胃粘膜病变与C-met原癌基因表达的关系及预后研究
1中国人民解放军广州军区总医院消化科 广东省广州市 510010
2北京医科大学第三医院消化科
项目负责人 庄小强，510010，广东省广州市流花路111号.
收稿日期 2000-03-04 接收日期 2000-04-06
Subject headings gene expression; gastric mucosa; stomach neoplasms; immunohistochemistry; prognosis;
polymerase chain reaction
, 百拇医药
主题词 基因表达；胃粘膜；胃肿瘤；免疫组织化学；预后；聚合酶链反应
庄小强,林三仁,郑杰,孙桂华,李燕. 胃粘膜病变与C-met原癌基因表达的关系及预后研究. 世界华人消化杂志，2000；8(6)：711-712
目前认识到胃粘膜癌变极其复杂，涉及多种原癌基因的激活和抑癌基因的失活. 最近Soman et al[1]应用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法在胃癌活检的不同病变组织中检测到TPR-met mRNA的过量表达，这揭示了C-met是与胃癌相关的新的原癌基因，国内未见在胃癌临床病理及预后方面的报道. 我们检测胃粘膜癌前及癌变时C-met基因的表达及与临床病理特征的关系，并探讨C-met与胃癌预后的关系.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 收集1990/1994北京医科大学病理科归档蜡块共169例，男98例，女71例，平均年龄57.2岁. 其中浅表性胃炎17例，萎缩性胃炎38例，肠上皮化生33例，异型增生31例，早期胃癌12例及进展期胃癌38例. 诊断依据中国常见肿瘤诊治规范[2]的标准进行. 50例胃癌，均为手术切除归档蜡块，按Lauren分型：肠型31例，弥漫型19例. 胃癌病例术前均未接受化疗和放疗，并作5a随访. 抗met基因蛋白抗体为鼠抗人单克隆抗体(S-19)，为Santa Cruz，CA产品，免疫组化试剂盒为美国Zymed公司产品(CH99-7501).
1.2 方法 应用链霉菌素-生物素免疫组化染色(S-P)法，工作稀释度1∶100，以PBS代替一抗为阴性对照，以已知C-met蛋白阳性的胃癌为阳性对照. 结果以腺上皮细胞膜(主要是腺腔面) 出现棕黄色颗粒为C-met基因蛋白表达阳性，可伴胞质着色. 以同一切片阳性细胞>30%同类病变细胞为阳性病例，阳性细胞30%～50%为(+)，50%～80%为(++)，>80%为(+++).
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统计学处理 计数资料用χ2 检验，计量资料用t检验，应用log-rank检验两组生存率.
2 结果
2.1 不同胃粘膜病变C-met蛋白表达 C-met原癌基因的阳性表达部位在胃粘膜表面粘液上皮和胃腺小凹上皮的胞膜，特别是腺细胞的腔面膜上，而单纯慢性胃炎粘膜，阳性表达部位主要集中于腺颈部. 由表1结果可见，从浅表性胃炎→萎缩性胃炎→肠化生→异型增生→早期胃癌→进展期胃癌的胃粘膜增殖恶化演变中，C-met蛋白的阳性表达也从(-)→(+)→(++)→(+++)递增，经病变程度与C-met表达强度的密切关系分析，χ2=20.09，列联系数phi coefficient=0.696, P<0.01(表1)，说明两者之间有非常显著关联性.
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2.2 C-met蛋白表达与临床病理特征的关系 C-met蛋白的表达与胃癌的组织类型、浆膜浸润与否，是否淋巴结转移及临床分期有密切相关，Borrmann Ⅳ表达明显高于早期胃癌及Borrmann Ⅰ, Ⅱ, 而与肝是否有转移无关(表2).
2.3 C-met蛋白表达与胃癌预后的关系 胃癌50例，C-met蛋白表达阳性36例，阴性14例，以生命表法计算生存率并绘制kaplan-Meier曲线(图1)，经log-rank检验两组生存率有显著性差异(P<0.01).
图1 Kaplan-Meier生存曲线检测结果.
表1 不同胃粘膜病变中C-met蛋白免疫组化结果(n)
, 百拇医药
aP<0.05, bP>0.01, vs 浅表性胃炎.
表2 C-met蛋白表达与临床病例特征的关系
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aP<0.05, bP<0.01, vs 组内.
