消化性疾病Hp感染的IgG-ELISA诊断
1首都医科大学附属安贞医院内科 北京市 100029
2北京联大机械工程学院医务所 北京市 100020
3中国康复中心北京博爱医院内镜室 北京市 100077
项目负责人 王新亚首都医科大学附属安贞医院内科 北京市 100029
收稿日期 2000-01-16 接收日期 2000-02-25
Subject headings Helicobacter pylori
, http://www.100md.com
主题词 螺杆菌，幽门；酶联免疫吸附法
王新亚,路显瑜,张益成,聂斌,郝俊鸣. 消化性疾病Hp感染的IgG-ELISA诊断. 世界华人消化杂志，2000；8(6)：722-723
近年来，国内外迅速发展了Hp检测的血清学方法-ELISA法[1，2]. ELISA法属无创性方法，只需少量静脉血即可进行检测，较之其他方法优点多. 本文探讨采用不同纯化的Hp抗原：幽门螺杆菌可溶性抗原(HPs-Ag)与幽门螺杆菌尿素酶抗原(HPu-Ag)分别包被反应板，并进行ELISA法比较分析和综合评价，旨在选择和建立一种更为简便、快捷、经济、患者又能接受，而且成本和漏诊率均低的Hp感染检测的IgG-ELISA法.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 健康人血清20份，平均年龄35岁；患者血清38份，选自因上消化道不适而行内镜检查者，平均年龄42岁. 上述血清分别系内镜、尿素酶试验和病理染色确定为Hp感染阴性者与Hp感染阳性者. 阴性对照血清选自周岁内的4例正常新生儿混合血清. HPs-Ag由加拿大麦克公司提供，HPu-Ag系从患者胃窦部粘膜分离到6株Hp，经菌落和细菌形态等培养特性，G氏染色和生化反应等确定[3]，参照文献[4，5]方法制备. 由北京生物制剂中心提供协助.
1.2 方法 ①ELISA操作步骤和阳性判定标准. 以棋盘滴定法分别确定各反应浓度，并确定血清稀释度. 其步骤基本同常规间接ELISA，即：用pH 9.4碳酸盐缓冲液稀释抗原，各取100μL包被40孔反应板，戊二醛固定，保温30min，加待测血清100μL，保温1h，洗涤后加羊抗人IgG酶结合物100μL，保温1h，洗涤后加底物(OPD)显色，保温30min，硫酸终止反应. 在酶标仪上面490nm处读取OD值. 每份待检血清均做复孔，并设阴性对照、阳性对照和空白对照. 以阳性对照与阴性对照比值做为质控标准. 以被检血清OD值(P)与阴性对照(N)的比值P/N≥2，判为阳性，否则为阴性. ②ELISA特异性检测(吸收抑制试验). 选择高滴度Hp阳性血清分别与HPs-Ag、空肠弯曲菌可溶性抗原(CJs)进行吸收试验，同时选择Hp阳性血清分别与HPu-Ag、变形杆菌尿素酶进行吸收试验. 以上血清从1∶50至1∶800作倍比稀释，并设阳性血清对照，进行ELISA检测，了解其ELISA反应体系是否存在与Hp的交叉成分.
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2 结果
2.1 吸收抑制试验 HP高滴度阳性血清分别经HPs-Ag和HPu-Ag吸附后，各稀释度血清OD值均有明显下降(平均下降55%以上)；高滴度阳性血清分别经CJs和变形杆菌尿素酶吸附后，前者没有明显变化，后者只在个别稀释度偶有轻度下降. 说明本法对Hp两种抗原有特异性.
2.2 两种不同Hp抗原的IgG-ELISA法患者血清检测结果分析与综合评价 38例患者血清分别采用HPs-Ag和HPu-Ag包被反应板，进行LISA法检测. 结果，其中有37例患者血清HPs-Ag抗体检测阳性，其灵敏度为97.87%，特异性90%，准确性94.83%，阳性预测值94.87%，阴性预测值94.74%；有36例患者血清HPu-Ag抗体检测阳性，其灵敏度为94.74%，特异性95%，准确性94.83%，阳性预测值97.30%，阴性预测值90.48%.
, 百拇医药
3 讨论
选择何种Hp纯化抗原建立ELISA法，是检测结果是否可靠的关键. ELISA法检测之特异性、敏感性与抗原制备处理有密切关系[6，7]. 我们采用Hp两种不同纯化抗原进行ELISA法检测，结果显示：HPu-Ag组特异性(95%)较HPs-Ag组(90%)为高；而HPs-Ag组敏感度(97.37%)较HPu-Ag组(94.74%)为高. HPu-Ag组阳性预测值(97.30%)较HPsAg组阳性预测值(94.87%)为高. 说明前者阳性结果较后者可靠. 而HPsAg组阴性预测值(94.74%)较HPuAg组(90.48%)为高，说明HPsAg组阴性检测结果较为可信. 由于两组精确性相同(94.83%)，而在其他几项比较中，两组无显著差异，作为Hp感染的筛查，为了避免漏诊，宁可选择灵敏度高的一组(HPsAg组)建立ELISA. 此外，HPsAg还具有制备简单、快捷、经济等优点.
