消化性溃疡患者胃壁一氧化氮合酶神经组化分布
1中国人民解放军414医院消化内科 江苏省南京市 210015
2湖北省人民医院消化内科 湖北省武汉市 430060
项目负责人 马高峰中国人民解放军414医院消化内科 江苏省南京市 210015
收稿日期 1999-12-08 接收日期 2000-01-05
Subject headings nitric oxide synthase; NADPH-diaphorase; peptic ulcer
主题词 一氧化氮合酶；还原型辅酶Ⅱ；硫辛酰胺脱氢酶；消化性溃疡
, http://www.100md.com
马高峰,王寿九,张晓华,王盛根,吴南,唐云先,于皆平. 消化性溃疡患者胃壁一氧化氮合酶神经组化分布.
世界华人消化杂志，2000；8(4)：469-470
近年研究证实，一氧化氮是胃肠非肾上腺素能非胆碱能(NANC)神经的一种新的抑制性递质，主要介导平滑肌的松弛效应，对维持胃粘膜正常血供、胃壁的正常运动有重要意义[1，2]. NO是由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸生成. NADPH硫辛酰胺脱氢酶(NADPH-diaphorase, ND)组织化学方法是一种间接证实NOS的存在部位(主要是神经成分)的较常用方法[3-5]. 我们应用该方法观察了8例消化性溃疡(PU)患者胃壁内NOS的分布情况并探讨其意义.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 PU患者胃大切新鲜手术标本8例. 其中幽门管溃疡6例，幽门管、十二指肠球部复合性溃疡2例. 年龄36岁～56岁，均为男性. 取新鲜手术标本胃体大弯(正常部位)、幽门管(溃疡基底部及周边)各取1.0cm×1.0cm大小组织1块，用生理盐水冲洗干净后置入40mL/L福尔马林固定液(含10g/L CaCl2)中4h于箱式恒冷冰冻切片机中切片(片厚16μm).
1.2 方法 用酶组织化学染色(NOS)染色，0.01mol/L PBS漂洗好的切片置于ND孵育液中，37℃反应45min. 反应液组成为0.1mol/L PB(pH 8.0)含3g/L Triton-x-100；0.1g/L硝基四氮唑蓝(NBT，Sigma公司)；1.0g/L NADPH-Na4(BM公司)，反应完毕后，用0.1mol/L PBS充分漂洗(部分切片再置入ACHE孵育液中作NOS，ACHE双染法观察，按Karnovsky-Roots法进行). 同时，将少许切片放入不加NADPH的上述反应液中作阴性对照. 后将切片裱于涂有明胶的玻片上经常规脱水、透明、中性树胶封片. Olympus显微观察、照象、并作图象处理分析肌间神经丛中NOS阳性着色的深度(吸光度A，OD值)和NOS阳性神经纤维的密度及着色深度(A，OD值).
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统计学处理 实验数据用均数±标准差(x±s)表示，样本均数组间比较用t检验. 以P<0.05作为差异有显著性的标准.
2 结果
胃体大弯胃壁粘膜上皮、腺体、神经细胞、神经纤维、血管均见深蓝色NOS阳性产物(表1)，而阴性对照片无任何阳性产物出现. 幽门管NOS总体分布与胃体大弯侧相似. 粘膜上皮、腺体NOS阳性产物较少，神经细胞胞体着色深度明显减弱，阳性神经纤维较稀疏，着色深度减弱(表1)，而阴性对照片也无任何阳性产物出现.
表1 PU患者胃壁NOS阳性神经成分图象分析结果(x±s, OD值)
, 百拇医药
aP<0.05， vs 大弯组.
3 讨论
本研究结果显示，在人体胃壁内存在较丰富的NOS阳性神经成分，胃体(正常大弯)与幽门管(溃疡部位或周边)却不尽相同. 提示溃疡好发部位可能与NOS阳性神经成分较少或活性较低，局部NO保护作用减弱有关.