3 讨论
Northern Blot分析表明，C-met原癌基因选择型地表达在人类的某些上皮组织，如肝、肾、甲状腺和消化道上皮等，免疫组化研究见C-met基因蛋白表达主要出现于肝细胞、胆管上皮、胃粘膜上皮[3]. 本组病例浅表性胃炎C-met基因表达率较低，而随着病变从肠化→异型→癌变演变，阳性表达逐步升高，以进展期胃癌更显著，同时胃粘膜增殖程度与C-met阳性表达强度密切关系分析，两者有显著关联性，表明C-met蛋白表达反映胃粘膜细胞的增殖状态并具有恶变倾向. 郭飞et al[4]研究了110例胃癌前病变和C-met表达，结果也发现随着胃粘膜病变的进展，C-met过量表达率逐渐升高. 因此，C-met原癌基因蛋白的过量表达是与胃癌发生相关的基因异常.通过促进有丝分裂的肝细胞生长因子(HGF)作为配体，可使C-met受体的酪氨酸激酶磷酸化，从而促使细胞有丝分裂、细胞动力和向腺上皮形态分化，导致癌细胞浸润和增殖，同时C-met基因的激活是第7对染色体上第1至第5位点的重排而扩增所致[5]. 我们研究表明，弥漫型胃癌C-met蛋白表达显著高于肠型胃癌，符合弥漫型胃癌恶性度高的特性. 同时也发现C-met过度表达与胃癌浸润浆膜和淋巴结转移有关，而且Borrmann Ⅳ的阳性表达也明显高于早期及Borrmann Ⅰ,Ⅱ期，说明胃癌进展越晚期恶性越高，C-met蛋白表达就越高，国外学者[6,7]也报道C-met的表达与淋巴结转移和肿瘤浸润深度密切相关，与我们结果一致.
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胃癌C-met的阳性表达在预后方面尚未见报道，我们在50例术后5a随访证实C-met(+)者生存率明显低于C-met(-)者，说明C-met(+)表达者预后较差. 虽然癌基因的突变导致恶性肿瘤恶化的机制尚未明确，但是我们的研究表明C-met原癌基因的突变可作为判断胃癌预后的一个新的重要指标.
4 参考文献
1 Soman NR, Correa P, Ruiz BA, Wogan GN. The TPR-MET oncogenic rearrangement is present and expressed in human
gastric carcinoma and precursor lesions. Proc Natl Acad Sci USA, 1991;88:4892-4896
, http://www.100md.com
2 全国肿瘤防治办公室，中国抗癌协会合编. 中国常见恶性肿瘤诊治规范第4分册胃癌. 北京：北京医科大学中国协和医科大学联合
出版社, 1991:18-39
3 Prat M, Narsimhan RP, Crepaldi T, Nicotra MR, Natali PG,Comoglio PM. The receptor encoded by the human c-MET oncogene
is expressed in hepatocytes, epithelial cells and solid tumors. Int J Cancer, 1991;49:323-328
4 郭飞, 胡伏莲, 贾博琦. 幽门螺杆菌感染者胃粘膜癌前病变与C-met原癌基因蛋白表达的关系. 中华医学杂志, 1998;78:488-489
, 百拇医药
5 Kuniyasu H, Yasui W, Yokozaki H,Kitadai Y, Tahara E. Aberrant expression of c-met mRNA in human gastric carcinomas.
Int J Cancer, 1993;55:72-75
6 Kuniyasu H, Yasui W, Kitadai Y, Yokozaki H, Ito H，Tahara E. Frequent amplification of the c-met gene in scirrhous type
stomach cancer. Biochem Biophys Res Commun, 1992;189:227-232
7 Nakajima M, Sawada H, Yamada Y, Watanabe A, Tatsumi M, Yamashita J, Matsuda M, Sakaguchi T, Hirao T, Nakano H. The
prognostic significance of amplification and overexpression of c-met and c-erb B-2 in human gastric carcinomas.
Cancer, 1999;85:1894-1902, http://www.100md.com(庄小强1 林三仁2 郑 杰2 孙桂华1 李 燕2)
2北京医科大学第三医院消化科
项目负责人 庄小强，510010，广东省广州市流花路111号.