, 百拇医药
需要说明的是：有3例(其中1例ELISA两组检测结果存在交叉阳性)经培养和病理染色为阴性，而ELISA结果为阳性，判为假阳性，但也不排除由于培养和病理染色存在活检部位的局限和取样误差，阳性结果未能检出；或者患者既往用过抗生素，有可能培养和病理染色为阴性，而ELISA法抗体检出阳性. 另有3例培养和病理染色为阳性， 而ELISA结果为阴性. 判为假阴性. 但也不能排除患者可能是感染的早期，抗HpIgG尚未出现. 也可能该Hp抗原与普通人群感染的菌株及菌株之间存在着抗原性差异. 这些均有待研究.
4 参考文献
1 Goodwin CS, Blincom E, Peterson G, Sanderson C, Cheng W, Marshall B, Warren JR, Meculloch R. Enzymelinked
, http://www.100md.com
immunosorbent assay of C,pyloridis in the gastric mucosa. J Infect Dis, 1987；155：488-493
2 杨昭徐，卞宗芳，侯曼芩. 在非溃疡性消化不良中ELISA法测抗幽门螺杆菌抗体的临床意义. 首都医学院学报，1992；13：285-289
3 张振华，张德中，李小宾，江绍基，袁美英. 胃粘膜活检标本中弯曲菌样细菌的检出. 中华消化杂志，1985；5：231-233
4 Dent JC, Mcnulty CAM, Uff JS, Gear MWL, Wilkinson SP. Campylobacter pylori urease: A new serological test. Lancet,
1988;1:1002-1003
, 百拇医药
5 Mobley HLT, Cortesia MJ, Rosenthel LE, Jones BD. Characterizaton of Urease form Campylobacter pylori.
J Clin Microbiol, 1988;26:831-835
6 Newell DG, Johnston BJ, Ali MH. An enzymelinked immunosobent assay for the serodiagnosis of
Campylobacter pyloriassociated gastritis. Scand J Gastroenterol, 1988;23(Suppl 142):53-54
7 Santogade PJ, Bokkenheuser VD, Faisal MA, Kotler DP, Scholes JV, Holt PR. Evaluation of METHODS for identification
of Campylobacter pylori infection. New York State J Med, 1990;90:4-7, http://www.100md.com(王新亚1 路显瑜1 张益成1 聂 斌2 郝俊鸣3 )
2北京联大机械工程学院医务所 北京市 100020
3中国康复中心北京博爱医院内镜室 北京市 100077
项目负责人 王新亚首都医科大学附属安贞医院内科 北京市 100029
收稿日期 2000-01-16 接收日期 2000-02-25
Subject headings Helicobacter pylori
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主题词 螺杆菌，幽门；酶联免疫吸附法
王新亚,路显瑜,张益成,聂斌,郝俊鸣. 消化性疾病Hp感染的IgG-ELISA诊断. 世界华人消化杂志，2000；8(6)：722-723
近年来，国内外迅速发展了Hp检测的血清学方法-ELISA法[1，2]. ELISA法属无创性方法，只需少量静脉血即可进行检测，较之其他方法优点多. 本文探讨采用不同纯化的Hp抗原：幽门螺杆菌可溶性抗原(HPs-Ag)与幽门螺杆菌尿素酶抗原(HPu-Ag)分别包被反应板，并进行ELISA法比较分析和综合评价，旨在选择和建立一种更为简便、快捷、经济、患者又能接受，而且成本和漏诊率均低的Hp感染检测的IgG-ELISA法.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 健康人血清20份，平均年龄35岁；患者血清38份，选自因上消化道不适而行内镜检查者，平均年龄42岁. 上述血清分别系内镜、尿素酶试验和病理染色确定为Hp感染阴性者与Hp感染阳性者. 阴性对照血清选自周岁内的4例正常新生儿混合血清. HPs-Ag由加拿大麦克公司提供，HPu-Ag系从患者胃窦部粘膜分离到6株Hp，经菌落和细菌形态等培养特性，G氏染色和生化反应等确定[3]，参照文献[4，5]方法制备. 由北京生物制剂中心提供协助.
1.2 方法 ①ELISA操作步骤和阳性判定标准. 以棋盘滴定法分别确定各反应浓度，并确定血清稀释度. 其步骤基本同常规间接ELISA，即：用pH 9.4碳酸盐缓冲液稀释抗原，各取100μL包被40孔反应板，戊二醛固定，保温30min，加待测血清100μL，保温1h，洗涤后加羊抗人IgG酶结合物100μL，保温1h，洗涤后加底物(OPD)显色，保温30min，硫酸终止反应. 在酶标仪上面490nm处读取OD值. 每份待检血清均做复孔，并设阴性对照、阳性对照和空白对照. 以阳性对照与阴性对照比值做为质控标准. 以被检血清OD值(P)与阴性对照(N)的比值P/N≥2，判为阳性，否则为阴性. ②ELISA特异性检测(吸收抑制试验). 选择高滴度Hp阳性血清分别与HPs-Ag、空肠弯曲菌可溶性抗原(CJs)进行吸收试验，同时选择Hp阳性血清分别与HPu-Ag、变形杆菌尿素酶进行吸收试验. 以上血清从1∶50至1∶800作倍比稀释，并设阳性血清对照，进行ELISA检测，了解其ELISA反应体系是否存在与Hp的交叉成分.
