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编号:10696504
乙型肝炎病毒血清学标志物与DNA检测结果的对比分析
http://www.100md.com 1999年10月15日 《世界华人消化杂志》 1999年第10期
     中国人民解放军第四军医大学唐都医院传染科 陕西省西安市 710038

    项目负责人
王平忠中国人民解放军第四军医大学唐都医院传染科 陕西省西安市 710038

    收稿日期 1999-05-25

    

    Subject headings
hepatitis B virus; DNA viral; polymerase chain reaction; enzyme-linked immunosorbentassay

    主题词 乙型肝炎病毒;DNA病毒;聚合酶链反应;酶联免疫吸附试验
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    我国为乙型肝炎病毒(HBV)感染高发区. 约有1亿人为乙肝表面抗原携带者. HBV感染后血清学检测组合的标志模式多且复杂. 由于PCR方法的引入,可以直接检测病毒核酸(DNA)[1],所以对患者体内HBV复制及传染性有了更深刻地认识. 然而,由于基层单位开展PCR检测受到条件限制,仅以血清学检测结果作为实验诊断依据,可能会出现漏检. 因此,将HBV-DNA与血清学标志物(HBV-M)进行对比分析,对临床诊断HBV感染及治疗效果的判断具有重要作用. 我们采用聚合酶链反应(PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)两种方法,同时检测了356份血清,现将结果报告如下.

    1 材料和方法

    1.1 材料 1997-01/1998-11来我科同时检测乙肝HBV血清标志物和DNA的356份血清,其中,男208人,女148人,年龄8岁~61岁. ELISA诊断试剂盒由北京万泰生物药业有限公司提供;HBV-DNA PCR检测试剂由华美生物工程公司提供.
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    1.2 方法 ELISA及HBV-DNA PCR反应操作及结果判断均严格按试剂盒说明书进行.

    2 结果

    PCR法检测HBV-DNA与ELISA检测HBV-M的结果如下:①PCR检测HBV-DNA总阳性率;在356份血清中共检出HBV-DNA阳性172份,总阳性率为48.3%. 其中,195份HBsAg(+)血清中,DNA阳性率为77.5%(151/195);161份HBsAg(-)血清中,DNA阳性率为13.0%(21/161);HBV-M全阴者中DNA阳性率为7.3%;60份HBsAb(+)血清中,DNA阳性率为13.3%(8/60);HBeAg(+),HBeAb(+),HBcAb(+)标志物中DNA阳性率分别为92.4%(61/66),71.6%(73/102),65.4%(159/243). ②356例患者血清ELISA和PCR检测结果见表1. 从表中发现,HBsAg和HBeAg同时阳性,DNA阳性率最高,为92.4%. 这从e系统和DNA两方面提示病毒感染与复制,此种血清模式具有最强的传染性. 而HBsAg(+)、HBeAg(-)的组合中,DNA阳性率为45.8%,表明HBeAg(-)不一定表示血清的传染性弱,PCR检测HBV-DNA对HBeAg(-)者具有重要意义.
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    3 讨论

    采用PCR技术对356份血清的HBV不同血清学标志及不同组合进行HBV-DNA检测,结果显示在195份HBsAg(+)血清中,HBV-DNA(+)151例,占77.5%,HBeAg(+)66例中,HBV-DNA(+)61例,阳性率为92.4%,说明用PCR方法检测,绝大多数HBsAg(+)或HBeAg(+)血清中均有HBV-DNA存在. 另有44例HBsAg(+)和5例HBeAg(+)血清中显示HBV-DNA(-),这可能是HBV-DNA整合于宿主细胞基因组[2],或基因变异,所用PCR引物不匹配,未能检出,但仍可表达HBsAg. 通常认为HBsAb(+)提示病程进入恢复期,无传染性,但本文结果表明,单项HBsAb(+)者24例,PCR检出2例HBV-DNA(+),阳性率为8.3%,说明血液中HBsAg向HBsAb转换后,仍有部分患者存在HBV-DNA复制. 此种情况虽然占恢复期乙肝的少数,但仍应引起医生和患者的重视. 其原因可能与HBV亚型的双重感染或病毒自然发生免疫逃避突变有关[3]. HBeAg向HBeAb的转换被认为是肝细胞中活跃复制病毒的清除期,本实验检测HBeAb(+)102例中有61例HBV-DNA(+),阳性率为71.6%,这可能是HBV C区基因变异,HBeAg不能表达,而HBV-DNA不断复制的结果[4].
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    表1 ELISA和PCR法检测HBV血清标志物的结果(n,%)
HBV-M血 清 份 数HBV-DNA
阳性数%
HBsAg(+) HBeAg(+) HBcAb(+)666192.4
HBsAg(+) HBeAb(+) HBcAb(+)816884.0
HBsAg(+) HBeAg(-) HBcAb(+)/(-)48〔HBcAb(-)4例〕22〔HBcAb(-)时,DNA(+)3例〕45.8
HBsAb(+)2428.3
HBsAb(+) HBcAb(+)19421.0
HBsAb(+)/(-) HBeAb(+) HBcAb(+)/(-)21〔HBsAb(-),4例,HBcAb(-)5〔HBsAb(-)时,DNA(+)3例,23.8
3例,未出现同时(-)〕〔HBcAb(-)时,DNA(+)2例〕
HBcAb(+)15426.7
HBV-M全阴8267.3
合计35617248.3

