胆石症患者胆囊粘膜和胆汁Hp及抗Hp CagA抗体的意义
自贡市第三人民医院内科 四川省自贡市 643020
项目负责人 余剑平自贡市第三人民医院内科 四川省自贡市 643020
收稿日期 1999-04-08 接收日期 1999-06-08
Subject headings cholelithiasis; helicobacter, pylori; gallbladder mucosa; bile; cytotoxin antibodies
主题词 胆结石；螺杆菌，幽门；胆囊粘膜；胆汁；细胞毒素抗体
, http://www.100md.com Hp在胃十二指肠粘膜定植，并引起Hp相关性胃炎、溃疡及肿瘤等. 然而，近有个别报道在胆囊内发现Hp或其相关抗原[1，2]，其临床意义尚不明确. 鉴于此，作者收集结石性胆囊炎患者20例，手术切除的胆囊粘膜Hp及胆汁中Hp细胞毒素相关基因抗原(CagA)抗体进行检测，并评价其意义. 报告如下.
1 材料和方法
1.1 材料 慢性胆囊炎合并胆结石住院患者20例，男4例，女16例，年龄25岁～57岁，平均年龄38岁，病程10a～30a，平均18a. 患者行胆囊切除术，术前13例患者有抗生素等药物治疗史. 取每例患者手术切除的胆囊粘膜3块用于Hp检查，胆汁3mL，-20℃低温保存用于Hp CagA抗体检测.
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1.2 方法 每一病例新鲜胆囊粘膜一块用于快速尿素酶试验，试剂盒由福建三强生物化工有限公司生产并按说明书操作和判断结果. 另2块粘膜经100mL/L福尔马林液固定后石蜡包埋病理切片，分别进行HE染色和Giemsa染色后进行病理组织学及Hp显微镜检查. Hp PCR检测采用一对Hp特异性16Sr RNA核苷酸序列作引物，由北京赛百盛生物工程公司合成. 上述3种方法均呈阳性者定为Hp阳性. 胆汁中Hp CagA抗体检测采用Hp CagA IgG EIA试剂盒进行，由上海晶莹生物技术有限公司提供，将冷冻胆汁冻融后离心取上层液并用试剂盒提供的稀释液按1∶21倍稀释，其他操作按说明书进行并按阳性和阴性对照判断结果.
2 结果
2.1 Hp检测 慢性胆囊炎胆结石患者手术切除的新鲜胆囊粘膜20例作快速尿素酶试验5例阳性，此5例中2例(均为女性)胆囊粘膜病理切片Giemsa染色显微镜检查见成簇分布且形态酷似Hp的螺旋杆状细菌，将2例病理切片进一步作Hp PCR检测结果均呈阳性. 按本文标准判断，2例胆囊粘膜Hp呈阳性，占所观察病例的10%. 所有患者胆囊粘膜病理切片HE染色组织学上均表现为慢性炎症，在1例胆囊粘膜Hp检查阳性患者胆囊粘膜见胃上皮化生.
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2.2 Hp CagA抗体 患者20例胆汁Hp CagA IgG抗体检测17例呈阳性，占所检病例的85%. 其中包括2例胆囊粘膜Hp检查阳性患者. 胆汁Hp CagA抗体检测阳性率明显高于胆囊粘膜Hp检查阳性率(P<0.01).
3 讨论
有关Hp在胆囊粘膜或胆汁中被检出的报道极少. Kawaguchi et al[1]曾在1例女性胆结石患者手术切除的胆囊粘膜中检出Hp，并伴有胆囊粘膜假幽门腺化生. 在此患者胃粘膜中也检出Hp并经遗传学分析与胆囊粘膜中检出的Hp型别相同. 其后，Figura et al[2]也报道，在16例血清Hp CagA蛋白抗体阳性的胆结石患者中的15例(93.7%)胆汁中检出Hp CagA蛋白抗体. 5例胆汁中检出Hp抗原，1例检出Hp DNA. 我们采用几种公认的Hp检测方法检查了20例胆结石患者手术切除的胆囊粘膜，发现至少2例可能为Hp阳性，占10%，其中1例胆囊粘膜呈现胃上皮化生. 同步检测胆汁中Hp CagA IgG抗体阳性17例，占85%. 我们观察的结果与上述作者报道相似，提示胆囊粘膜可能有Hp定植. 胆汁中Hp CagA抗体阳性则提示胆囊粘膜中定植的Hp可能为毒性较强的菌株.