已证实，NO作为一种细胞间及细胞内的信息物质，在机体的病理生理过程中有重要意义[6,7]. Mocada et al提出，神经系统(特别是神经细胞)是哺乳动物体内内源性NO合成的重要场所. 经胃肠NANC神经中NOS催化L-Arg产生的NO是胃壁内NO的一种主要来源，它不仅作用于平滑肌，还作用于血管内皮细胞和腺体，调节胃底基础张力、生理性扩张、血液循环、胃液分泌及参与保护粘膜上皮的完整性[1,2]. 我们通过ND染色显示了胃壁内NOS阳性成分的存在，其意义即与此有关. 在正常胃体大弯胃壁，粘膜上皮、腺体、神经细胞及神经纤维均显示了较强的NOS活性，因而局部产生释放足量NO，组织抗损害能力较强，这可能是胃体大弯很少发生溃疡的原因之一；而幽门管(即溃疡区及周边)胃壁内NOS阳性神经成分较少，提示NOS活性较弱，以致局部NO产生释放不足，保护作用减弱，局部平滑肌舒张收缩调节失控，易发生痉挛、梗阻致排空受限，血供减少等，可能与溃疡发生于幽门管且不易愈合有一定关系. 但是，幽门管NOS阳性神经成分较少或活性较弱的原因是否为固有的组织学分布抑或某些致损伤因子所引起，尚待深入研究.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 Pique JM, Whittle BJR, Esphigues JV. The vasolidation role of endogenous nitric oxide in the rat gastric microcirculation.
Eur J Pharmacol, 1989;174:293-296
2 Anggard ENK. Nitric oxide: mediator, murderer, and medicine. Lancet, 1994;343:1199-1206
3 Nichols K, Staines W. Nitric oxide (NO) synthesizing neurons expressing neuropeptide (NPY) are widely distributed
, http://www.100md.com
throughout the human colon wall. Gastroenterology, 1994;108:A1044
4 王晓, 尹朝礼, 胡道松，茹立强. 肠动力性疾病结肠壁内NOS, AchE及SP阳性神经分布. 中华消化杂志, 1997;17:195-198
5 彭曦, 汪任良. 一氧化氮合酶在胃肠的分布规律及意义. 国外医学病理生理分册, 1997;17:258-263
6 Carl N, Qiao VE. Nitric oxide synthase: roles, tolls, and controls. Cell, 1994;78:915-918
7 Harald H, Schmidt HW. NO at word. Cell, 1994;78:919-925, http://www.100md.com(马高峰1 王寿九1 张晓华1 王盛根1 吴 南1 唐云先1 于皆平2)
2湖北省人民医院消化内科 湖北省武汉市 430060
项目负责人 马高峰中国人民解放军414医院消化内科 江苏省南京市 210015
收稿日期 1999-12-08 接收日期 2000-01-05
Subject headings nitric oxide synthase; NADPH-diaphorase; peptic ulcer
主题词 一氧化氮合酶；还原型辅酶Ⅱ；硫辛酰胺脱氢酶；消化性溃疡
, http://www.100md.com
马高峰,王寿九,张晓华,王盛根,吴南,唐云先,于皆平. 消化性溃疡患者胃壁一氧化氮合酶神经组化分布.
世界华人消化杂志，2000；8(4)：469-470
近年研究证实，一氧化氮是胃肠非肾上腺素能非胆碱能(NANC)神经的一种新的抑制性递质，主要介导平滑肌的松弛效应，对维持胃粘膜正常血供、胃壁的正常运动有重要意义[1，2]. NO是由一氧化氮合酶(NOS)催化L-精氨酸生成. NADPH硫辛酰胺脱氢酶(NADPH-diaphorase, ND)组织化学方法是一种间接证实NOS的存在部位(主要是神经成分)的较常用方法[3-5]. 我们应用该方法观察了8例消化性溃疡(PU)患者胃壁内NOS的分布情况并探讨其意义.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 PU患者胃大切新鲜手术标本8例. 其中幽门管溃疡6例，幽门管、十二指肠球部复合性溃疡2例. 年龄36岁～56岁，均为男性. 取新鲜手术标本胃体大弯(正常部位)、幽门管(溃疡基底部及周边)各取1.0cm×1.0cm大小组织1块，用生理盐水冲洗干净后置入40mL/L福尔马林固定液(含10g/L CaCl2)中4h于箱式恒冷冰冻切片机中切片(片厚16μm).
1.2 方法 用酶组织化学染色(NOS)染色，0.01mol/L PBS漂洗好的切片置于ND孵育液中，37℃反应45min. 反应液组成为0.1mol/L PB(pH 8.0)含3g/L Triton-x-100；0.1g/L硝基四氮唑蓝(NBT，Sigma公司)；1.0g/L NADPH-Na4(BM公司)，反应完毕后，用0.1mol/L PBS充分漂洗(部分切片再置入ACHE孵育液中作NOS，ACHE双染法观察，按Karnovsky-Roots法进行). 同时，将少许切片放入不加NADPH的上述反应液中作阴性对照. 后将切片裱于涂有明胶的玻片上经常规脱水、透明、中性树胶封片. Olympus显微观察、照象、并作图象处理分析肌间神经丛中NOS阳性着色的深度(吸光度A，OD值)和NOS阳性神经纤维的密度及着色深度(A，OD值).