收稿日期 2000-03-04 接收日期 2000-04-06
Subject headings gene expression; gastric mucosa; stomach neoplasms; immunohistochemistry; prognosis;
polymerase chain reaction
, 百拇医药
主题词 基因表达；胃粘膜；胃肿瘤；免疫组织化学；预后；聚合酶链反应
庄小强,林三仁,郑杰,孙桂华,李燕. 胃粘膜病变与C-met原癌基因表达的关系及预后研究. 世界华人消化杂志，2000；8(6)：711-712
目前认识到胃粘膜癌变极其复杂，涉及多种原癌基因的激活和抑癌基因的失活. 最近Soman et al[1]应用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法在胃癌活检的不同病变组织中检测到TPR-met mRNA的过量表达，这揭示了C-met是与胃癌相关的新的原癌基因，国内未见在胃癌临床病理及预后方面的报道. 我们检测胃粘膜癌前及癌变时C-met基因的表达及与临床病理特征的关系，并探讨C-met与胃癌预后的关系.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 收集1990/1994北京医科大学病理科归档蜡块共169例，男98例，女71例，平均年龄57.2岁. 其中浅表性胃炎17例，萎缩性胃炎38例，肠上皮化生33例，异型增生31例，早期胃癌12例及进展期胃癌38例. 诊断依据中国常见肿瘤诊治规范[2]的标准进行. 50例胃癌，均为手术切除归档蜡块，按Lauren分型：肠型31例，弥漫型19例. 胃癌病例术前均未接受化疗和放疗，并作5a随访. 抗met基因蛋白抗体为鼠抗人单克隆抗体(S-19)，为Santa Cruz，CA产品，免疫组化试剂盒为美国Zymed公司产品(CH99-7501).
1.2 方法 应用链霉菌素-生物素免疫组化染色(S-P)法，工作稀释度1∶100，以PBS代替一抗为阴性对照，以已知C-met蛋白阳性的胃癌为阳性对照. 结果以腺上皮细胞膜(主要是腺腔面) 出现棕黄色颗粒为C-met基因蛋白表达阳性，可伴胞质着色. 以同一切片阳性细胞>30%同类病变细胞为阳性病例，阳性细胞30%～50%为(+)，50%～80%为(++)，>80%为(+++).
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统计学处理 计数资料用χ2 检验，计量资料用t检验，应用log-rank检验两组生存率.
2 结果
2.1 不同胃粘膜病变C-met蛋白表达 C-met原癌基因的阳性表达部位在胃粘膜表面粘液上皮和胃腺小凹上皮的胞膜，特别是腺细胞的腔面膜上，而单纯慢性胃炎粘膜，阳性表达部位主要集中于腺颈部. 由表1结果可见，从浅表性胃炎→萎缩性胃炎→肠化生→异型增生→早期胃癌→进展期胃癌的胃粘膜增殖恶化演变中，C-met蛋白的阳性表达也从(-)→(+)→(++)→(+++)递增，经病变程度与C-met表达强度的密切关系分析，χ2=20.09，列联系数phi coefficient=0.696, P<0.01(表1)，说明两者之间有非常显著关联性.
, http://www.100md.com
2.2 C-met蛋白表达与临床病理特征的关系 C-met蛋白的表达与胃癌的组织类型、浆膜浸润与否，是否淋巴结转移及临床分期有密切相关，Borrmann Ⅳ表达明显高于早期胃癌及Borrmann Ⅰ, Ⅱ, 而与肝是否有转移无关(表2).
2.3 C-met蛋白表达与胃癌预后的关系 胃癌50例，C-met蛋白表达阳性36例，阴性14例，以生命表法计算生存率并绘制kaplan-Meier曲线(图1)，经log-rank检验两组生存率有显著性差异(P<0.01).
图1 Kaplan-Meier生存曲线检测结果.
表1 不同胃粘膜病变中C-met蛋白免疫组化结果(n)
| 分组 | n | C-met蛋白表达 | 阳性率(%) | |||
| - | + | ++ | +++ | |||
| 浅表性胃炎 | 17 | 13 | 2 | 2 | 0 | 23.5 |
| 萎缩性胃炎 | 38 | 24 | 4 | 9 | 1 | 36.8 |
| 肠化生 | 33 | 11 | 6 | 7 | 4 | 51.5a |
| 异型增生 | 31 | 12 | 6 | 8 | 5 | 61.3a |
| 早期胃癌 | 12 | 4 | 2 | 4 | 2 | 66.7a |
| 进展期胃癌 | 38 | 10 | 9 | 11 | 8 | 73.7b |
, 百拇医药
aP<0.05, bP>0.01, vs 浅表性胃炎.
表2 C-met蛋白表达与临床病例特征的关系
| 病理特征 | n | 阳性例数(%) |
| 组织类型 | ||
| 肠型 | 31 | 19 (62.3) |
| 弥漫型 | 19 | 17 (89.4)a |
| 浆膜浸润 | ||
| + | 30 | 24 (80.0) |
| - | 22 | 12 (60.0)b |
| 淋巴结转移 | ||
| + | 28 | 23 (82.1) |
| - | 22 | 13 (59.1)b |
| 肝转移 | ||
| + | 14 | 11 (78.5) |
| - | 36 | 25 (69.4) |
| 临床分期 | ||
| 早期胃癌 | 12 | 8 (66.7) |
| Borrmann Ⅰ, Ⅱ | 16 | 11 (68.7) |
| Borrmann Ⅱ | 14 | 10 (71.4) |
| Borrmann Ⅳ | 8 | 7 (87.5)a |
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aP<0.05, bP<0.01, vs 组内.
