透明质酸在大鼠肝移植中的应用
中国人民解放军第一军医大学附属珠江医院肝胆外科 广东省广州市 510282
项目负责人 陈建锋中国人民解放军第一军医大学附属珠江医院肝胆外科 广东省广州市 510282
收稿日期 2000-05-05 接收日期 2000-05-16
Subject headings liver transplantation; hyaluronic acid/blood; radioimmunoassay; graft rejection;
reperfusion injury; hyaluronic acid/diagnostic use; rats
主题词 肝移植；透明质酸/血液；放射免疫测定；移植物排斥；再灌注损伤；透明质酸/诊断应用；大鼠
, 百拇医药
陈建锋,高毅,汪爽,蒋泽生. 透明质酸在大鼠肝移植中的应用. 世界华人消化杂志，2000；8(6)：614-615
1 原文的要点
作者应用不同品系的大鼠进行原位肝移植[1]，在肝移植术后不同时间用放免法检测血中透明质酸(HA)的浓度. 比较正常组、同基因移植组、异基因移植组以及异基因移植+环孢酶素A(CsA)组间透明质酸变化的差异，以及各组转氨酶(ALT)和总胆红素(Bilirubin)的变化情况. 结果表明肝移植后血清HA水平与正常组比较有明显升高(P<0.01)；而术后6d排斥反应组HA水平明显高于同基因移植组和异基因移植+CsA组(P<0.01)；ALT和Bilirubin在术后9d才出现明显差异. 作者认为由于急性排斥反应造成肝内皮细胞的损伤，导致HA水平在术后6d时高于其他处理组；连续测定肝移植术后的HA水平有助于排斥反应的早期诊断. 本文立题新颖，构思独特，实验设计比较合理，放免法检测HA浓度特异性强，检测血中HA水平反映移植排斥反应的研究在国内还没有发现有相关报道. 就原文内容提出几点商榷意见：①实验动物品系不纯，SD大鼠以及Wistar大鼠属于封闭群，个体之间差异较大，如能够用近交系大鼠则更具有说服力. ②内源性HA水平与冷缺血保存及再灌注损伤等因素关系密切，在术后数小时至数天内便恢复正常. ③同时检测内源性HA水平和外源性HA短期清除率则更全面地反映机体内移植排斥反应情况. ④统计方法应该列出.
, 百拇医药
2 讨论
透明质酸是由全身成纤维细胞分泌的一种高分子粘多糖，通常血中HA 90%以上在肝窦内皮细胞内分解. 正常肝窦内皮细胞表面有较多的HA受体，血中HA与受体结合后进入内皮细胞，为内皮细胞胞质内溶酶体中的透明质酸酶所分解[2]. 多种因素可以影响血中HA浓度如炎症性疾病、缺血、肝功能不全等.
在大鼠肝移植模型中，由于冷缺血保存以及再灌注损伤对供肝肝窦内皮细胞的损伤远大于对肝细胞的损伤，使肝窦内皮细胞分解HA的能力大为下降，导致血中HA水平在术后数小时之内急剧升高[3-4]. 在同基因移植时，随着缺血再灌注损伤的恢复和肝内皮细胞的再生，一般在术后2d～5d内便恢复正常[5]. 检测血中HA水平及外源性HA清除率可以反映移植肝内皮细胞的功能，是反映移植肝活力的可靠的早期指标[6].
, 百拇医药
目前国外大多应用透明质酸特异性反映肝窦内皮细胞功能的特性，检测肝移植术后透明质酸水平以及外源性透明质酸清除率，研究移植肝的冷缺血保存和再灌注损伤中对肝窦内皮细胞的损害，而用透明质酸早期诊断肝移植免疫排斥反应的研究尚不多见. 作者研究透明质酸与肝移植排斥反应的关系，在学术上处于较领先地位.
如作者所述，在肝移植急性排斥反应中，由于内皮细胞是表达MHC的主要载体，是异基因排斥反应攻击的主要靶细胞. 肝窦内皮细胞较肝细胞更易受到免疫攻击，内皮细胞的损伤也早于肝细胞的损伤. 透明质酸是反映肝窦内皮细胞功能的有效指标，当移植物发生免疫排斥时，肝窦内皮细胞功能下降或缺失，清除透明质酸的能力下降，因而血中透明质酸水平升高. 此时如注入外源性HA，在短时间内检测外源性HA清除率，亦可反映体内免疫排斥的早期情况[7].
由于肝窦内皮细胞所受免疫攻击早于肝细胞，因而反映内皮细胞功能的HA清除率的变化较之反映肝功能变化的指标如ALT、Bilirubin等的变化来的较早，外源性HA清除率较之ALT、Bilirubin等指标能更早地反映出体内的免疫排斥情况[7].