, http://www.100md.com
统计学处理 实验数据用均数±标准差(x±s)表示，样本均数组间比较用t检验. 以P<0.05作为差异有显著性的标准.
2 结果
胃体大弯胃壁粘膜上皮、腺体、神经细胞、神经纤维、血管均见深蓝色NOS阳性产物(表1)，而阴性对照片无任何阳性产物出现. 幽门管NOS总体分布与胃体大弯侧相似. 粘膜上皮、腺体NOS阳性产物较少，神经细胞胞体着色深度明显减弱，阳性神经纤维较稀疏，着色深度减弱(表1)，而阴性对照片也无任何阳性产物出现.
表1 PU患者胃壁NOS阳性神经成分图象分析结果(x±s, OD值)
| 分组 | 阳性神经胞体吸光度 | 阳性神经纤维吸光度 | 阳性神经纤维密度 |
| 大弯 | 0.8±0.2 | 0.6±0.2 | 24.7±8.2 |
| 幽门管 | 0.6±0.2a | 0.5±0.2a | 18.7±7.8a |
, 百拇医药
aP<0.05， vs 大弯组.
3 讨论
本研究结果显示，在人体胃壁内存在较丰富的NOS阳性神经成分，胃体(正常大弯)与幽门管(溃疡部位或周边)却不尽相同. 提示溃疡好发部位可能与NOS阳性神经成分较少或活性较低，局部NO保护作用减弱有关.
已证实，NO作为一种细胞间及细胞内的信息物质，在机体的病理生理过程中有重要意义[6,7]. Mocada et al提出，神经系统(特别是神经细胞)是哺乳动物体内内源性NO合成的重要场所. 经胃肠NANC神经中NOS催化L-Arg产生的NO是胃壁内NO的一种主要来源，它不仅作用于平滑肌，还作用于血管内皮细胞和腺体，调节胃底基础张力、生理性扩张、血液循环、胃液分泌及参与保护粘膜上皮的完整性[1,2]. 我们通过ND染色显示了胃壁内NOS阳性成分的存在，其意义即与此有关. 在正常胃体大弯胃壁，粘膜上皮、腺体、神经细胞及神经纤维均显示了较强的NOS活性，因而局部产生释放足量NO，组织抗损害能力较强，这可能是胃体大弯很少发生溃疡的原因之一；而幽门管(即溃疡区及周边)胃壁内NOS阳性神经成分较少，提示NOS活性较弱，以致局部NO产生释放不足，保护作用减弱，局部平滑肌舒张收缩调节失控，易发生痉挛、梗阻致排空受限，血供减少等，可能与溃疡发生于幽门管且不易愈合有一定关系. 但是，幽门管NOS阳性神经成分较少或活性较弱的原因是否为固有的组织学分布抑或某些致损伤因子所引起，尚待深入研究.
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 Pique JM, Whittle BJR, Esphigues JV. The vasolidation role of endogenous nitric oxide in the rat gastric microcirculation.
Eur J Pharmacol, 1989;174:293-296
2 Anggard ENK. Nitric oxide: mediator, murderer, and medicine. Lancet, 1994;343:1199-1206
3 Nichols K, Staines W. Nitric oxide (NO) synthesizing neurons expressing neuropeptide (NPY) are widely distributed
, http://www.100md.com
throughout the human colon wall. Gastroenterology, 1994;108:A1044
4 王晓, 尹朝礼, 胡道松，茹立强. 肠动力性疾病结肠壁内NOS, AchE及SP阳性神经分布. 中华消化杂志, 1997;17:195-198
5 彭曦, 汪任良. 一氧化氮合酶在胃肠的分布规律及意义. 国外医学病理生理分册, 1997;17:258-263
6 Carl N, Qiao VE. Nitric oxide synthase: roles, tolls, and controls. Cell, 1994;78:915-918
7 Harald H, Schmidt HW. NO at word. Cell, 1994;78:919-925, http://www.100md.com(马高峰1 王寿九1 张晓华1 王盛根1 吴 南1 唐云先1 于皆平2)