用ELISA法(高达生物技术研究所试剂). HCV RNA采用RT-PCR法(北京医大肝病所试剂). ②HCV血清抗体分型：北京医大肝病所提供试剂. 根据Machida等方法[1]，在HCV核心区抗原Cp9序列中合成两个分型抗原多肽Sp11(IPKKARRPEGRTWAQPGY)和Sp12(IPKDRRSTGKSWGKPGY)，包被酶联反应板，按试剂盒说明操作. 使用Humarreader酶标仪，以空白调零，以492mm波长测定. 临界值=阴性对照值+0.25，临界值附近的标本值，重复测定1次.
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2 结果
在83例CHC患者中，抗-HCV全部阳性(100%)，抗-HCV IgM 13例阳性(15.66%)，HCV RNA 45例阳性(54.22%).
2.1 HCV血清抗体分型结果 在83例CHC中，64例(77%)可测出不同的血清型抗体，其中单纯感染血清抗体Ⅰ型者27例(33%)，血清抗体Ⅰ，Ⅱ型混合感染者21例(25%)，单纯感染血清抗体Ⅱ型者16例(19%)，未测出血清抗体者19例(23%). 在CHC各组中，血清抗体分型的分布无显著性差异(P>0.05)，单纯感染血清抗体Ⅱ型HCV的患者病情较轻，但慢肝重度组病例较少，未做统计学处理.
2.2 不同血清抗体型感染对干扰素的反应 45例HCV血清抗体阳性的患者应用了干扰素(IFNα-2b，美国先灵葆雅公司)治疗. HCV RNA持续阴转和ALT复常，为持续反应；HCV RNA暂时阴转和(或)ALT反复异常波动，为暂时反应：HCV RNA无变化，为无反应. 随访1a，持续反应15例(33%)，暂时反应27例(60%)，无反应3例(7%). 无反应组例数太少，与暂时反应组合并后，同持续反应组比较，血清抗体分布无明显差异(χ2=1.3792，P>0.05).
, 百拇医药
3 讨论
HCV核心区蛋白中，第68到78位氨基酸是高度可变的. 根据其不同的抗原决定簇，可分为两组. 我们以两种多肽抗原包被酶免疫反应板，检测HCV血清型特异性抗体，将HCV分成血清Ⅰ型和血清Ⅱ型. 据报道血清Ⅰ型相当于HCV基因型Ⅰ/1a, Ⅱ/1b型，血清Ⅱ型相当于HCV基因型Ⅲ/2a, Ⅳ/2b型[1]. 血清分型与基因分型的符合率可达70%～90%[2，3]. 基因分型方法有核酸序列分析、多引物扩增、PCR酶切和印迹斑点杂交等，技术要求高，操作复杂费时，价格昂贵，不适合临床大量病例检测，而血清分型是较适用临床的方法. 我们对CHC患者进行血清抗体分型，64例血清型抗体检测阳性(77%)，结果与其他地区相似[3，4]. 血清型抗体分布中，Ⅰ型和Ⅱ型的混合感染占被测患者的1/4 ，较其他地区明显增多(广州为5.6%，辽宁为3.9%，秦皇岛为11.4%)[3-5]，可能由于本组病例均是慢性肝炎，是否与重复感染有关，还应进一步大量病例的观察分析. 或许重复感染就是造成丙肝慢性化的原因之一，应特别引起临床医生的重视.
, 百拇医药
不同型别HCV的致病力强弱，一直是人们关注的问题. HCV基因型Ⅱ/1b型被认为致病力较强，对IFN的治疗反应较差[6]. 本实验64例CHC患者的病情与血清抗体分型的分布未发现明显的关系，但单纯血清抗体Ⅱ型感染者，病情较轻，未发现重度慢性肝炎. 由于分组例数较小，不便于统计学处理. 单纯血清抗体Ⅱ型感染者较其他地区报告明显减少，能否说明血清抗体Ⅱ型感染者病情较轻，治疗反应较好，而少有慢性化的倾向，尚缺乏深入的论证. 血清抗体Ⅰ型包括基因型Ⅱ/1b型和Ⅰ/1a，以血清抗体分型能否全面反映病毒的毒力，还需进一步的探讨. 在45例CHC对IFN的治疗反应中，单纯血清抗体Ⅱ型感染对IFN治疗反应较好，血清抗体Ⅰ型和Ⅰ型、Ⅱ型的混合感染疗效较差，但无显著性差异(P>0.05). 可能病例数较少，不能反映准确的治疗反应. 本组均是慢性肝炎，CHC对IFN的治疗反应远不及急性丙肝，疗效常受年龄、病史和其他原有疾病等多种因素影响[7，8]，也是本组病例持续反应者较少的原因.
, 百拇医药
4 参考文献
1 Machida A, Ohnuma H, Tsuda F. Two distinct subtypes of hepatitis C virus defined by antibodies detected to the putative
core protein. Hepatology, 1992;16:886-889
2 Mondelli MV, Cerino A, Bono F. Hepatitis C virus(HCV) core serotypes in chronic HCV infection. J Clin Microbiol,
1994;32:2523-2525
, 百拇医药 3 唐小平，袁小珍，唐漾波. 丙型肝炎病毒血清抗体分型研究. 中华传染病杂志，1997；15：194-195
4 韩悦，石有昌，马环. 丙型肝炎病毒血清分型的研究. 实用肝脏病杂志，1998；3：139-141
5 孙谢文. 丙型肝炎病毒血清分型与基因分型的探讨. 河北医科大学学报，1997；18(Suppl)：60-62
6 Brechot C. Hepatitis C virus genetic variability: clinical implications. Am J Gastroenterol, 1994;89:41-44
7 曹治宸，南月敏，刘金星. 丙型肝炎治疗的多因素分析. 中华肝脏病杂志，1998；5：215-216
8 曹治宸，孔丽，甄真. 铁代谢改变对丙型肝炎治疗的影响. 中华肝脏病杂志，1998；6：8-7, 百拇医药(曹治宸1 孔 丽1 甄 真1 张进贵2)