, 百拇医药
在原文中，作者应用放免法单纯检测肝移植术后3，6，9d大鼠血中HA浓度变化，发现异基因移植组发生免疫排斥(6、9d)时血中HA浓度逐步升高，且与同基因组有显著差异，从而得出HA水平有助于排斥反应的早期诊断的结论.
然而，既然透明质酸随着缺血再灌注损伤的恢复和肝内皮细胞的再生，一般在术后2d～5d内便恢复正常[5]，即使在异基因移植中，在移植物急性排斥反应发生之前也应该有下降趋势. 作者却检测出肝移植非排斥组术后3，6，9d大鼠血中HA浓度逐步升高，是否应在移植术后连续检测血中透明质酸水平，来证实术后血中HA水平的变化规律，以区分冷缺血保存、再灌注损伤和急性排斥反应所造成的血HA水平升高在移植物急性排斥反应发生后，由于肝内皮细胞遭受再一次打击，清除透明质酸的能力下降，血中HA水平应该再次升高，而此时注入外源性HA，可以检测出HA清除率较对照组下降. 外源性HA清除率测定能排除体内干扰因素，较单纯测定HA水平更能反映肝内皮细胞的功能.
, http://www.100md.com
本实验设计较为简单，如作如下调整则更能充实原文内容：①应用近交系大鼠，其组内差异小，结论更有说服力，如果应用封闭群大鼠，样本量应该加大. ②肝移植术后连续检测血中透明质酸水平，绘出透明质酸的动态变化曲线，反映肝冷缺血保存、再灌注损伤以及移植再灌注损伤对移植肝肝窦内皮细胞的影响以及作用规律. ③术后5d开始注入外源性透明质酸，检测外源性HA清除率，比较不同处理组间透明质酸清除率的差异，同时比较外源性HA清除率变化与ALT，Bilirubin等指标变化的关系，论证外源性HA清除率优于其他反映肝功能的指标，证实移植免疫排斥时肝窦内皮细胞的损伤早于肝细胞的损伤.
应用透明质酸以及外源性透明质酸清除率检测肝移植术后机体内免疫排斥反应是一项比较新的研究方法. 利用透明质酸特异性反映肝窦内皮细胞功能以及免疫排斥早期攻击肝窦内皮细胞的特性，测定肝移植术后血中透明质酸水平及外源性透明质酸清除率，反映肝移植后机体内急性排斥反应的早期情况，应有相当广阔的应用前景.
, 百拇医药 3 参考文献
1 杜国盛,黄志强,萧荫祺,许红兵,段伟东,黄洁,王燕生. 大鼠血透明质酸检测原位肝移植模型急性排斥反应.
世界华人消化杂志，2000；8：112-113
2 Murawaki Y, Ikuta Y, Nishimura Y, Koda M, Kawasaki H. Serum markers for connective tissue turnover in patients with chronic
hepatitis B and chronic hepatitis C: a comparative analysis. J Hepatol, 1995;23:145-152
, 百拇医药
3 Suehiro T, Boros P, Curtiss S, Mor E, Emre S, Sheiner P, Schwartz ME, Miller CM. Perioperative hyaluronic acid levels in orthotopic
liver transplant recipient. Transplantation Proceedings, 1995;27:1261
4 Schon MR, Kollmar O, Akkoc N, Matthes M, Wolf S, Schrem H, Tominaga M, Keech G, Neuhaus P. Cold ischemia affects
sinusoidal endothelial cells while warm ischemia affects hepatocytes in liver transplantation.
, 百拇医药
Transplantation Proceedings, 1998;30:2318-2320
5 Wang L, Florman S, Roayaie S, Basile J, Zhang ZY, Machac J, Boros P, Miller CM. Differential in vivo recovery of
sinusoidal endothelial cells, hepatocytes, and kupffer cells after cold preservation and liver transplantation in rats.