3 讨论
Northern Blot分析表明，C-met原癌基因选择型地表达在人类的某些上皮组织，如肝、肾、甲状腺和消化道上皮等，免疫组化研究见C-met基因蛋白表达主要出现于肝细胞、胆管上皮、胃粘膜上皮[3]. 本组病例浅表性胃炎C-met基因表达率较低，而随着病变从肠化→异型→癌变演变，阳性表达逐步升高，以进展期胃癌更显著，同时胃粘膜增殖程度与C-met阳性表达强度密切关系分析，两者有显著关联性，表明C-met蛋白表达反映胃粘膜细胞的增殖状态并具有恶变倾向. 郭飞et al[4]研究了110例胃癌前病变和C-met表达，结果也发现随着胃粘膜病变的进展，C-met过量表达率逐渐升高. 因此，C-met原癌基因蛋白的过量表达是与胃癌发生相关的基因异常.通过促进有丝分裂的肝细胞生长因子(HGF)作为配体，可使C-met受体的酪氨酸激酶磷酸化，从而促使细胞有丝分裂、细胞动力和向腺上皮形态分化，导致癌细胞浸润和增殖，同时C-met基因的激活是第7对染色体上第1至第5位点的重排而扩增所致[5]. 我们研究表明，弥漫型胃癌C-met蛋白表达显著高于肠型胃癌，符合弥漫型胃癌恶性度高的特性. 同时也发现C-met过度表达与胃癌浸润浆膜和淋巴结转移有关，而且Borrmann Ⅳ的阳性表达也明显高于早期及Borrmann Ⅰ,Ⅱ期，说明胃癌进展越晚期恶性越高，C-met蛋白表达就越高，国外学者[6,7]也报道C-met的表达与淋巴结转移和肿瘤浸润深度密切相关，与我们结果一致.
, http://www.100md.com
胃癌C-met的阳性表达在预后方面尚未见报道，我们在50例术后5a随访证实C-met(+)者生存率明显低于C-met(-)者，说明C-met(+)表达者预后较差. 虽然癌基因的突变导致恶性肿瘤恶化的机制尚未明确，但是我们的研究表明C-met原癌基因的突变可作为判断胃癌预后的一个新的重要指标.
4 参考文献
1 Soman NR, Correa P, Ruiz BA, Wogan GN. The TPR-MET oncogenic rearrangement is present and expressed in human
gastric carcinoma and precursor lesions. Proc Natl Acad Sci USA, 1991;88:4892-4896
, http://www.100md.com
2 全国肿瘤防治办公室，中国抗癌协会合编. 中国常见恶性肿瘤诊治规范第4分册胃癌. 北京：北京医科大学中国协和医科大学联合
出版社, 1991:18-39
3 Prat M, Narsimhan RP, Crepaldi T, Nicotra MR, Natali PG,Comoglio PM. The receptor encoded by the human c-MET oncogene
is expressed in hepatocytes, epithelial cells and solid tumors. Int J Cancer, 1991;49:323-328
4 郭飞, 胡伏莲, 贾博琦. 幽门螺杆菌感染者胃粘膜癌前病变与C-met原癌基因蛋白表达的关系. 中华医学杂志, 1998;78:488-489
, 百拇医药
5 Kuniyasu H, Yasui W, Yokozaki H,Kitadai Y, Tahara E. Aberrant expression of c-met mRNA in human gastric carcinomas.
Int J Cancer, 1993;55:72-75
6 Kuniyasu H, Yasui W, Kitadai Y, Yokozaki H, Ito H，Tahara E. Frequent amplification of the c-met gene in scirrhous type
stomach cancer. Biochem Biophys Res Commun, 1992;189:227-232
7 Nakajima M, Sawada H, Yamada Y, Watanabe A, Tatsumi M, Yamashita J, Matsuda M, Sakaguchi T, Hirao T, Nakano H. The
prognostic significance of amplification and overexpression of c-met and c-erb B-2 in human gastric carcinomas.
Cancer, 1999;85:1894-1902, http://www.100md.com(庄小强1 林三仁2 郑 杰2 孙桂华1 李 燕2)