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    Zhang et al[5]用定量PCR技术检测慢性乙肝患者血清HBV-DNA含量表明:HBeAb出现并不能表示HBV复制的停止,而只是复制水平的降低. 因此,对HBeAb阳性,DNA也阳性者要慎重对待. HBcAb单项阳性15例中有4例HBV-DNA阳性,阳性率为26%;HBsAb,HBcAb同时阳性者19例,有4例HBV-DNA阳性,阳性率为21%. 说明这部分HBcAb(+)患者仍带毒,其原因可能是HBV感染者HBsAg已消失,也可能是病毒滴度低,ELISA不能检出,而PCR方法灵敏度高,可检出HBV-DNA的存在. 因此,“HBeAb出现,HBeAg转阴,伴随HBsAb出现,即表明患者恢复”这一观点也有例外.

    乙肝五项标志物全部阴性者82例,PCR方法检出6例DNA(+),阳性率为7.3%,这是由于HBV-DNA的出现早于其他血清学指标[6],受检者可能处于感染早期. 6例HBV-DNA(+)受检者中,2例ALT增高,另4例在1mo~2mo内复查,有2例HBsAg(+). 因此PCR的高灵敏度可为早期诊断HBV感染提供依据. 在临床上对HBV-M均阴性者,宜进一步进行PCR检测HBV-DNA,以确定有无HBV感染,进而,对献血者或血制品或从事幼教及饮食业者须在检测HBV-M的基础上,用PCR法检测HBV-DNA,方可确认有无传染乙肝的可能.
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    本实验结果显示,多种血清学标志模式都有一定的HBV-DNA检出率,DNA(+)表示HBV在体内复制. 许多资料表明,只要有HBV-DNA就可以引起HBV感染[7,8],这不仅有诊断意义,而且也有流行病学意义. HBV复制时,DNA可出现于肝细胞和血清中,此外,目前国内HBsAg检测试剂盒主要是针对adr亚型,供应我国的Abbott试剂盒也主要用于检测adr和adw亚型. 因此,一些亚型可能被漏检. 那么,仅以HBV-M的检测结果作为判断HBV感染及传染性、治疗效果的指标以及HBV是否在体内复制,有一定的局限性. 只有检测HBV-DNA的存在,才能确证HBV感染后在体内的复制并追踪预后,目前认为HBV-DNA是乙肝传染性的特异性标志,故对HBV-DNA的检测具有重要的临床价值.

    4 参考文献

    1 Kaneko S, Feinstone SM, Miller RH. Rapid and sensitive method for the detection of serum hepatitis B virus DNA using the
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    polymerase chain reaction technique. J Clin Microbiol, 1989;27:1930-1935

    2 Pontisso P. Detection of hepatitis B virus DNA in mononuclear blood cell. Br Med J, 1984;288:1563-1567

    3 Fan JS, Zhuang H, Li YG, Zhu XJ, Xu DZ, Ma WM, Wang YM, Cheng YJ, Lou GQ, Ma TX. Serotyping and genotyping of hepatitis B

    virus among HBsAg positive and negative hepatitis B patients in 8 cities of China. 
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    Zhonghua Weishengwu He MianyixueZazhi, 1998;18:88-91

    4 Wang AL, Zhou YX, Yao ZQ. Gene variation in the pre-C region of hepatitis B virus. Zhonghua Yixue Zazhi, 1994;74:144-146

    5 Zhang FC, Wu WF, Dong HQ, Cai XL, Wei SJ, Xi C. Detection of serum HBV-DNA by quantitative PCR and its clinical

    application. Zhonghua Chuanranbing Zazhi, 1997;15:24-27

    6 Krogsgaard K, Imao M, Ishikawa S, Ohto M. Delta infection and hepatitis B virus replication in Danish patients with fulminant
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    hepatitis B. Scand J Infec Dis, 1988;20:127-132

    7 Bond WW, Heritage ID, Fcores GH. Inactivation of hepatitis B virus by intermediate to high level disinfectant chemicals. 

    J Clin Microbiol, 1983;18:535-539

    8 Kobayashi H, Suzuki T, Kinoshita N, Sodeyama Y. Susceptibility of hepatitis B virus to disintectants or heat. 

    J Clin Microbiol, 1984;20:214-217, http://www.100md.com(王平忠 周永兴)