Transplantation, 1998;66:573-578
6 Soejima Y, Yanaga K, Wakiyama S, Nishizaki T, Yoshizumi T, Sugimachi K. Serum hyaluronic acid as a reliable parameter of
, http://www.100md.com
allograft viability in porcine liver transplantation. Hepatogastroenterology, 1996;43:590-595
7 Shimizu H, He W, Guo P, Dziadkoviec I, Miyazaki M, Falk RE. Serum hyaluronate in the assessment of liver endothelial cell function
after orthotopic liver transplantation in the rat. Hepatology, 1994;20:1323-1329, 百拇医药(陈建锋 高 毅 汪 爽 蒋泽生)
项目负责人 陈建锋中国人民解放军第一军医大学附属珠江医院肝胆外科 广东省广州市 510282
收稿日期 2000-05-05 接收日期 2000-05-16
Subject headings liver transplantation; hyaluronic acid/blood; radioimmunoassay; graft rejection;
reperfusion injury; hyaluronic acid/diagnostic use; rats
主题词 肝移植；透明质酸/血液；放射免疫测定；移植物排斥；再灌注损伤；透明质酸/诊断应用；大鼠
, 百拇医药
陈建锋,高毅,汪爽,蒋泽生. 透明质酸在大鼠肝移植中的应用. 世界华人消化杂志，2000；8(6)：614-615
1 原文的要点
作者应用不同品系的大鼠进行原位肝移植[1]，在肝移植术后不同时间用放免法检测血中透明质酸(HA)的浓度. 比较正常组、同基因移植组、异基因移植组以及异基因移植+环孢酶素A(CsA)组间透明质酸变化的差异，以及各组转氨酶(ALT)和总胆红素(Bilirubin)的变化情况. 结果表明肝移植后血清HA水平与正常组比较有明显升高(P<0.01)；而术后6d排斥反应组HA水平明显高于同基因移植组和异基因移植+CsA组(P<0.01)；ALT和Bilirubin在术后9d才出现明显差异. 作者认为由于急性排斥反应造成肝内皮细胞的损伤，导致HA水平在术后6d时高于其他处理组；连续测定肝移植术后的HA水平有助于排斥反应的早期诊断. 本文立题新颖，构思独特，实验设计比较合理，放免法检测HA浓度特异性强，检测血中HA水平反映移植排斥反应的研究在国内还没有发现有相关报道. 就原文内容提出几点商榷意见：①实验动物品系不纯，SD大鼠以及Wistar大鼠属于封闭群，个体之间差异较大，如能够用近交系大鼠则更具有说服力. ②内源性HA水平与冷缺血保存及再灌注损伤等因素关系密切，在术后数小时至数天内便恢复正常. ③同时检测内源性HA水平和外源性HA短期清除率则更全面地反映机体内移植排斥反应情况. ④统计方法应该列出.
, 百拇医药
2 讨论
透明质酸是由全身成纤维细胞分泌的一种高分子粘多糖，通常血中HA 90%以上在肝窦内皮细胞内分解. 正常肝窦内皮细胞表面有较多的HA受体，血中HA与受体结合后进入内皮细胞，为内皮细胞胞质内溶酶体中的透明质酸酶所分解[2]. 多种因素可以影响血中HA浓度如炎症性疾病、缺血、肝功能不全等.
在大鼠肝移植模型中，由于冷缺血保存以及再灌注损伤对供肝肝窦内皮细胞的损伤远大于对肝细胞的损伤，使肝窦内皮细胞分解HA的能力大为下降，导致血中HA水平在术后数小时之内急剧升高[3-4]. 在同基因移植时，随着缺血再灌注损伤的恢复和肝内皮细胞的再生，一般在术后2d～5d内便恢复正常[5]. 检测血中HA水平及外源性HA清除率可以反映移植肝内皮细胞的功能，是反映移植肝活力的可靠的早期指标[6].
, 百拇医药
目前国外大多应用透明质酸特异性反映肝窦内皮细胞功能的特性，检测肝移植术后透明质酸水平以及外源性透明质酸清除率，研究移植肝的冷缺血保存和再灌注损伤中对肝窦内皮细胞的损害，而用透明质酸早期诊断肝移植免疫排斥反应的研究尚不多见. 作者研究透明质酸与肝移植排斥反应的关系，在学术上处于较领先地位.
如作者所述，在肝移植急性排斥反应中，由于内皮细胞是表达MHC的主要载体，是异基因排斥反应攻击的主要靶细胞. 肝窦内皮细胞较肝细胞更易受到免疫攻击，内皮细胞的损伤也早于肝细胞的损伤. 透明质酸是反映肝窦内皮细胞功能的有效指标，当移植物发生免疫排斥时，肝窦内皮细胞功能下降或缺失，清除透明质酸的能力下降，因而血中透明质酸水平升高. 此时如注入外源性HA，在短时间内检测外源性HA清除率，亦可反映体内免疫排斥的早期情况[7].
由于肝窦内皮细胞所受免疫攻击早于肝细胞，因而反映内皮细胞功能的HA清除率的变化较之反映肝功能变化的指标如ALT、Bilirubin等的变化来的较早，外源性HA清除率较之ALT、Bilirubin等指标能更早地反映出体内的免疫排斥情况[7].