, 百拇医药
Hp及其抗体在胆囊粘膜和胆汁中被检出是否表明Hp与胆囊炎和胆结石的发病相关尚难肯定. Fox et al[3]对23例胆结石患者手术切除后经-70℃冷冻的胆囊粘膜和胆汁进行研究，共有18例患者的胆囊粘膜进行组织学检查均有不同程度的胃上皮化生，其中16例胆囊粘膜病理切片银染色检查发现螺杆菌，而冷冻后的标本细菌培养则为阴性. 8份经PCR扩增的螺杆菌DNA片段进行种系分析，5份为H.bilis, 2份为F.rappini，1份为H.pullorum, 未发现Hp. 但Hp在种系发生上与上述螺杆菌有着很近的亲缘关系. 方驰华et al[4]采用PCR从胆结石中检测出较高的Hp DNA阳性率. 曾有人从人粪便中分离出Hp活菌[5]. 这些均提示Hp可经十二指肠和Oddi括约肌迁移到胆囊内. 再者，胆囊粘膜胃上皮化生也为Hp定植提供了环境条件. 但为何在胆囊粘膜检测Hp阳性率低，我们的资料推测可能与患者术前应用抗生素等药物使Hp受抑制或被清除有关. 而抗Hp抗体则消失较慢故其检测阳性率高. 总之，在胆囊粘膜检出Hp以及在胆汁中检测出抗Hp抗体是否提示Hp与慢性胆囊炎胆结石的发病有关仍值得进一步研究.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 Kawaguchi M, Saito T, Ohno H, Midorikawa S, Sanji T, Handa Y, Morita S, Yoshida H, Tsurui M, Misaka R, Hirota T, Saito M,Minami K. Bacteria closely resembling Helicobacter pylori detected immunohistologically and genetically in resected
gallbladder mucosa. J Gastroenterol, 1996;31:294-298
2 Figura N, Cetta F, Angelico M, Montalto G, Cetta D, Pacenti L, Vindigni C, Vaira D, Festuccia F, Santis AD, Rattan G,Giannace R, Campagna S, Gennari C. Most Helicobacter pylori-infected patients have specific antibodies, and some
, http://www.100md.com
also have H.pylori antigens and genomic material in bile. Dig Dis Sci, 1998;43:854-862
3 Fox JG, Dewhirst FE, Shen Z, Feng Y, Taylor NS, Paster BJ, Ericson RL, Lau CN, Correa P, Araya JC, Roa I. Hepatic
Helicobacter species identified in bile and gallbladder tissue from chileans with chronic cholecystitis.
Gastroenterology, 1998;114:755-763
4 方驰华，杨继震. 胆囊结石患者结石需氧菌和厌氧菌分子生物学研究及意义. 华人消化杂志，1998；6：627
5 Thomas JE, Gibson GR, Darboe MK, Dale A, Weaver LT. Isolation of Helicobacter pylori from human faeces.
Lancet, 1992;340:1194-1195, http://www.100md.com(余剑平 李 亮 罗晓英)
项目负责人 余剑平自贡市第三人民医院内科 四川省自贡市 643020
收稿日期 1999-04-08 接收日期 1999-06-08
Subject headings cholelithiasis; helicobacter, pylori; gallbladder mucosa; bile; cytotoxin antibodies
主题词 胆结石；螺杆菌，幽门；胆囊粘膜；胆汁；细胞毒素抗体
, http://www.100md.com Hp在胃十二指肠粘膜定植，并引起Hp相关性胃炎、溃疡及肿瘤等. 然而，近有个别报道在胆囊内发现Hp或其相关抗原[1，2]，其临床意义尚不明确. 鉴于此，作者收集结石性胆囊炎患者20例，手术切除的胆囊粘膜Hp及胆汁中Hp细胞毒素相关基因抗原(CagA)抗体进行检测，并评价其意义. 报告如下.
1 材料和方法
1.1 材料 慢性胆囊炎合并胆结石住院患者20例，男4例，女16例，年龄25岁～57岁，平均年龄38岁，病程10a～30a，平均18a. 患者行胆囊切除术，术前13例患者有抗生素等药物治疗史. 取每例患者手术切除的胆囊粘膜3块用于Hp检查，胆汁3mL，-20℃低温保存用于Hp CagA抗体检测.
, http://www.100md.com
1.2 方法 每一病例新鲜胆囊粘膜一块用于快速尿素酶试验，试剂盒由福建三强生物化工有限公司生产并按说明书操作和判断结果. 另2块粘膜经100mL/L福尔马林液固定后石蜡包埋病理切片，分别进行HE染色和Giemsa染色后进行病理组织学及Hp显微镜检查. Hp PCR检测采用一对Hp特异性16Sr RNA核苷酸序列作引物，由北京赛百盛生物工程公司合成. 上述3种方法均呈阳性者定为Hp阳性. 胆汁中Hp CagA抗体检测采用Hp CagA IgG EIA试剂盒进行，由上海晶莹生物技术有限公司提供，将冷冻胆汁冻融后离心取上层液并用试剂盒提供的稀释液按1∶21倍稀释，其他操作按说明书进行并按阳性和阴性对照判断结果.