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 吸收抑制试验 HP高滴度阳性血清分别经HPs-Ag和HPu-Ag吸附后，各稀释度血清OD值均有明显下降(平均下降55%以上)；高滴度阳性血清分别经CJs和变形杆菌尿素酶吸附后，前者没有明显变化，后者只在个别稀释度偶有轻度下降. 说明本法对Hp两种抗原有特异性.
2.2 两种不同Hp抗原的IgG-ELISA法患者血清检测结果分析与综合评价 38例患者血清分别采用HPs-Ag和HPu-Ag包被反应板，进行LISA法检测. 结果，其中有37例患者血清HPs-Ag抗体检测阳性，其灵敏度为97.87%，特异性90%，准确性94.83%，阳性预测值94.87%，阴性预测值94.74%；有36例患者血清HPu-Ag抗体检测阳性，其灵敏度为94.74%，特异性95%，准确性94.83%，阳性预测值97.30%，阴性预测值90.48%.
, 百拇医药
3 讨论
选择何种Hp纯化抗原建立ELISA法，是检测结果是否可靠的关键. ELISA法检测之特异性、敏感性与抗原制备处理有密切关系[6，7]. 我们采用Hp两种不同纯化抗原进行ELISA法检测，结果显示：HPu-Ag组特异性(95%)较HPs-Ag组(90%)为高；而HPs-Ag组敏感度(97.37%)较HPu-Ag组(94.74%)为高. HPu-Ag组阳性预测值(97.30%)较HPsAg组阳性预测值(94.87%)为高. 说明前者阳性结果较后者可靠. 而HPsAg组阴性预测值(94.74%)较HPuAg组(90.48%)为高，说明HPsAg组阴性检测结果较为可信. 由于两组精确性相同(94.83%)，而在其他几项比较中，两组无显著差异，作为Hp感染的筛查，为了避免漏诊，宁可选择灵敏度高的一组(HPsAg组)建立ELISA. 此外，HPsAg还具有制备简单、快捷、经济等优点.
, 百拇医药
需要说明的是：有3例(其中1例ELISA两组检测结果存在交叉阳性)经培养和病理染色为阴性，而ELISA结果为阳性，判为假阳性，但也不排除由于培养和病理染色存在活检部位的局限和取样误差，阳性结果未能检出；或者患者既往用过抗生素，有可能培养和病理染色为阴性，而ELISA法抗体检出阳性. 另有3例培养和病理染色为阳性， 而ELISA结果为阴性. 判为假阴性. 但也不能排除患者可能是感染的早期，抗HpIgG尚未出现. 也可能该Hp抗原与普通人群感染的菌株及菌株之间存在着抗原性差异. 这些均有待研究.
4 参考文献
1 Goodwin CS, Blincom E, Peterson G, Sanderson C, Cheng W, Marshall B, Warren JR, Meculloch R. Enzymelinked
, http://www.100md.com
immunosorbent assay of C,pyloridis in the gastric mucosa. J Infect Dis, 1987；155：488-493
2 杨昭徐，卞宗芳，侯曼芩. 在非溃疡性消化不良中ELISA法测抗幽门螺杆菌抗体的临床意义. 首都医学院学报，1992；13：285-289
3 张振华，张德中，李小宾，江绍基，袁美英. 胃粘膜活检标本中弯曲菌样细菌的检出. 中华消化杂志，1985；5：231-233
4 Dent JC, Mcnulty CAM, Uff JS, Gear MWL, Wilkinson SP. Campylobacter pylori urease: A new serological test. Lancet,
1988;1:1002-1003
, 百拇医药
5 Mobley HLT, Cortesia MJ, Rosenthel LE, Jones BD. Characterizaton of Urease form Campylobacter pylori.
J Clin Microbiol, 1988;26:831-835
6 Newell DG, Johnston BJ, Ali MH. An enzymelinked immunosobent assay for the serodiagnosis of
Campylobacter pyloriassociated gastritis. Scand J Gastroenterol, 1988;23(Suppl 142):53-54
7 Santogade PJ, Bokkenheuser VD, Faisal MA, Kotler DP, Scholes JV, Holt PR. Evaluation of METHODS for identification
of Campylobacter pylori infection. New York State J Med, 1990;90:4-7, http://www.100md.com(王新亚1 路显瑜1 张益成1 聂 斌2 郝俊鸣3 )