, 百拇医药
在原文中，作者应用放免法单纯检测肝移植术后3，6，9d大鼠血中HA浓度变化，发现异基因移植组发生免疫排斥(6、9d)时血中HA浓度逐步升高，且与同基因组有显著差异，从而得出HA水平有助于排斥反应的早期诊断的结论.
然而，既然透明质酸随着缺血再灌注损伤的恢复和肝内皮细胞的再生，一般在术后2d～5d内便恢复正常[5]，即使在异基因移植中，在移植物急性排斥反应发生之前也应该有下降趋势. 作者却检测出肝移植非排斥组术后3，6，9d大鼠血中HA浓度逐步升高，是否应在移植术后连续检测血中透明质酸水平，来证实术后血中HA水平的变化规律，以区分冷缺血保存、再灌注损伤和急性排斥反应所造成的血HA水平升高在移植物急性排斥反应发生后，由于肝内皮细胞遭受再一次打击，清除透明质酸的能力下降，血中HA水平应该再次升高，而此时注入外源性HA，可以检测出HA清除率较对照组下降. 外源性HA清除率测定能排除体内干扰因素，较单纯测定HA水平更能反映肝内皮细胞的功能.
, http://www.100md.com
本实验设计较为简单，如作如下调整则更能充实原文内容：①应用近交系大鼠，其组内差异小，结论更有说服力，如果应用封闭群大鼠，样本量应该加大. ②肝移植术后连续检测血中透明质酸水平，绘出透明质酸的动态变化曲线，反映肝冷缺血保存、再灌注损伤以及移植再灌注损伤对移植肝肝窦内皮细胞的影响以及作用规律. ③术后5d开始注入外源性透明质酸，检测外源性HA清除率，比较不同处理组间透明质酸清除率的差异，同时比较外源性HA清除率变化与ALT，Bilirubin等指标变化的关系，论证外源性HA清除率优于其他反映肝功能的指标，证实移植免疫排斥时肝窦内皮细胞的损伤早于肝细胞的损伤.
应用透明质酸以及外源性透明质酸清除率检测肝移植术后机体内免疫排斥反应是一项比较新的研究方法. 利用透明质酸特异性反映肝窦内皮细胞功能以及免疫排斥早期攻击肝窦内皮细胞的特性，测定肝移植术后血中透明质酸水平及外源性透明质酸清除率，反映肝移植后机体内急性排斥反应的早期情况，应有相当广阔的应用前景.
, 百拇医药 3 参考文献
1 杜国盛,黄志强,萧荫祺,许红兵,段伟东,黄洁,王燕生. 大鼠血透明质酸检测原位肝移植模型急性排斥反应.
世界华人消化杂志，2000；8：112-113
2 Murawaki Y, Ikuta Y, Nishimura Y, Koda M, Kawasaki H. Serum markers for connective tissue turnover in patients with chronic
hepatitis B and chronic hepatitis C: a comparative analysis. J Hepatol, 1995;23:145-152
, 百拇医药
3 Suehiro T, Boros P, Curtiss S, Mor E, Emre S, Sheiner P, Schwartz ME, Miller CM. Perioperative hyaluronic acid levels in orthotopic
liver transplant recipient. Transplantation Proceedings, 1995;27:1261
4 Schon MR, Kollmar O, Akkoc N, Matthes M, Wolf S, Schrem H, Tominaga M, Keech G, Neuhaus P. Cold ischemia affects
sinusoidal endothelial cells while warm ischemia affects hepatocytes in liver transplantation.
, 百拇医药
Transplantation Proceedings, 1998;30:2318-2320
5 Wang L, Florman S, Roayaie S, Basile J, Zhang ZY, Machac J, Boros P, Miller CM. Differential in vivo recovery of
sinusoidal endothelial cells, hepatocytes, and kupffer cells after cold preservation and liver transplantation in rats.
Transplantation, 1998;66:573-578
6 Soejima Y, Yanaga K, Wakiyama S, Nishizaki T, Yoshizumi T, Sugimachi K. Serum hyaluronic acid as a reliable parameter of
, http://www.100md.com
allograft viability in porcine liver transplantation. Hepatogastroenterology, 1996;43:590-595
7 Shimizu H, He W, Guo P, Dziadkoviec I, Miyazaki M, Falk RE. Serum hyaluronate in the assessment of liver endothelial cell function
after orthotopic liver transplantation in the rat. Hepatology, 1994;20:1323-1329, 百拇医药(陈建锋 高 毅 汪 爽 蒋泽生)