2 结果
2.1 Hp检测 慢性胆囊炎胆结石患者手术切除的新鲜胆囊粘膜20例作快速尿素酶试验5例阳性，此5例中2例(均为女性)胆囊粘膜病理切片Giemsa染色显微镜检查见成簇分布且形态酷似Hp的螺旋杆状细菌，将2例病理切片进一步作Hp PCR检测结果均呈阳性. 按本文标准判断，2例胆囊粘膜Hp呈阳性，占所观察病例的10%. 所有患者胆囊粘膜病理切片HE染色组织学上均表现为慢性炎症，在1例胆囊粘膜Hp检查阳性患者胆囊粘膜见胃上皮化生.
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2.2 Hp CagA抗体 患者20例胆汁Hp CagA IgG抗体检测17例呈阳性，占所检病例的85%. 其中包括2例胆囊粘膜Hp检查阳性患者. 胆汁Hp CagA抗体检测阳性率明显高于胆囊粘膜Hp检查阳性率(P<0.01).
3 讨论
有关Hp在胆囊粘膜或胆汁中被检出的报道极少. Kawaguchi et al[1]曾在1例女性胆结石患者手术切除的胆囊粘膜中检出Hp，并伴有胆囊粘膜假幽门腺化生. 在此患者胃粘膜中也检出Hp并经遗传学分析与胆囊粘膜中检出的Hp型别相同. 其后，Figura et al[2]也报道，在16例血清Hp CagA蛋白抗体阳性的胆结石患者中的15例(93.7%)胆汁中检出Hp CagA蛋白抗体. 5例胆汁中检出Hp抗原，1例检出Hp DNA. 我们采用几种公认的Hp检测方法检查了20例胆结石患者手术切除的胆囊粘膜，发现至少2例可能为Hp阳性，占10%，其中1例胆囊粘膜呈现胃上皮化生. 同步检测胆汁中Hp CagA IgG抗体阳性17例，占85%. 我们观察的结果与上述作者报道相似，提示胆囊粘膜可能有Hp定植. 胆汁中Hp CagA抗体阳性则提示胆囊粘膜中定植的Hp可能为毒性较强的菌株.
, 百拇医药
Hp及其抗体在胆囊粘膜和胆汁中被检出是否表明Hp与胆囊炎和胆结石的发病相关尚难肯定. Fox et al[3]对23例胆结石患者手术切除后经-70℃冷冻的胆囊粘膜和胆汁进行研究，共有18例患者的胆囊粘膜进行组织学检查均有不同程度的胃上皮化生，其中16例胆囊粘膜病理切片银染色检查发现螺杆菌，而冷冻后的标本细菌培养则为阴性. 8份经PCR扩增的螺杆菌DNA片段进行种系分析，5份为H.bilis, 2份为F.rappini，1份为H.pullorum, 未发现Hp. 但Hp在种系发生上与上述螺杆菌有着很近的亲缘关系. 方驰华et al[4]采用PCR从胆结石中检测出较高的Hp DNA阳性率. 曾有人从人粪便中分离出Hp活菌[5]. 这些均提示Hp可经十二指肠和Oddi括约肌迁移到胆囊内. 再者，胆囊粘膜胃上皮化生也为Hp定植提供了环境条件. 但为何在胆囊粘膜检测Hp阳性率低，我们的资料推测可能与患者术前应用抗生素等药物使Hp受抑制或被清除有关. 而抗Hp抗体则消失较慢故其检测阳性率高. 总之，在胆囊粘膜检出Hp以及在胆汁中检测出抗Hp抗体是否提示Hp与慢性胆囊炎胆结石的发病有关仍值得进一步研究.
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4 参考文献
1 Kawaguchi M, Saito T, Ohno H, Midorikawa S, Sanji T, Handa Y, Morita S, Yoshida H, Tsurui M, Misaka R, Hirota T, Saito M,Minami K. Bacteria closely resembling Helicobacter pylori detected immunohistologically and genetically in resected
gallbladder mucosa. J Gastroenterol, 1996;31:294-298
2 Figura N, Cetta F, Angelico M, Montalto G, Cetta D, Pacenti L, Vindigni C, Vaira D, Festuccia F, Santis AD, Rattan G,Giannace R, Campagna S, Gennari C. Most Helicobacter pylori-infected patients have specific antibodies, and some
, http://www.100md.com
also have H.pylori antigens and genomic material in bile. Dig Dis Sci, 1998;43:854-862
3 Fox JG, Dewhirst FE, Shen Z, Feng Y, Taylor NS, Paster BJ, Ericson RL, Lau CN, Correa P, Araya JC, Roa I. Hepatic
Helicobacter species identified in bile and gallbladder tissue from chileans with chronic cholecystitis.
Gastroenterology, 1998;114:755-763
4 方驰华，杨继震. 胆囊结石患者结石需氧菌和厌氧菌分子生物学研究及意义. 华人消化杂志，1998；6：627
5 Thomas JE, Gibson GR, Darboe MK, Dale A, Weaver LT. Isolation of Helicobacter pylori from human faeces.
Lancet, 1992;340:1194-1195, http://www.100md.com(余剑平 李 亮 罗晓英)